Penyelesaian Penyediaan Contoh HPLC untuk hasil terbaik

Empat langkah untuk penyediaan sampel HPLC

Langkah 1. Analisis penyelesaian berair

Langkah 2. Penyediaan piawaian

Menyediakan piawaian untuk pengenalpastian kompaun dan kuantifikasi boleh menjadi proses yang membosankan dan memakan masa. Secara tepat menimbang pepejal supaya jumlah pelarut yang telah ditetapkan dapat digunakan adalah sukar, dan sisa disebabkan oleh kesilapan boleh mahal -terutama ketika bekerja dengan farmaseutikal. Faktor lain seperti suhu selanjutnya merumitkan penyediaan standard. Perubahan suhu mengubah ketumpatan pelarut dan menyumbang kepada perbezaan dramatik dalam kepekatan.



Menggunakan baki yang membolehkan ketepatan berat sehingga beberapa tempat perpuluhan dan mengautomasikan proses dengan menghubungkan baki ke dispenser pelarut menjamin ketepatan tertinggi. Menggunakan perisian seperti dos YAPP16 Q-app membolehkan pengiraan automatik dan pemantauan gravimetrik nilai-nilai yang diukur. Mendokumentasikan suhu dan ketumpatan pelarut juga memastikan kepekatan yang sangat tepat, terutama ketika menyediakan piawaian pada hari -hari berikutnya. Pemindahan data langsung dari aplikasi berat badan Yapp16 ke perisian Thermo Scientific ™ Chromeleon ™ 7.2 Sistem Data Kromatografi (CDS) adalah pilihan untuk pengendalian data tanpa kertas dengan integriti data penuh.

Langkah 3. Kembali ke asas -asas dengan pipet yang baik

Kepentingan pipet yang tepat dan tepat terlalu sering diabaikan dan diambil begitu sahaja. Tahap dan pengalaman kemahiran pengguna boleh mempunyai implikasi yang signifikan untuk analisis sensitif seperti HPLC. Memilih pipet yang betul dapat mengurangkan kesilapan manusia dan kos yang berkaitan dengan pelarut sia -sia.



Pipet mekanikal dengan kunci kelantangan menawarkan penyelesaian mudah untuk mencegah perubahan kelantangan yang tidak disengajakan, sementara pipet elektronik yang lebih canggih menghapuskan kebolehubahan pengguna untuk secara konsisten menyampaikan jumlah yang tepat. Hujung pipet juga merupakan terperinci penting untuk dipertimbangkan untuk analisis HPLC. Petua pengekalan yang rendah adalah yang terbaik apabila bekerja dengan pelarut kelikatan yang berbeza, kerana mereka memaksimumkan pemulihan sampel. Pencemaran sampel juga boleh berlaku akibat larutan dari hujung pipet. Oleh itu, petua dengan rintangan kimia yang tinggi memelihara integriti sampel.

Langkah 4. Penapis untuk ketepatan dan panjang umur

Mengambil penjagaan tambahan untuk menapis sampel sebelum analisis meningkatkan kebolehpercayaan dan dapat memanjangkan hayat lajur HPLC dengan menghalang kesan penyumbatan. Penapis jarum suntikan adalah penyelesaian yang mudah dan cepat untuk penapisan sampel sebelum kromatografi lajur. Seperti petua pipet, pelarut yang digunakan dalam HPLC memerlukan penapis khusus untuk mengelakkan pencemaran dan pencemaran sampel.

Membran selulosa tahan terhadap dimetil sulfoksida (DMSO), amida, keton, ester, dan sebatian eter. Untuk pelarut yang sangat keras, membran poliethersulfone (PTFO) yang tidak bersalut menghalang pencemaran dan pencemaran sampel. Penapisan sampel menjadi sangat memakan masa apabila nombor sampel meningkat. Unit penapisan pelbagai sampel, seperti sistem penapisan ClaristeP®, boleh memproses sampel tanpa jarum suntik dan penyediaan sampel pantas tanpa mengorbankan kualiti.

Lima masalah yang anda perlukan untuk memberi perhatian kepada！

1. Apakah masalah persediaan sampel terbesar yang dihadapi makmal?

Makmal berada di bawah tekanan yang semakin meningkat dari segi masa dan kos, sering berurusan bukan sahaja dengan jumlah sampel yang tinggi tetapi juga contoh -contoh yang berbeza -beza. Penyediaan sampel adalah kawasan di mana perbezaan halus antara jenis sampel atau kaedah penyediaan sampel dan bahan yang digunakan boleh memberi kesan kepada hasil yang diperolehi. Memastikan keserasian antara bahan dalam peranti penapisan dan pelarut dapat meminimumkan isu; Sebagai contoh, tahap sebatian yang boleh diekstrak yang mungkin mengganggu pengesanan analit.

2. Apa yang berlaku apabila persediaan sampel berlaku?

Sebelum aplikasi kromatografi cecair (HPLC), sampel disediakan oleh pelbagai kaedah, yang semuanya berpotensi mempengaruhi keputusan analisis dengan mempengaruhi sampel yang disuntik ke dalam sistem. Penyediaan sampel yang tidak berkesan boleh menyebabkan pengurangan kehidupan lajur, peningkatan keperluan perkhidmatan untuk komponen, potensi downtime instrumentasi, pengurangan kecekapan pemisahan kromatografi dan kebolehulangan, dan banyak masalah lain.

3. Pada pandangan pertama, penapisan kelihatan seperti proses yang mudah ...

Walaupun penapisan adalah sebahagian kecil daripada aliran kerja yang besar, kesan memilih penapis yang tepat untuk aplikasi tertentu boleh menjadi besar. Sebagai contoh, kaedah yang tidak mengeluarkan bahan partikulat yang mencukupi boleh mengakibatkan penyekatan lajur. Pilihan peranti penyediaan sampel yang tidak sesuai boleh, dalam keadaan tertentu, melepaskan sebatian yang boleh diekstrak ke dalam sampel, mengikat analisis kepentingan atau memperkenalkan kesilapan melalui kehilangan sampel - semuanya mempengaruhi kualiti dan kebolehulangan hasil yang diperhatikan. Sekiranya anda yakin bahawa bahan habis anda tidak menyumbang kepada kesilapan yang memerlukan penyiasatan semula atau penyiasatan akar, anda akan menjimatkan wang dan memberi anda ketenangan fikiran.

4. Apakah persediaan sampel yang paling biasa 'gagal'?

Pilihan membran penapis yang tidak betul adalah satu masalah yang kita lihat banyak. Isu -isu boleh muncul sebagai puncak luar dari extractables, yang boleh mengganggu pengesanan analisis kepentingan. Ketidakpastian media penapis dengan sampel atau pelarut dari segi rintangan kimia tidak semata -mata terhad kepada kesan pembubaran pada media penapis. Pelarut boleh menyebabkan sedikit pembengkakan bahan membran polimer apabila tidak serasi sepenuhnya, yang seterusnya dapat mempengaruhi prestasi penapisan, yang membawa kepada pembersihan sampel yang tidak berkesan. Salah satu cara untuk menangani isu ini adalah dengan memilih membran yang serasi dengan kedua -dua pelarut berair dan organik. Untuk penyediaan sampel HPLC yang tipikal, penapis suntikan dan syringeless yang mengandungi membran selulosa yang diperbaharui adalah pilihan yang baik kerana keserasian pelarut yang luas.

Penggunaan peranti penapis yang lebih besar daripada yang diperlukan untuk jumlah yang disediakan adalah satu lagi perangkap biasa. Penggunaan peranti penapis yang terlalu besar bermakna sedikit sampel akan kekal dalam penapis, walaupun selepas langkah berjaga-jaga diambil untuk mengusir sebanyak mungkin.

5. Apakah kelebihan mengambil langkah penapisan dengan serius?

Matlamat asas kebanyakan makmal yang terlibat dalam ujian analisis adalah untuk membangunkan proses yang konsisten yang menyokong keputusan yang konsisten - dan yang memerlukan penapisan yang konsisten. Pemilihan peranti penapisan dengan saiz liang yang betul dan ciri -ciri pengekalan membantu memastikan penyingkiran zarah yang berkesan, sementara pilihan saiz dan reka bentuk unit penapis yang sesuai dapat membantu meminimumkan kerugian sampel. Penapisan yang baik juga membantu melindungi lajur dan berpotensi memanjangkan hayat kedua -dua penyuntik dan lajur.

Kesimpulan

HPLC adalah teknik yang berharga untuk sains hayat dan penyelidikan biopharmaceutical kerana ia memberikan hasil yang tepat dan boleh dihasilkan. Ketepatan ini bergantung kepada integriti sampel HPLC, dan cara terbaik untuk memastikan sampel berkualiti tinggi adalah untuk memulakan dengan alat terbaik. Dengan penyelesaian untuk air ultrapure, penyediaan standard, pipet, tip, dan penapis, garis penyediaan sampel HPLC menyumbang setiap butiran. Penyelesaian dan perisian automatik juga membantu menyelaraskan penyediaan sampel untuk menyampaikan sampel bersih untuk hasil yang bersih.

Lebih banyak perbincangan mengenai penyelesaian penyediaan sampel HPLC dialu -alukan!