Kupu Whakataki
I tae atu ahau ki hea koe — e titiro ana ki te kaitutei i te 2 i te ata, e matakitaki ana i te riipene e rere ana penei i te poti ngaro i te moana, me te whakaaro mena he mea hanga te "HPLC doo-hickey" hei whakamatautau i taku hinengaro. Mena kei te poauau koe e ngana ana ki te takai i to mahunga ki runga i te chromatography wai mahi teitei (HPLC), kia manawa. Ehara i te mea he pouaka noa nga waahanga utu nui; he kanikani ngawari i waenga i te matū me te ahupūngao.
I roto i te taiwhanga, he maha nga wa e kii ana matou ko te waahanga pūkoro te "raina ora" o te punaha. Ki te kore, kei te noho noa to tauira i roto i te injector, karekau e haere ki hea. Engari me pehea e whiriwhiri ai koe i te "tereina" tika hei kawe i o ngota ngota ki te kairapu? Kia pakaruhia kia rite ki te korerorero mo te kawhe i roto i te whare pakaru.
1. He aha te HPLC, Tino?
I tona uho, HPLC e pā ana ki te wehenga. Whakaarohia he reihi ko te "ara" ko te wahanga mau (te pou) me te "hau" e turaki ana i nga kaiwhai haere ko te wahanga waea hplc.
Ka puta te mahi makutu na te mea he rereke nga momo ngota ngota rereke. Ko etahi ngota ngota e aroha ana ki te wahanga pūkoro me te topa i roto i te pou. Ko etahi atu he "piri"—he kuru ratou ki te waahi e mau ana, ka takamuri ki muri. Ko tenei rereketanga o te tere ko te mea e hanga ana i nga tihi o to chromatogram.
2. Wāhanga Pūnoa vs. Wāhanga Whakamuri
Ko te tikanga tenei ka timata te katoa ki te kumea i o ratou makawe. I roto i aku tau mahi, kua kitea e au te huarahi ngawari ki te mahara ki tenei ko te titiro ki te polarity.
A. Wāhanga Pūnoa Chromatography
Koinei te huarahi "kura tawhito". I roto i te chromatography o te wahanga noa, he polar te wahanga noho—whakaarohia he aukume mo nga ngota ngota polar. Ko te wahanga pūkoro e whakamahia ana e matou i konei he polar-kore, ko te tikanga whakarewa penei i te hexane, heptane ranei.
-
Te Arorau: Ko nga ngota ngota "piri" polar ka mau ki muri e te pou polar. Ka horo tere nga ngota ngota kore-polar me te wahanga pūkoro kore-polar.
-
Te Aki Pro: Mena ka whakanuia e koe te polarity o to wahanga pūkoro (te taapiri i te iti o te isopropanol), ka tere ake te neke o o tauira.
B. Wāhanga Whakamuri Chromatography
I tenei ra, koinei te paerewa koura. Ko te 90% pea o nga mahi ka mahia e au i roto i te taiwhanga ka uru ki te chromatography wahanga whakamuri. Anei, ka hurihia e matou te tuhinga. Ko te poupou he kore-polar (hydrophobic, he rite ki te hinu), a ko te wahanga pūkoro he polar (te tikanga he ranunga o te wai me te methanol me te acetonitrile).
-
Te Ararau: Ka toro atu nga ngota ngota (polar) aroha ki te wai na te mea e kino ana ratou ki te pou hinuhinu. Ka piri nga ngota ngota (kore-polar) ki te poupou penei i te kāpia.
-
He aha te take i pai ai ki a matou: He maamaa, he maamaa, he whakamahi i nga whakarewa wai he maamaa ake te whakahaere.
3. Ko te "Ture koura" o te Kounga Whakarewa
Ka kite koe i "HPLC Grade" i runga i nga tapanga mo tetahi take. Kaua rawa e whakaaro mo te whakamahi i te karaehe ACS me tetahi mea iti iho ranei. He aha? Na te mea ko enei poke "iti" i roto i nga whakarewa o te reanga iti ka kohia ki runga i to pou i roto i te waa, ka mate to whakatau me te hanga i nga tihi wairua.
Whakamahia i nga wa katoa te wai miihini Milli-Q (18.2 MΩ.cm). Mena he "paru" to wai, ka rite to rarangi turanga ki te pae maunga, a ka toru nga ra e ngana ana koe ki te mohio he aha.
4. Te whakaheke me te tātari: Ko nga Kaipatu Mahinga
Ko te hau te hoariri o te wahanga pūkoro hplc. I raro i te pehanga noa, ka memeha te hau i roto i o whakarewa. Engari ka pa ana taua whakarewa ki te pamu, ka mau aua mirumiru ririki ki roto i nga maru taki, i te pūtau kaitirotiro ranei.
-
Ko te Hua: He rereke te rere o te rere, nga raina turanga, me nga wa pupuri neke.
-
Ko te Whakatika: Whakamahia nga kaitapa i roto i te whare, i te sonication\/te filtration korehau mena kei te whakahaere koe i nga whakamatautau tairongo teitei.
Ko te whiriwhiringa kaore he whiringa. Ahakoa nga whakarewa HPLC ka taea te whai matūriki moroiti mai i te mahi whakangao, te potae pounamu ranei. Tātari i ngā wā katoa mā te kiriuhi 0.22µm, 0.45µm rānei i mua i te pā ki tō puna. He mahi 5-meneti ka taea te whakaora i to pou mai i te mate ohorere.
5. Nga Kaipupuri me te Rore Kaata
I roto i te chromatography wāhanga whakamuri, ka whakamahia e matou he parepare kia mau te pH mo nga tauira katoo.
-
Aki Tohu: Mena i whakamahia e koe he parepare i tenei ra, horoia te punaha ki te wai parakore / te ranunga pararopi i mua i to hokinga ki te kainga. Ki te kore koe e mahi, ka maataata aua tote, ka kowhatu i o kekeno papu.
-
Te Rore Kaata: I mohio koe mena he > 8.0 to hplc wahanga pūkoro pH, ka taea e ia te whakakore i nga katote whakarewa mai i nga puna karaihe? Hurihia ki te kowiri tira, ki nga ipu kirihou motuhake ranei i enei keehi.
Kia Tika To Wehenga
Ko te whiwhi tika i te wahanga pūkoro ko te 80% o te pakanga i HPLC. Mena kei te tohe koe ki nga rarangi turanga "shagg carpet", nga koikoi pehanga, nga hua koretake ranei, kaua e moumou i tetahi atu ra ki te whakaaro.
E hia mano nga haora i noho ahau ki te pae ki te rapu raru i enei take tika. I nga wa katoa ka koa ahau ki te whakapuaki i etahi tohutohu "whakamatau taiwhanga" kia hoki mai to kaupapa ki runga i te huarahi.
Tohutoro
-
Snyder, L. R., Kirkland, J. J., & Dolan, J. W. (2011). He Kupu Whakataki ki te Chromatography Liquid Hou. Putanga Tuatoru. John Wiley & Tama. (Ko te "Paerewa Koura" mo te mohio ki nga tikanga wehewehe HPLC).
-
Dolan, J. W. (2002). "Whakaritenga Wāhanga Pūkoro." LCGC Amerika Te Taitokerau, Raupapa Rapanga. (He aratohu whaihua mo te whakaheke hau me te tātari).
-
Aparicio, R. (Ed.). (2013). He pukapuka mo te Arotautanga HPLC. Elsevier. (Nga raraunga matawhānui mo te polarity whakarewa me te kowhiringa buffer i roto i te chromatography wahanga whakamuri).
-
Hangarau Agilent. "He Aratohu Rapanga Rapanga o te Pūnaha HPLC: Te karo i nga Hapa Waa Waea Pukoro." Puna Hangarau Hangarau.
-
Waters Corporation. "Maapono o te Chromatography: Wāhanga Pūnoa vs. Wāhanga Whakamuri." Raupapa Mātauranga.
-
Huihuinga o te Ao mo te Whakakotahitanga (ICH). Q2(R1) Whakamanatanga o nga Tikanga Taatari: Kuputuhi me te Tikanga. (Paerewa mo te ine nui o te waahi me te pumau o te wa pupuri).
Ingarihi
Hainamana
