Semua yang anda perlu ketahui mengenai persediaan sampel HPLC

Penyediaan sampel adalah langkah kritikal dalam analisis HPLC untuk beberapa sebab.

Meminimumkan gangguan:Sampel sering mengandungi kekotoran dan komponen matriks yang boleh mengganggu pengesanan analisis sasaran. Teknik penyediaan sampel yang berkesan dapat membantu menghapuskan bahan -bahan yang tidak diingini ini dan meningkatkan ketepatan analisis.

Meningkatkan pemulihan analit:Penyediaan yang betul meningkatkan pemulihan analit dan memastikan hasil mencerminkan kepekatan sebenar sampel asal. Ini amat penting untuk analisis jejak di mana analisis hadir pada kepekatan rendah.

Bentuk puncak yang dipertingkatkan:Sampel yang disediakan dengan betul membantu membentuk puncak simetri dan jelas dalam kromatogram. Ini penting untuk kuantifikasi yang tepat. Penyediaan sampel yang tidak betul boleh menyebabkan puncak tailing dan peluasan, yang merumitkan tafsiran data.

Lindungi sistem HPLC anda:Cemar dalam sampel anda boleh merosakkan lajur dan komponen lain dalam sistem HPLC anda, yang membawa kepada peningkatan kos penyelenggaraan dan downtime. Penyediaan sampel yang betul mengurangkan risiko menyumbat sistem dan memakai.

Langkah pertama dalam penyediaan sampel adalah untuk mengumpul sampel anda dengan betul. Ini termasuk:

Gunakan bekas bersih:Sentiasa gunakan bekas yang bersih, tidak aktif untuk mengelakkan pencemaran. Kaca atau bekas plastik berkualiti tinggi disyorkan.

Elakkan pencemaran:Gunakan sarung tangan dan alat bersih untuk mencegah pencemaran dari sebum dan sumber lain.

Pelabelan yang betul:Jelas label sampel untuk mengelakkan campuran dan memastikan kebolehkesanan.

Homogenisasi sampel memastikan homogeniti, yang penting untuk hasil yang boleh dihasilkan. Teknik homogenisasi termasuk:

Homogenisasi mekanikal: Mencampurkan sampel pepejal atau separa pepejal menggunakan pengaduk atau homogenizer.

Homogenisasi ultrasonik:Penggunaan ultrasound untuk menyebarkan zarah dalam sampel cecair.

Bergantung kepada kepekatan analisis yang dijangkakan, sampel mungkin perlu dicairkan atau tertumpu. Ini dapat dicapai dengan:

Pencairan:Cairkan sampel ke kepekatan yang dikehendaki menggunakan pelarut yang sama seperti fasa mudah alih.

Konsentrasi:Analisis boleh tertumpu menggunakan teknik seperti penyejatan atau pengekstrakan fasa pepejal (SPE).

Penapisan adalah penting untuk menghilangkan bahan partikulat yang boleh menyumbat lajur HPLC. Kaedah penapisan biasa termasuk:

Penapisan membran:GunakanPenapis 0.2μm atau 0.45μmuntuk mengeluarkan zarah. Biasanya poliethersulfone (PES) atau penapis nilon digunakan.

Prefiltration:Untuk sampel dengan kandungan zarah yang tinggi, prefiltrasi melalui penapis saiz liang yang lebih besar boleh menghalang penyumbatan.


50 Soalan Lazim Mengenai Penapis Suntikan, Pastikan untuk menyemak artikel bermaklumat ini: Topik "penapis jarum suntik" 50 soalan yang sering ditanya

Pertimbangkan menstabilkan sampel anda untuk mengelakkan kemerosotan analit.

Pelarasan pH:Melaraskan pH boleh membantu menstabilkan analisis tertentu. Sebagai contoh, sebatian berasid mungkin memerlukan pengasidan untuk mencegah kemerosotan.

Aditif:Menambah penstabil atau pengawet dapat membantu mengekalkan integriti sampel semasa penyimpanan dan analisis.

Adalah penting untuk memilih pelarut yang betul untuk membubarkan sampel anda dan memastikan keserasian dengan sistem HPLC anda. Pertimbangkan perkara berikut:

Polariti pelarut:Untuk mencapai pembubaran lengkap, pelarut mesti sepadan dengan polariti analit.

Keserasian fasa mudah alih: Gunakan pelarut yang serasi dengan fasa mudah alih untuk meminimumkan gangguan yang berpotensi.

7. Penyediaan piawaian

Penyediaan piawaian penentukuran adalah penting untuk mengukur analit dalam sampel. Ini termasuk:

Penyediaan lengkung penentukuran:Sediakan satu siri kepekatan analit yang diketahui untuk menubuhkan lengkung penentukuran untuk kuantifikasi.

Gunakan pelarut yang sama:Untuk mengekalkan konsistensi, sentiasa menyediakan piawaian anda menggunakan pelarut dan syarat yang sama seperti sampel anda.

Ikuti Prosedur Operasi Standard (SOP):Menubuhkan dan mematuhi SOP untuk penyediaan sampel untuk memastikan konsistensi dan kebolehulangan.

Gunakan reagen dan pelarut berkualiti tinggi:Sentiasa gunakan pelarut gred HPLC dan reagen kemelut tinggi untuk meminimumkan pencemaran.

Pastikan ruang kerja anda bersih:Pastikan kawasan penyediaan sampel anda bersih dan teratur untuk mengurangkan risiko pencemaran.

Dokumen semuanya:Simpan rekod terperinci mengenai prosedur penyediaan sampel anda, termasuk sebarang penyimpangan daripada protokol standard.

Mengesahkan kaedah:Mengesahkan kaedah penyediaan sampel secara teratur untuk memastikan mereka memberikan hasil yang boleh dipercayai dan boleh dihasilkan.

Bentuk puncak yang lemah:Jika puncak luas atau tailing, ini mungkin menunjukkan pembubaran yang tidak lengkap atau kehadiran partikel. Pastikan sampel anda dicampur dengan teliti dan ditapis.

Puncak Hantu:Puncak hantu mungkin disebabkan oleh kekotoran dalam pelarut atau sampel, menggunakan pelarut kemelut tinggi dan memastikan semua barangan kaca dan peralatan bersih.

Kepekaan yang rendah:Jika sensitiviti rendah, pertimbangkan untuk mengoptimumkan kaedah pengekstrakan anda atau meningkatkan kepekatan analit anda.

Lajur menyumbat:Penyumbatan yang kerap mungkin menunjukkan bahawa sampel anda mengandungi terlalu banyak partikel atau tidak ditapis secukupnya. Kevalasi semula proses penapisan anda dan pertimbangkan pra-penapisan.

Hasil yang tidak konsisten:Variasi dalam hasil boleh berpunca daripada penyediaan sampel yang tidak konsisten. Menyeragamkan semua prosedur dan memastikan bahawa kakitangan yang terlibat dalam penyediaan sampel dilatih dengan betul.

Apabila permintaan analisis meningkat, makmal mengamalkan teknik penyediaan sampel yang lebih maju untuk meningkatkan kecekapan dan ketepatan:

SPE adalah teknik yang digunakan secara meluas yang membolehkan pengekstrakan selektif analisis dari matriks kompleks. Ia melibatkan lulus sampel cecair melalui bahan penyerap pepejal yang mengekalkan analit sasaran sambil membenarkan kekotoran melewati.

LLE adalah teknik yang memisahkan analisis berdasarkan kelarutan mereka dalam dua cecair yang tidak dapat dilepaskan. Kaedah ini berkesan dalam memisahkan sebatian dengan polariti yang berbeza dan sering digunakan dalam analisis alam sekitar dan farmaseutikal.

Quechers adalah kaedah yang popular untuk menyediakan sampel makanan dan alam sekitar yang menggabungkan langkah-langkah pengekstrakan dan pembersihan ke dalam satu proses, menjadikannya cekap dan kos efektif.

Output dan reproducibility boleh diperbaiki dengan ketara oleh sistem penyediaan sampel automatik, yang boleh melaksanakan tugas seperti pencairan, penapisan, dan SPE dengan campur tangan manusia yang minimum, dengan itu mengurangkan risiko kesilapan.


Ingin mengetahui lebih lanjut mengenai penyediaan sampel HPLC, sila periksa artikel ini: Penyelesaian Penyediaan Contoh HPLC untuk hasil terbaik

Penyediaan sampel HPLC adalah langkah kritikal yang boleh memberi kesan kepada ketepatan dan kebolehpercayaan hasil analisis. Dengan mengikuti amalan terbaik, menggunakan teknik yang sesuai, dan menangani masalah biasa, makmal dapat mengoptimumkan proses penyediaan sampel dengan menggunakan teknik dan teknologi canggih sebagai keperluan analisis. Automasi akan meningkatkan kecekapan dan keberkesanan analisis HPLC. Penyediaan sampel yang betul bukan sahaja meningkatkan kualiti hasil, tetapi juga melindungi sistem HPLC, memastikan kebolehpercayaan dan prestasi jangka panjang.