Урсгалыг эзэмших нь: HPLC гар утасны үе шатуудын лабораторийн ахмадын гарын авлага

Танилцуулга

Би таны байгаа газарт шөнийн 2 цагт монитор ширтэн, далайд төөрсөн завь шиг тэнүүчлэх хөдөлгөөнийг ажиглан, "HPLC доо-хики"-г зүгээр л миний эрүүл саруул байдлыг шалгахын тулд зохион бүтээсэн болов уу гэж гайхаж байлаа. Хэрэв та өндөр хүчин чадалтай шингэн хроматографийн (HPLC) эргэн тойронд толгойгоо ороох гэж оролдоод ухаан алдаж байвал амьсгал аваарай. Энэ бол зүгээр л үнэтэй эд ангиудын хайрцаг биш; Энэ бол хими ба физикийн хоорондох нарийн бүжиг юм.

Лабораторид бид ихэвчлэн хөдөлгөөнт үе шатыг системийн "амьдралын шугам" гэж хэлдэг. Үүнгүйгээр таны дээж зүгээр л инжекторт сууж, хаашаа ч явахгүй байна. Гэхдээ та молекулуудаа илрүүлэгч рүү зөөх "галт тэрэг"-ийг хэрхэн зөв сонгох вэ? Амралтын өрөөнд кофе ууж ярилцаж байгаа юм шиг үүнийг задалцгаая.

1. HPLC гэж юу вэ?

Үндсэндээ HPLC нь салгах тухай юм. Үүнийг "зам" нь хөдөлгөөнгүй үе шат (багана), гүйгчдийг түлхэж буй "салхи" нь hplc гар утасны үе шат гэж төсөөлөөд үз дээ.

Янз бүрийн молекулууд өөр өөр "найрал"-тай байдаг тул ид шид тохиолддог. Зарим молекулууд хөдөлгөөнт үе шатанд дуртай бөгөөд баганыг томруулдаг. Бусад нь "наалдамхай" байдаг - тэд хөдөлгөөнгүй үе шатанд дуртай, хоцрогдсон байдаг. Хурдны энэ ялгаа нь таны хроматограмм дээрх оргилуудыг үүсгэдэг.

2. Хэвийн үе ба урвуу үе

Эндээс хүн бүр үсээ зулгааж эхэлдэг. Олон жил дадлага хийхдээ би үүнийг санах хамгийн хялбар арга бол туйлшралыг харах явдал юм.

A. Хэвийн фазын хроматографи

Энэ бол "хуучин сургуулийн" арга юм. Ердийн фазын хроматографийн хувьд хөдөлгөөнгүй фаз нь туйлтай байдаг - үүнийг туйлын молекулуудын соронзон мэт бодоорой. Бидний энд ашигладаг хөдөлгөөнт фаз нь туйлшралгүй, ихэвчлэн гексан эсвэл гептан зэрэг уусгагч юм.

• Логик: Туйлын "наалдамхай" молекулууд туйлын баганад баригддаг. Туйлгүй молекулууд туйлшралгүй хөдөлгөөнт фазын тусламжтайгаар хурдан угаана.

• Зөвлөмж: Хэрэв та хөдөлгөөнт фазын туйлшралыг нэмэгдүүлбэл (бага зэрэг изопропанол нэмбэл) таны дээжүүд илүү хурдан хөдөлнө.

B. Урвуу фазын хроматографи

Өнөөдөр энэ бол алтан стандарт юм. Магадгүй миний лабораторид хийдэг ажлын 90% нь урвуу фазын хроматографитай холбоотой байх. Энд бид скриптийг эргүүлнэ. Багана нь туйл биш (газрын тос гэх мэт гидрофобик), фазын хөдөлгөөнт хэсэг нь туйл (ихэвчлэн ус ба метанол эсвэл ацетонитрил) юм.

• Логик: Усанд дуртай (туйлт) молекулууд тослог баганыг үзэн яддаг тул томруулдаг. Өөх тосонд дуртай (туйлтгүй) молекулууд нь цавуу шиг баганад наалддаг.

• Бид яагаад үүнд дуртай вэ: Энэ нь урьдчилан таамаглах боломжтой, олон талт бөгөөд удирдахад хялбар усан суурьтай уусгагчийг ашигладаг.

3. Уусгагчийн чанарын "алтан дүрэм"

Та шошгон дээрх "HPLC зэрэглэл"-ийг ямар нэг шалтгаанаар харах болно. ACS зэрэглэл эсвэл түүнээс бага зүйлийг ашиглах талаар бүү бодоорой. Яагаад? Учир нь бага агуулгатай уусгагч дахь тэдгээр "жижиг" хольцууд нь таны баганад цаг хугацааны явцад хуримтлагдаж, таны нягтралыг устгаж, хачирхалтай сүнсний оргилуудыг бий болгоно.

Milli-Q (18.2 MΩ.cm) зэрэглэлийн усыг үргэлж хэрэглээрэй. Хэрэв таны ус "бохир" байвал таны суурь уул нуруу мэт харагдах бөгөөд яагаад гэдгийг нь олох гэж гурван өдөр зарцуулна.

4. Хийгүйжүүлэх ба шүүлтүүр: Гүйцэтгэлийн алуурчид

Агаар бол hplc гар утасны фазын дайсан юм. Хэвийн даралтын дор агаар таны уусгагчид уусдаг. Гэхдээ тэр уусгагч шахуурга руу ороход тэдгээр жижиг бөмбөлгүүд шалгах хавхлага эсвэл илрүүлэгч үүрэнд гацаж болно.

• Үр дүн: Урсгалын хурдны хэлбэлзэл, импульсийн суурь үзүүлэлтүүд болон хөдөлгөөнд саатах хугацаа.

• Засах арга: Хэрэв та өндөр мэдрэмжтэй шинжилгээ хийж байгаа бол суурилуулсан хийгүйжүүлэгч эсвэл хэт авианы тусламжтайгаар вакуум шүүлтүүр ашиглана уу.

Шүүлтүүр нь нэмэлт биш юм. HPLC зэрэглэлийн уусгагчид ч гэсэн үйлдвэрлэлийн процесс эсвэл лонхны тагнаас микроскоп тоосонцортой байж болно. Таны усан санд хүрэхээс өмнө 0.22 μm эсвэл 0.45µm мембраныг үргэлж шүүж байгаарай. Энэ нь таны баганыг дутуу үхлээс аврах 5 минутын ажил юм.

5. Буфер ба шилэн урхи

Урвуу фазын хроматографид бид ионждог дээжийн рН-ийг тогтвортой байлгахын тулд буфер ашигладаг.

• Зөвлөмж: Хэрэв та өнөөдөр буфер ашигласан бол гэртээ харихаасаа өмнө системийг цэвэр усаар\/органик хольцоор угаана уу. Хэрэв тэгэхгүй бол тэдгээр давс нь талстжиж, таны насосны битүүмжлэлийг таслах болно.

• Шилэн хавх: Хэрэв таны hplc мобайл фазын рН > 8.0 бол шилэн савнаас металл ионыг уусгаж чадна гэдгийг та мэдэх үү? Эдгээр тохиолдолд зэвэрдэггүй ган эсвэл тусгай зориулалтын хуванцар сав руу шилжинэ.

Таны салалтыг төгс болгоцгооё

Гар утасны үе шатыг зөв хийх нь HPLC дахь тулааны 80% юм. Хэрэв та "шаг хивс"-ийн суурь үзүүлэлтүүд, даралт ихсэх эсвэл үр дүн нь үл нийцэхтэй тэмцэж байгаа бол таамаглаж нэг өдрийг дэмий үрэх хэрэггүй.

Би яг эдгээр асуудлыг шийдвэрлэхийн тулд вандан сандал дээр хэдэн мянган цаг зарцуулсан. Төслийг тань зөв замд нь оруулахын тулд "лабораторид батлагдсан" зөвлөгөөг хуваалцахдаа би үргэлж баяртай байдаг.

• WhatsApp: 86 18338832256

• Имэйл:boonemi@aijirenvial.com
  

Лавлагаа

• Snyder, L. R., Kirkland, J. J., & Dolan, J. W. (2011). Орчин үеийн шингэний хроматографийн танилцуулга. 3-р хэвлэл. Жон Уайли ба хөвгүүд. (HPLC салгах механизмыг ойлгох "Алтан стандарт").

• Долан, Ж.В. (2002). "Гар утасны үе шатны бэлтгэл." LCGC Хойд Америк, Асуудлыг олж засварлах цуврал. (Хий тайлах, шүүж цэвэрлэхэд хэрэгтэй практик гарын авлага).

• Апарисио, R. (Ред.). (2013). HPLC оновчтой болгох гарын авлага. Elsevier. (Урсуу фазын хроматографийн уусгагчийн туйлшрал ба буферийн сонголтын талаархи дэлгэрэнгүй мэдээлэл).

• Agilent Technologies. "HPLC системийн алдааг олж засварлах гарын авлага: Мобайл фазын нийтлэг алдаанаас зайлсхийх." Техникийн нөөцийн номын сан.

• Waters корпораци. "Хроматографийн зарчмууд: Хэвийн үе ба урвуу үе шат." Боловсролын цуврал.

• Зохицуулах олон улсын бага хурал (ICH). Q2(R1) Аналитик процедурын баталгаажуулалт: Текст ба арга зүй. (Оргил талбайн хэмжигдэхүүн ба хадгалах хугацааны тогтвортой байдлын стандарт).