ഒഴുക്ക് മാസ്റ്ററിംഗ്: HPLC മൊബൈൽ ഘട്ടങ്ങളിലേക്കുള്ള ഒരു ലാബ് വെറ്ററൻസ് ഗൈഡ്

ആമുഖം

നിങ്ങൾ എവിടെയായിരുന്നാലും ഞാൻ ഉണ്ടായിരുന്നു-രാവിലെ 2 മണിക്ക് ഒരു മോണിറ്ററിൽ ഉറ്റുനോക്കുന്നു, കടലിൽ നഷ്ടപ്പെട്ട ബോട്ട് പോലെയുള്ള ഒരു ബേസ്‌ലൈൻ ഡ്രിഫ്റ്റ് കാണുന്നു, "HPLC ഡൂ-ഹിക്കി" എൻ്റെ വിവേകം പരീക്ഷിക്കാൻ വേണ്ടി മാത്രം കണ്ടുപിടിച്ചതാണോ എന്ന് ആശ്ചര്യപ്പെടുന്നു. ഹൈ പെർഫോമൻസ് ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി (HPLC) ഉപയോഗിച്ച് തലയിൽ ചുറ്റിപ്പിടിക്കാൻ ശ്രമിക്കുന്നത് നിങ്ങൾക്ക് വ്യാമോഹം തോന്നുന്നുവെങ്കിൽ, ഒന്ന് ശ്വാസം എടുക്കുക. ഇത് വിലയേറിയ ഭാഗങ്ങളുടെ ഒരു പെട്ടി മാത്രമല്ല; രസതന്ത്രത്തിനും ഭൗതികശാസ്ത്രത്തിനും ഇടയിലുള്ള ഒരു അതിലോലമായ നൃത്തമാണിത്.

ലാബിൽ, മൊബൈൽ ഘട്ടം സിസ്റ്റത്തിൻ്റെ "ലൈഫ് ലൈൻ" ആണെന്ന് ഞങ്ങൾ പലപ്പോഴും പറയുന്നു. അതില്ലാതെ, നിങ്ങളുടെ സാമ്പിൾ ഒരു ഇൻജക്ടറിൽ ഇരിക്കുകയാണ്, എവിടെയും പോകുന്നില്ല. എന്നാൽ നിങ്ങളുടെ തന്മാത്രകൾ ഡിറ്റക്ടറിലേക്ക് കൊണ്ടുപോകാൻ ശരിയായ "ട്രെയിൻ" എങ്ങനെ തിരഞ്ഞെടുക്കാം? ബ്രേക്ക്‌റൂമിൽ ഒരു കാപ്പി കുടിക്കുന്നത് പോലെ നമുക്ക് ഇത് തകർക്കാം.

1. എന്താണ് HPLC, ശരിക്കും?

അതിൻ്റെ കേന്ദ്രത്തിൽ, HPLC വേർപിരിയലിനെക്കുറിച്ചാണ്. "ട്രാക്ക്" എന്നത് നിശ്ചലമായ ഘട്ടവും (കോളം) ഓട്ടക്കാരെ മുന്നോട്ട് നയിക്കുന്ന "കാറ്റ്" hplc മൊബൈൽ ഘട്ടവുമാകുന്ന ഒരു ഓട്ടം പോലെ ചിന്തിക്കുക.

വ്യത്യസ്‌ത തന്മാത്രകൾക്ക് വ്യത്യസ്‌ത "അനുബന്ധങ്ങൾ" ഉള്ളതുകൊണ്ടാണ് മാജിക് സംഭവിക്കുന്നത്. ചില തന്മാത്രകൾ മൊബൈൽ ഘട്ടത്തെ ഇഷ്ടപ്പെടുകയും കോളത്തിലൂടെ സൂം ചെയ്യുകയും ചെയ്യുന്നു. മറ്റുള്ളവ "ഒട്ടിപ്പിടിക്കുന്നവയാണ്" - അവയ്ക്ക് നിശ്ചല ഘട്ടത്തിൽ ഒരു ക്രഷ് ഉണ്ട്, അവ പിന്നിലാണ്. വേഗതയിലെ ഈ വ്യത്യാസമാണ് നിങ്ങളുടെ ക്രോമാറ്റോഗ്രാമിൽ ആ കൊടുമുടികൾ സൃഷ്ടിക്കുന്നത്.

2. നോർമൽ ഫേസ് വേഴ്സസ് റിവേഴ്സ് ഫേസ്

സാധാരണയായി എല്ലാവരും മുടി പുറത്തെടുക്കാൻ തുടങ്ങുന്നത് ഇവിടെയാണ്. എൻ്റെ വർഷങ്ങളുടെ പരിശീലനത്തിൽ, ധ്രുവീയത നോക്കുക എന്നതാണ് ഇത് ഓർത്തിരിക്കാനുള്ള ഏറ്റവും എളുപ്പ മാർഗം.

എ. സാധാരണ ഘട്ടം ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി

ഇതാണ് "പഴയ സ്കൂൾ" രീതി. സാധാരണ ഘട്ടം ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിയിൽ, നിശ്ചല ഘട്ടം ധ്രുവമാണ്-ധ്രുവ തന്മാത്രകൾക്കുള്ള ഒരു കാന്തം പോലെ ഇതിനെ കരുതുക. ഞങ്ങൾ ഇവിടെ ഉപയോഗിക്കുന്ന മൊബൈൽ ഫേസ് നോൺ-പോളാർ ആണ്, സാധാരണയായി ഹെക്സെയ്ൻ അല്ലെങ്കിൽ ഹെപ്റ്റെയ്ൻ പോലുള്ള ലായകങ്ങളാണ്.

• ലോജിക്: പോളാർ "സ്റ്റിക്കി" തന്മാത്രകളെ ധ്രുവ നിരയിൽ തടഞ്ഞുനിർത്തുന്നു. നോൺ-പോളാർ മൊബൈൽ ഫേസ് ഉപയോഗിച്ച് നോൺ-പോളാർ തന്മാത്രകൾ വേഗത്തിൽ കഴുകി കളയുന്നു.

• പ്രോ നുറുങ്ങ്: നിങ്ങളുടെ മൊബൈൽ ഘട്ടത്തിൻ്റെ ധ്രുവീയത വർദ്ധിപ്പിക്കുകയാണെങ്കിൽ (അൽപ്പം ഐസോപ്രോപനോൾ ചേർക്കുക), നിങ്ങളുടെ സാമ്പിളുകൾ യഥാർത്ഥത്തിൽ വേഗത്തിൽ നീങ്ങും.

B. റിവേഴ്സ് ഫേസ് ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി

ഇന്ന്, ഇതാണ് സ്വർണ്ണ നിലവാരം. ലാബിൽ ഞാൻ ചെയ്യുന്ന ജോലിയുടെ 90% റിവേഴ്സ് ഫേസ് ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി ഉൾപ്പെട്ടിരിക്കാം. ഇവിടെ, ഞങ്ങൾ സ്ക്രിപ്റ്റ് ഫ്ലിപ്പുചെയ്യുന്നു. കോളം നോൺ-പോളാർ ആണ് (എണ്ണ പോലെ ഹൈഡ്രോഫോബിക്), ഫേസ് മൊബൈൽ ധ്രുവമാണ് (സാധാരണയായി വെള്ളം, മെഥനോൾ അല്ലെങ്കിൽ അസെറ്റോണിട്രൈൽ എന്നിവയുടെ മിശ്രിതം).

• ലോജിക്: ജലത്തെ സ്നേഹിക്കുന്ന (ധ്രുവ) തന്മാത്രകൾ എണ്ണമയമുള്ള നിരയെ വെറുക്കുന്നതിനാൽ സൂം ചെയ്യുന്നു. കൊഴുപ്പ് ഇഷ്ടപ്പെടുന്ന (ധ്രുവീയമല്ലാത്ത) തന്മാത്രകൾ പശ പോലെ നിരയിൽ പറ്റിനിൽക്കുന്നു.

• എന്തുകൊണ്ടാണ് ഞങ്ങൾ ഇത് ഇഷ്ടപ്പെടുന്നത്: ഇത് പ്രവചിക്കാവുന്നതും വൈവിധ്യമാർന്നതും കൈകാര്യം ചെയ്യാൻ എളുപ്പമുള്ള ജലത്തെ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ള ലായകങ്ങൾ ഉപയോഗിക്കുന്നു.

3. സോൾവെൻ്റ് ക്വാളിറ്റിയുടെ "സുവർണ്ണ നിയമം"

ഒരു കാരണത്താൽ നിങ്ങൾ ലേബലുകളിൽ "HPLC ഗ്രേഡ്" കാണും. ACS ഗ്രേഡോ അതിൽ കുറവോ ഉപയോഗിക്കുന്നതിനെ കുറിച്ച് ചിന്തിക്കരുത്. എന്തുകൊണ്ട്? കാരണം ലോവർ ഗ്രേഡ് ലായകങ്ങളിലെ "ചെറിയ" മാലിന്യങ്ങൾ കാലക്രമേണ നിങ്ങളുടെ കോളത്തിൽ അടിഞ്ഞുകൂടും, നിങ്ങളുടെ മിഴിവ് ഇല്ലാതാക്കുകയും വിചിത്രമായ പ്രേത കൊടുമുടികൾ സൃഷ്ടിക്കുകയും ചെയ്യും.

എപ്പോഴും Milli-Q (18.2 MΩ.cm) ഗ്രേഡ് വെള്ളം ഉപയോഗിക്കുക. നിങ്ങളുടെ വെള്ളം "വൃത്തികെട്ട" ആണെങ്കിൽ, നിങ്ങളുടെ അടിസ്ഥാനം ഒരു പർവതനിര പോലെ കാണപ്പെടും, എന്തുകൊണ്ടെന്ന് മനസിലാക്കാൻ നിങ്ങൾ മൂന്ന് ദിവസം ചെലവഴിക്കും.

4. ഡീഗ്യാസിംഗും ഫിൽട്ടറേഷനും: പെർഫോമൻസ് കില്ലേഴ്സ്

hplc മൊബൈൽ ഘട്ടത്തിൻ്റെ ശത്രു വായു ആണ്. സാധാരണ മർദ്ദത്തിൽ, വായു നിങ്ങളുടെ ലായകങ്ങളിൽ ലയിക്കുന്നു. എന്നാൽ ആ ലായനി പമ്പിൽ പതിച്ചാൽ, ആ ചെറിയ കുമിളകൾ ചെക്ക് വാൽവുകളിലോ ഡിറ്റക്ടർ സെല്ലിലോ കുടുങ്ങിപ്പോകും.

• ഫലം: ഫ്ലോ റേറ്റ് ഏറ്റക്കുറച്ചിലുകൾ, പൾസിംഗ് ബേസ്‌ലൈനുകൾ, ചലിക്കുന്ന നിലനിർത്തൽ സമയം.

• പരിഹാരം: നിങ്ങൾ ഹൈ-സെൻസിറ്റിവിറ്റി പരിശോധനകൾ നടത്തുകയാണെങ്കിൽ ബിൽറ്റ്-ഇൻ ഡീഗാസറുകൾ അല്ലെങ്കിൽ സോണിക്കേഷൻ\/വാക്വം ഫിൽട്രേഷൻ ഉപയോഗിക്കുക.

ഫിൽട്ടറേഷൻ ഓപ്ഷണൽ അല്ല. HPLC ഗ്രേഡ് ലായകങ്ങൾക്ക് പോലും നിർമ്മാണ പ്രക്രിയയിൽ നിന്നോ കുപ്പി തൊപ്പിയിൽ നിന്നോ സൂക്ഷ്മ കണികകൾ ഉണ്ടാകാം. നിങ്ങളുടെ റിസർവോയറിൽ സ്പർശിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് എല്ലായ്പ്പോഴും 0.22µm അല്ലെങ്കിൽ 0.45µm മെംബ്രണിലൂടെ ഫിൽട്ടർ ചെയ്യുക. നിങ്ങളുടെ കോളത്തെ അകാല മരണത്തിൽ നിന്ന് രക്ഷിക്കാൻ കഴിയുന്ന 5 മിനിറ്റ് ടാസ്‌ക്കാണിത്.

5. ബഫറുകളും ഗ്ലാസ് ട്രാപ്പും

റിവേഴ്സ് ഫേസ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിയിൽ, അയോണൈസ് ചെയ്യാവുന്ന സാമ്പിളുകൾക്ക് pH സ്ഥിരത നിലനിർത്താൻ ഞങ്ങൾ ബഫറുകൾ ഉപയോഗിക്കുന്നു.

• പ്രോ ടിപ്പ്: നിങ്ങൾ ഇന്ന് ഒരു ബഫർ ഉപയോഗിച്ചിട്ടുണ്ടെങ്കിൽ, വീട്ടിലേക്ക് പോകുന്നതിന് മുമ്പ് സിസ്റ്റം ശുദ്ധമായ വെള്ളത്തിൽ\/ഓർഗാനിക് മിശ്രിതം ഉപയോഗിച്ച് കഴുകുക. നിങ്ങൾ അങ്ങനെ ചെയ്തില്ലെങ്കിൽ, ആ ലവണങ്ങൾ നിങ്ങളുടെ പമ്പ് സീലുകളെ ക്രിസ്റ്റലൈസ് ചെയ്യുകയും കീറുകയും ചെയ്യും.

• ഗ്ലാസ് ട്രാപ്പ്: നിങ്ങളുടെ hplc മൊബൈൽ ഫേസ് pH> 8.0 ആണെങ്കിൽ, അത് യഥാർത്ഥത്തിൽ ഗ്ലാസ് റിസർവോയറുകളിൽ നിന്ന് ലോഹ അയോണുകൾ ലീക്ക് ചെയ്യുമെന്ന് നിങ്ങൾക്കറിയാമോ? ഈ സന്ദർഭങ്ങളിൽ സ്റ്റെയിൻലെസ് സ്റ്റീൽ അല്ലെങ്കിൽ പ്രത്യേക പ്ലാസ്റ്റിക് പാത്രങ്ങളിലേക്ക് മാറുക.

നിങ്ങളുടെ വേർപിരിയൽ പൂർണത കൈവരിക്കട്ടെ

എച്ച്പിഎൽസിയിലെ 80% പോരാട്ടമാണ് മൊബൈൽ ഘട്ടം ശരിയാക്കുന്നത്. "ഷാഗ് കാർപെറ്റ്" ബേസ്‌ലൈനുകൾ, പ്രഷർ സ്പൈക്കുകൾ അല്ലെങ്കിൽ അസ്ഥിരമായ ഫലങ്ങൾ എന്നിവയുമായി നിങ്ങൾ ബുദ്ധിമുട്ടുന്നുണ്ടെങ്കിൽ, ഊഹിച്ച് മറ്റൊരു ദിവസം പാഴാക്കരുത്.

ഈ കൃത്യമായ പ്രശ്‌നങ്ങൾ പരിഹരിക്കുന്നതിന് ഞാൻ ആയിരക്കണക്കിന് മണിക്കൂറുകൾ ബെഞ്ചിൽ ചെലവഴിച്ചു. നിങ്ങളുടെ പ്രോജക്‌റ്റ് വീണ്ടും ട്രാക്കിൽ എത്തിക്കുന്നതിന് "ലാബ് തെളിയിക്കപ്പെട്ട" ഉപദേശങ്ങൾ പങ്കിടുന്നതിൽ എനിക്ക് എപ്പോഴും സന്തോഷമുണ്ട്.

• WhatsApp: 86 18338832256

• ഇമെയിൽ:boonemi@aijirenvial.com
  

റഫറൻസുകൾ

• Snyder, L. R., Kirkland, J. J., & Dolan, J. W. (2011). ആധുനിക ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിയുടെ ആമുഖം. മൂന്നാം പതിപ്പ്. ജോൺ വൈലി ആൻഡ് സൺസ്. (HPLC വേർതിരിക്കൽ സംവിധാനങ്ങൾ മനസ്സിലാക്കുന്നതിനുള്ള "ഗോൾഡ് സ്റ്റാൻഡേർഡ്").

• ഡോളൻ, ജെ. ഡബ്ല്യു. (2002). "മൊബൈൽ ഘട്ടം തയ്യാറാക്കൽ." LCGC നോർത്ത് അമേരിക്ക, ട്രബിൾഷൂട്ടിംഗ് സീരീസ്. (ഡീഗ്യാസിംഗിനും ഫിൽട്ടറേഷനും ആവശ്യമായ പ്രായോഗിക ഗൈഡ്).

• Aparicio, R. (Ed.). (2013). HPLC ഒപ്റ്റിമൈസേഷൻ്റെ മാനുവൽ. എൽസെവിയർ. (റിവേഴ്സ് ഫേസ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിയിലെ സോൾവെൻ്റ് പോളാരിറ്റി, ബഫർ സെലക്ഷൻ എന്നിവയെക്കുറിച്ചുള്ള സമഗ്രമായ ഡാറ്റ).

• എജിലൻ്റ് ടെക്നോളജീസ്. "HPLC സിസ്റ്റം ട്രബിൾഷൂട്ടിംഗ് ഗൈഡ്: സാധാരണ മൊബൈൽ ഫേസ് പിശകുകൾ ഒഴിവാക്കുന്നു." ടെക്നിക്കൽ റിസോഴ്സ് ലൈബ്രറി.

• വാട്ടർ കോർപ്പറേഷൻ. "പ്രിൻസിപ്പിൾസ് ഓഫ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി: നോർമൽ ഫേസ് vs. റിവേഴ്സ് ഫേസ്." വിദ്യാഭ്യാസ പരമ്പര.

• ഇൻ്റർനാഷണൽ കോൺഫറൻസ് ഓൺ ഹാർമോണൈസേഷൻ (ICH). Q2(R1) അനലിറ്റിക്കൽ നടപടിക്രമങ്ങളുടെ മൂല്യനിർണ്ണയം: വാചകവും രീതിശാസ്ത്രവും. (പീക്ക് ഏരിയ ക്വാണ്ടിഫിക്കേഷനും നിലനിർത്തൽ സമയ സ്ഥിരതയ്ക്കും വേണ്ടിയുള്ള സ്റ്റാൻഡേർഡ്).