Memilih penampan yang tepat untuk fasa mudah alih HPLC anda adalah penting untuk mencapai pemisahan dan analisis optimum anda contoh. Buffer membantu mengekalkan pH yang stabil, yang penting untuk mengawal keadaan pengionan analisis anda, sehingga mempengaruhi masa pengekalan dan bentuk puncaknya. Berikut adalah gambaran terperinci bagaimana untuk memilih penampan terbaik untuk aplikasi HPLC anda.

Adakah anda tahu mengenai penyediaan sampel HPLC? Klik artikel ini untuk mengetahui lebih lanjut: "Semua yang anda perlu tahu mengenai penyediaan sampel HPLC"

Kepentingan pemilihan penampan

Penampan adalah penyelesaian yang pH tidak berubah selepas menambah sedikit asid atau asas. Berdasarkan komposisi mereka, penampan boleh diklasifikasikan sebagai berasid atau asas. Keberkesanan penampan ditentukan oleh PKAnya, yang idealnya harus berada dalam unit ± 1 pH pH fasa mudah alih yang dikehendaki untuk kapasiti penimbal yang optimum.

Faktor utama yang perlu dipertimbangkan

1.PH RANGE: PH fasa mudah alih hendaklah sekurang -kurangnya 2 unit pH dari PKA analit. Ini membantu menindas pengionan analisis berasid atau asas, memaksimumkan pengekalan mereka pada lajur. Sebagai contoh, jika analit adalah asid lemah dengan PKA sebanyak 4.5, menggunakan fasa mudah alih dengan pH sekitar 2.0 akan menyimpannya dalam keadaan yang tidak mengion, meningkatkan pengekalan.

2. Buffer Jenis: Buffer biasa yang digunakan dalam HPLC termasuk:

Penampan fosfat: Berkesan dalam julat pH 2.0 hingga 8.0, penampan fosfat digunakan secara meluas kerana kestabilan dan keserasian mereka dengan banyak analisis. Mereka sangat sesuai untuk aplikasi LC-UV.

Buffer Acetate: Ini juga popular untuk ujian LC-UV dan boleh digunakan dalam julat pH yang sama sebagai penampan fosfat.

Penampan yang tidak menentu: Untuk aplikasi LC-MS, penampan yang tidak menentu seperti formate, asetat, dan ammonium bikarbonat lebih disukai kerana ia dapat dengan mudah dikeluarkan semasa proses spektrometri massa.

3. Konsentrasi Buffer: Kepekatan permulaan yang tipikal untuk penampan di HPLC adalah antara 25-50 mM. Kepekatan yang lebih tinggi dapat meningkatkan bentuk dan kecekapan puncak tetapi juga boleh menyebabkan hujan apabila dicampur dengan pelarut organik. Adalah dinasihatkan untuk mengekalkan kepekatan penampan di bawah 25 mM untuk mengelakkan komplikasi.

4. Kesucian Chemical: Sentiasa gunakan buffer gred kromatografi yang tinggi untuk mencegah pencemaran dan memastikan hasil yang boleh dipercayai. Kekotoran boleh membawa kepada interaksi dan kebolehubahan yang tidak dijangka dalam masa pengekalan.

Kesan Suhu: Suhu boleh mempengaruhi pH penyelesaian penampan. Adalah penting untuk menyediakan dan menyimpan buffer pada suhu yang konsisten untuk mengekalkan keberkesanannya.

Ingin mengetahui 50 jawapan mengenai vial HPLC, sila periksa artikel ini: 50 soalan paling kerap ditanya mengenai botol HPLC

Petua Praktikal untuk Penyediaan Buffer

Kaedah Penyediaan: Buffer boleh disediakan dengan mencampurkan jumlah equimolar komponen berasid dan asas mereka atau dengan titrating penyelesaian asas dengan asid. Elakkan menyesuaikan pH selepas menambah pelarut organik, kerana ini boleh menyebabkan hasil yang tidak konsisten.

Penyelesaian Segar: Sediakan penyelesaian penampan segar secara teratur untuk meminimumkan pertumbuhan mikrob dan kemerosotan komponen, yang boleh menjejaskan prestasi kromatografi.

Mengelakkan kakisan: Buffer tertentu, seperti sitrat, boleh menghancurkan komponen keluli tahan karat sistem HPLC. Pastikan pembilasan sistem yang menyeluruh selepas menggunakan penampan tersebut untuk mengelakkan kerosakan.

Kesimpulan

Memilih penampan yang betul untuk fasa mudah alih HPLC anda adalah penting untuk mencapai hasil yang boleh dipercayai dan boleh dihasilkan. Pertimbangkan pH, jenis penampan, kepekatan, dan kesucian apabila memilih. Dengan mengikuti garis panduan ini, anda boleh mengoptimumkan kaedah HPLC anda untuk memisahkan dan menganalisis sampel anda dengan berkesan.

Ingin mengetahui harga botol HPLC, sila periksa artikel ini: Harga Vial HPLC: 50 soalan paling kerap ditanya

Sebelumnya:

Bagaimana cara menggunakan tiub ujian COD dengan betul untuk ujian kualiti air?

Seterusnya:

Cara Menghindari Terobosan Penapis dalam Penapis Suntikan