Penyediaan sampel adalah langkah kritikal dalam proses spektrometri massa kromatografi cecair (LC-MS), mempengaruhi ketepatan dan kebolehpercayaan hasil analisis. Tujuan utama penyediaan sampel adalah untuk mengekstrak, membersihkan, dan menumpukan analisis dari matriks kompleks, memastikan mereka bersesuaian dengan analisis LC-MS. Langkah ini penting untuk menghapuskan potensi gangguan yang boleh menjejaskan kualiti data. Penyediaan sampel yang betul meningkatkan kepekaan dan kekhususan analisis, yang penting untuk aplikasi dalam pelbagai bidang seperti proteomik, metabolomik, analisis farmaseutikal, dan ujian alam sekitar.

Objektif utama penyediaan sampel:

Pembuangan gangguan: Menghapuskan bahan yang boleh mengganggu pengesanan analisis sasaran.

Kepekatan analisis: Meningkatkan kepekatan analisis untuk meningkatkan had pengesanan.

Keserasian: Sediakan sampel dengan cara yang mereka dapat dianalisis dengan berkesan oleh sistem LC-MS.

Ingin mengetahui lebih lanjut mengenai penyediaan sampel HPLC, sila periksa artikel ini: Penyelesaian Penyediaan Contoh HPLC untuk hasil terbaik

Teknik biasa dalam penyediaan sampel LC-MS

Beberapa teknik biasanya digunakan dalam penyediaan sampel LC-MS. Setiap kaedah mempunyai kelebihan sendiri dan dipilih berdasarkan keperluan khusus analisis.

1. Pengekstrakan fasa pepejal (SPE)

SPE digunakan secara meluas untuk mengasingkan analisis dari sampel cecair. Teknik ini melibatkan lulus sampel melalui fasa pegun pepejal yang secara selektif mengekalkan analisis sasaran sambil membenarkan komponen lain melewati. SPE sangat berkesan untuk matriks kompleks seperti darah atau air kencing dan menawarkan beberapa faedah:

Kadar pemulihan yang tinggi: SPE biasanya menghasilkan kadar pemulihan yang lebih tinggi berbanding dengan pengekstrakan cecair-cecair.

Keserasian Automasi: Kaedah ini boleh dengan mudah dia automatik, meningkatkan kecekapan dan kecekapan.

2. Protein Protein

Pemendakan protein adalah kaedah yang mudah namun berkesan untuk mengeluarkan protein dari sampel biologi. Teknik ini amat penting apabila menganalisis sampel dengan kandungan protein yang tinggi, seperti plasma atau serum. Dengan mencetuskan protein, kaedah ini memudahkan matriks dan mengurangkan gangguan dalam analisis berikutnya.

Cepat dan cekap: Ia membolehkan pemprosesan sampel yang cepat sambil mengekalkan kadar pemulihan yang baik.

3. Pengekstrakan cecair cecair (LLE)

LLE memisahkan analisis berdasarkan kelarutan mereka dalam dua cecair yang tidak dapat dilepaskan -secara jenis fasa berair dan pelarut organik. Teknik ini berguna untuk mengekstrak sebatian kutub bukan polar atau sederhana dari matriks berair kompleks.

Aplikasi serba boleh: LLE boleh disesuaikan untuk pelbagai jilid dan jenis sampel, menjadikannya sesuai untuk pelbagai aplikasi.

4. Derivatisasi

Derivatisasi melibatkan pengubahsuaian kimia untuk meningkatkan pengesanan mereka dalam analisis LC-MS. Proses ini meningkatkan sifat seperti ketidaktentuan dan kecekapan pengionan, menjadikannya sangat berguna untuk sebatian dengan pengesanan yang rendah.

Kepekaan yang dipertingkatkan: Derivatisasi dapat meningkatkan kepekaan dan pemilihan analisis untuk kelas kompaun tertentu seperti asid amino atau steroid.

Ingin mengetahui lebih lanjut mengenai aplikasi botol kromatografi, sila periksa artikel ini: 15 aplikasi botol kromatografi dalam bidang yang berbeza

Faktor yang mempengaruhi pemilihan kaedah penyediaan sampel

Memilih teknik penyediaan sampel yang sesuai memerlukan pertimbangan beberapa faktor:

Kimia Analyte: Memahami polariti, caj, dan kestabilan analisis adalah penting.

Jilid dan kerumitan sampel: Kekangan volum dan kerumitan matriks sampel boleh menentukan kaedah mana yang boleh dilaksanakan.

Keperluan Sensitiviti: Aplikasi yang berbeza mungkin mempunyai keperluan kepekaan yang berbeza -beza yang mempengaruhi pemilihan kaedah.

Sumber Makmal: Ketersediaan peralatan untuk automasi atau pemprosesan manual boleh menjejaskan pilihan teknik.

Amalan terbaik untuk penyediaan sampel yang berkesan

Untuk mencapai hasil yang optimum dalam analisis LC-MS, mematuhi amalan terbaik semasa penyediaan sampel adalah penting:

Standardisasi: Membangunkan protokol standard untuk memastikan konsistensi merentasi analisis.

Pengesahan: Secara kerap mengesahkan kaedah untuk mengesahkan kebolehpercayaan dan ketepatannya.

Kurangkan pengendalian sampel: Kurangkan bilangan manipulasi untuk mengelakkan kerugian atau pencemaran.

Gunakan Reagen Kualiti: Menggunakan reagen berkualiti tinggi untuk mengelakkan memperkenalkan kekotoran ke dalam sampel.

Prosedur Dokumen: Simpan rekod terperinci semua prosedur untuk memudahkan penyelesaian masalah dan pengoptimuman kaedah.

Kesimpulan

Penyediaan sampel yang berkesan adalah asas kepada analisis LC-MS yang berjaya. Dengan memahami pelbagai teknik seperti SPE, pemendakan protein, LLE, dan derivatisasi, penganalisis boleh memilih kaedah yang paling sesuai untuk keperluan khusus mereka. Selain itu, berikutan amalan terbaik akan meningkatkan kualiti data dan memastikan hasil yang boleh dipercayai untuk aplikasi yang berbeza dalam tetapan penyelidikan dan industri.

Kesimpulannya, menguasai teknik penyediaan sampel bukan sahaja dapat meningkatkan prestasi analisis, tetapi juga memberi sumbangan yang signifikan kepada kemajuan dalam bidang seperti diagnostik klinikal, pembangunan dadah, dan pemantauan alam sekitar.

Buka kunci rahsia penyediaan botol kromatografi yang betul untuk analisis yang tepat dan boleh dipercayai dalam hanya 6 langkah mudah.Baca terus untuk menguasai teknik! 6 langkah untuk menyediakan botol kromatografi untuk analisis

Sebelumnya:

LCMS vs GCMS: Teknik mana yang terbaik untuk penyelidikan anda?

Seterusnya:

Apakah botol TOC dan kepentingannya dalam kromatografi?