എച്ച്‌പിഎൽസി സാമ്പിൾ പ്രീട്രീറ്റ്‌മെൻ്റിലേക്കുള്ള സമഗ്ര ഗൈഡ് - ഫിൽട്രേഷൻ, എക്‌സ്‌ട്രാക്ഷൻ, ഡെറിവേറ്റൈസേഷൻ
വാർത്ത
വിഭാഗങ്ങൾ
അന്വേഷണം

HPLC സാമ്പിൾ പ്രീട്രീറ്റ്മെൻ്റ് - ഘട്ടം ഘട്ടമായുള്ള ഗൈഡ്

2025 ഒക്ടോബർ 21
ടാഗുകൾ:

സാമ്പിൾ പ്രീട്രീറ്റ്മെൻ്റ് അവലോകനം

സാമ്പിൾ പ്രീട്രീറ്റ്മെൻ്റിൽ കുത്തിവയ്പ്പിന് മുമ്പുള്ള എല്ലാ പ്രവർത്തനങ്ങളും ഉൾപ്പെടുന്നു. തൂക്കം, ലയിപ്പിക്കൽ, നേർപ്പിക്കൽ എന്നിവ കൂടാതെ, ഇനിപ്പറയുന്ന ഘട്ടങ്ങളും ഇതിൽ ഉൾപ്പെടുന്നു:

  • ഫിൽട്ടറേഷൻ
  • വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ
  • ഡെറിവേറ്റൈസേഷൻ (പ്രീ-കോളം ഡെറിവേറ്റൈസേഷൻ)
  • ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി (കുറഞ്ഞ മർദ്ദത്തിലുള്ള കോളം ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി)

പ്രീട്രീറ്റ്മെൻ്റ് സ്വമേധയാ അല്ലെങ്കിൽ യാന്ത്രികമായി നടത്താം. സാമ്പിൾ പ്രീട്രീറ്റ്മെൻ്റിനെക്കുറിച്ച് നിങ്ങൾക്ക് പരിചിതമാണോ?


ഡെറിവേറ്റൈസേഷൻ

ചില സാമ്പിളുകൾ പ്രീ-ട്രീറ്റ്മെൻ്റിന് ശേഷവും നേരിട്ട് കുത്തിവയ്ക്കാൻ കഴിയില്ല. അൾട്രാവയലറ്റ് അല്ലെങ്കിൽ ഫ്ലൂറസെൻസ് ഡിറ്റക്ടറുകൾ വഴി കണ്ടെത്താവുന്ന അൾട്രാവയലറ്റ് ആഗിരണം അല്ലെങ്കിൽ ഫ്ലൂറസെൻസ് ഇല്ലാതെ സംയുക്തങ്ങൾ നിർമ്മിക്കാൻ ഡെറിവേറ്റൈസേഷൻ ആവശ്യമാണ്.

  • സംവേദനക്ഷമത മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നു
  • വേർപിരിയൽ മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നു (ഗുണനിലവാര മാറ്റം)

സാധ്യമായ പ്രശ്നങ്ങളിൽ സാമ്പിൾ നഷ്ടം, മലിനീകരണം, അപൂർണ്ണമായ പ്രതികരണങ്ങൾ അല്ലെങ്കിൽ ഒന്നിലധികം ഉപോൽപ്പന്നങ്ങൾ എന്നിവ ഉൾപ്പെടുന്നു, ഇത് കൃത്യതയെ ബാധിക്കുകയോ പിശകുകൾ അവതരിപ്പിക്കുകയോ ചെയ്യാം.

സാമ്പിൾ ഫിൽട്ടറേഷൻ

LC സാമ്പിളുകൾ ഏകീകൃതവും കണികാ രഹിതവുമായിരിക്കണം; കണികകൾ ഇൻജക്റ്ററിന് കേടുവരുത്തുകയോ നിരയെ തടയുകയോ ചെയ്യാം. ഘട്ടങ്ങളിൽ ഇവ ഉൾപ്പെടുന്നു:

  • കുത്തിവയ്പ്പിന് മുമ്പ് സാമ്പിൾ കുലുക്കുക, കണികകൾ, പ്രക്ഷുബ്ധത അല്ലെങ്കിൽ എമൽഷനുകൾ എന്നിവ പരിശോധിക്കുക
  • കണങ്ങൾ നിരീക്ഷിക്കുകയാണെങ്കിൽ, ≥0.15μm കണങ്ങളെ നിലനിർത്താൻ കഴിയുന്ന ഒരു മെംബ്രൺ ഉപയോഗിച്ച് സാമ്പിൾ ഫിൽട്ടർ ചെയ്യുക

സാധ്യമായ പ്രശ്‌നങ്ങൾ: സാമ്പിൾ മലിനീകരണം, ഘടക സാന്ദ്രത കുറയ്ക്കുന്ന അഡ്‌സോർപ്ഷൻ, പിശകുകൾക്ക് കാരണമാകുന്ന ലായക ബാഷ്പീകരണം.

വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ രീതികൾ

എക്‌സ്‌ട്രാക്ഷൻ, സഹ-ലായകങ്ങളിൽ നിന്ന് വിശകലനങ്ങളെ വേർതിരിക്കുന്നു അല്ലെങ്കിൽ തടസ്സപ്പെടുത്തുന്ന പദാർത്ഥങ്ങളെ നീക്കംചെയ്യുന്നു (ഉദാ. പ്രോട്ടീനുകൾ). ഓർഗാനിക് ലായകങ്ങൾ കുറഞ്ഞ വിഷാംശം, അസ്ഥിരമായ, മാലിന്യങ്ങൾ കുറഞ്ഞതും സാമ്പിൾ നന്നായി അലിയിക്കുന്നതുമായിരിക്കണം.

സാധാരണ ലായകങ്ങൾ: ഡൈതൈൽ ഈഥർ, എഥൈൽ അസറ്റേറ്റ്, ഡൈക്ലോറോമീഥെയ്ൻ, ക്ലോറോഫോം, ബെൻസീൻ അല്ലെങ്കിൽ മിശ്രിതങ്ങൾ.

വേർതിരിച്ചെടുത്ത ശേഷം, സാമ്പിളുകൾ നേരിട്ട് കുത്തിവയ്ക്കുകയോ അല്ലെങ്കിൽ സാന്ദ്രീകരിക്കുകയോ ചെയ്യാം, ഇത് വിശകലനത്തിൻ്റെ സാന്ദ്രതയും സംവേദനക്ഷമതയും വർദ്ധിപ്പിക്കും.

വെള്ളത്തിൽ ലയിക്കുന്ന സാമ്പിൾ എക്സ്ട്രാക്ഷൻ

  1. അസിഡിക് ഘടകങ്ങളും ലവണങ്ങളും: ഓർഗാനിക് ലായനി ഉപയോഗിച്ച് മാലിന്യങ്ങൾ വേർതിരിച്ചെടുക്കുക, അസിഡിറ്റിയിലേക്ക് ക്രമീകരിക്കുക, തുടർന്ന് വേർതിരിച്ചെടുക്കുക അല്ലെങ്കിൽ കുത്തിവയ്ക്കുക; അല്ലെങ്കിൽ N₂ കീഴിൽ ഉണക്കി, കുത്തിവയ്പ്പിന് മുമ്പ് ഉചിതമായ ലായകത്തിൽ ലയിപ്പിക്കുക.
  2. അടിസ്ഥാന ഘടകങ്ങളും ലവണങ്ങളും: ജൈവ ലായകങ്ങൾ ഉപയോഗിച്ച് മാലിന്യങ്ങൾ വേർതിരിച്ചെടുക്കുക, അടിസ്ഥാനത്തിലേക്ക് ക്രമീകരിക്കുക, തുടർന്ന് വേർതിരിച്ചെടുക്കുക അല്ലെങ്കിൽ കുത്തിവയ്ക്കുക; അല്ലെങ്കിൽ N₂ കീഴിൽ ഉണക്കി, കുത്തിവയ്പ്പിന് മുമ്പ് ഉചിതമായ ലായകത്തിൽ ലയിപ്പിക്കുക.
  3. ന്യൂട്രൽ ഘടകങ്ങൾ: ഓർഗാനിക് ലായനി ഉപയോഗിച്ച് മാലിന്യങ്ങൾ വേർതിരിച്ചെടുക്കുക, തുടർന്ന് റിവേഴ്സ്ഡ്-ഫേസ് ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി ഉപയോഗിച്ച് നേരിട്ട് വിശകലനം ചെയ്യുക.


കൊഴുപ്പ് ലയിക്കുന്ന സാമ്പിൾ എക്സ്ട്രാക്ഷൻ

ഓർഗാനിക് ലായനി ഉപയോഗിച്ച് വേർതിരിച്ചെടുക്കുക അല്ലെങ്കിൽ നേരിട്ട് കുത്തിവയ്ക്കുക; അല്ലെങ്കിൽ N₂ കീഴിൽ ഉണക്കി, കുത്തിവയ്പ്പിന് മുമ്പ് ഉചിതമായ ലായകത്തിൽ ലയിപ്പിക്കുക.


മലിനീകരണ സ്രോതസ്സുകൾ

വിശകലനത്തിൽ മലിനീകരണത്തിൻ്റെ സാധ്യതയുള്ള ഉറവിടങ്ങൾ:

മലിനീകരണ തരം

ഉറവിടം

പ്രതിരോധ നടപടികൾ

പരിസ്ഥിതി

ഹാനികരമായ വാതകങ്ങൾ, പൊടി, എയറോസോൾ

ഇൻസ്ട്രുമെൻ്റ് റൂം വൃത്തിയായി സൂക്ഷിക്കുക; എസി ഇൻസ്റ്റാൾ ചെയ്യുക; ഈർപ്പം നിയന്ത്രിക്കുക <70%; ഈർപ്പം, നാശം, വൈബ്രേഷൻ എന്നിവ തടയുക

കണ്ടെയ്നറുകൾ

ഗ്ലാസ്, സെറാമിക്, ക്വാർട്സ്, പ്ലാസ്റ്റിക് ലാബ്വെയർ

സാമ്പിൾ തരത്തിന് അനുയോജ്യമായ പാത്രങ്ങൾ തിരഞ്ഞെടുക്കുക; നന്നായി വൃത്തിയാക്കുക

റിയാഗൻ്റുകൾ

നോൺ-ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി-ഗ്രേഡ് റിയാഗൻ്റുകൾ

ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി-ഗ്രേഡ്, ഹൈ-പ്യൂരിറ്റി അല്ലെങ്കിൽ അനലിറ്റിക്കൽ-ഗ്രേഡ് റിയാഗൻ്റുകൾ ഉപയോഗിക്കുക


സ്റ്റാൻഡേർഡ് സൊല്യൂഷൻ തയ്യാറാക്കൽ

  • ആദ്യം ആന്തരിക സ്റ്റാൻഡേർഡ് പരിഹാരം തയ്യാറാക്കുക; പിശകുകൾ കുറയ്ക്കുന്നതിന് മാനദണ്ഡങ്ങളിലും സാമ്പിളുകളിലും ഒരേ ബാച്ച് ഉപയോഗിക്കുക
  • പദാർത്ഥങ്ങൾ ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി ഗ്രേഡും സ്ഥിരതയുള്ളതുമായിരിക്കണം
  • കുറഞ്ഞ താപനിലയിൽ തവിട്ട് കുപ്പികളിൽ സാധാരണ പരിഹാരങ്ങൾ സൂക്ഷിക്കുക
  • വിറ്റാമിനുകൾക്കായി, ബ്രൗൺ വോള്യൂമെട്രിക് ഫ്ലാസ്കുകൾ ഉപയോഗിക്കുക അല്ലെങ്കിൽ പ്രകാശത്തിൽ നിന്ന് സംരക്ഷിക്കുക


സാമ്പിൾ പ്രീട്രീറ്റ്മെൻ്റിലും പരിഹാരങ്ങളിലും പൊതുവായ പ്രശ്നങ്ങൾ

പ്രശ്നം

കാരണം

പരിഹാരം

ക്രോമാറ്റോഗ്രാമിൽ ബന്ധമില്ലാത്ത കൊടുമുടികൾ

ഫിൽട്ടർ മലിനീകരണം

  1. സാമ്പിൾ ലായകത്തിൽ ഫിൽട്ടർ മുക്കി, കുത്തിവയ്പ്പ് പരിശോധിക്കുക

  2. ഫിൽട്ടർ തരം മാറ്റുക

  3. ഇതര ക്ലീനിംഗ് ടെക്നിക്കുകൾ ഉപയോഗിക്കുക

കുറഞ്ഞ പീക്ക് പ്രതികരണം (പ്രത്യേകിച്ച് കുറഞ്ഞ സാന്ദ്രതയുള്ള സാമ്പിളുകൾ)

ഫിൽട്ടർ ഉപരിതലത്തിൽ ആഗിരണം

  1. ഫിൽട്ടർ തരം മാറ്റുക

  2. എല്ലാ സാമ്പിളുകളും ഒരേ വ്യവസ്ഥകളിൽ പ്രോസസ്സ് ചെയ്യുക

  3. ഇതര ക്ലീനിംഗ് ടെക്നിക്കുകൾ ഉപയോഗിക്കുക

കുറഞ്ഞ വീണ്ടെടുക്കൽ

അപൂർണ്ണമായ വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ

  1. വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ സമയം വർദ്ധിപ്പിക്കുക, ചൂടുള്ള ലായക ഉപയോഗിക്കുക

  2. ക്ലീനിംഗ് രീതി ക്രമീകരിക്കുക

വിശാലമായ കൊടുമുടികൾ, ചുരുക്കിയ കോളത്തിൻ്റെ ആയുസ്സ്

സാമ്പിൾ ഇടപെടലും മലിനീകരണവും

വൃത്തിയാക്കൽ രീതി മെച്ചപ്പെടുത്തുക

മോശം കൃത്യത

അപൂർണ്ണമായ വീണ്ടെടുക്കൽ

  1. ഡെറിവേറ്റൈസേഷൻ, വേർതിരിക്കൽ, വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ അല്ലെങ്കിൽ മറ്റ് വ്യവസ്ഥകൾ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുക അല്ലെങ്കിൽ മാറ്റിസ്ഥാപിക്കുക

  2. കൃത്യത മെച്ചപ്പെടുത്താൻ ഓട്ടോമേറ്റഡ് ഹാൻഡ്ലിംഗ് ഉപയോഗിക്കുക

അന്വേഷണം