နိဒါန်း
ငါ မင်းရောက်နေတဲ့နေရာ- မနက် 2 နာရီမှာ မော်နီတာတစ်လုံးကို စိုက်ကြည့်ရင်း ပင်လယ်ထဲမှာ ပျောက်ဆုံးနေတဲ့ လှေတစ်စင်းလို လွင့်မျောနေတာကို ကြည့်ရင်း "HPLC doo-hickey" ကို ငါ့ရဲ့ စိတ်ကို စမ်းသပ်ဖို့ တီထွင်ခဲ့တာလားလို့ တွေးမိတယ်။ စွမ်းဆောင်ရည်မြင့်မားသော အရည်ခရိုမာတီဂရိုက် (HPLC) တွင် သင့်ခေါင်းကို ပတ်ထားရန် ငြီးငွေ့နေပါက အသက်ရှူကြည့်ပါ။ တန်ဖိုးကြီးသော အစိတ်အပိုင်းများ ၏ သေတ္တာတစ်လုံးမျှသာ မဟုတ်ပါ။ ၎င်းသည် ဓာတုဗေဒနှင့် ရူပဗေဒကြားတွင် နူးညံ့သိမ်မွေ့သော အကတစ်ခုဖြစ်သည်။
ဓာတ်ခွဲခန်းတွင်၊ မိုဘိုင်းအဆင့်သည် စနစ်၏ "ဘဝမျဉ်း" ဟု မကြာခဏ ပြောလေ့ရှိသည်။ အဲဒါမရှိရင်၊ မင်းရဲ့နမူနာက ဘယ်မှသွားမလို့။ သို့သော် သင့်မော်လီကျူးများကို detector သို့သယ်ဆောင်ရန် မှန်ကန်သော "ရထား" ကို သင်မည်သို့ရွေးချယ်မည်နည်း။ ရေချိုးခန်းထဲမှာ ကော်ဖီသောက်ရင်း စကားစမြည်ပြောရင်း ချိုးလိုက်ရအောင်။
1. HPLC ဆိုတာ ဘာလဲ၊ တကယ်လား။
၎င်း၏အဓိကတွင်၊ HPLC သည် ခွဲခြားခြင်းအကြောင်းဖြစ်သည်။ "ခြေရာခံ" သည် စာရေးကိရိယာအဆင့် (ကော်လံ) ဖြစ်ပြီး အပြေးသမားများကို တွန်းပို့သော "လေ" သည် hplc မိုဘိုင်းအဆင့်ဖြစ်သည့် ပြိုင်ပွဲတစ်ခုကဲ့သို့ တွေးကြည့်ပါ။
မတူညီသော မော်လီကျူးများတွင် မတူညီသော "ရင်းနှီးမှု" ရှိသောကြောင့် မှော်ပညာသည် ဖြစ်ပေါ်လာသည်။ အချို့သော မော်လီကျူးများသည် မိုဘိုင်းအဆင့်ကို နှစ်သက်ပြီး ကော်လံကို ချဲ့ကြည့်ပါ။ အခြားသူများသည် "စေးကပ်ခြင်း" ဖြစ်သည်—၎င်းတို့သည် ငုတ်လျှိုးနေသောအဆင့်တွင် နစ်မွန်းနေပြီး နောက်ကျကျန်နေပါသည်။ ဤအမြန်နှုန်းကွာခြားချက်သည် သင်၏ chromatogram ပေါ်ရှိ အထွတ်အထိပ်များကို ဖန်တီးပေးသည်။
2. Normal Phase နှင့် Reverse Phase
များသောအားဖြင့် လူတိုင်းက ဆံပင်ကို ဆွဲထုတ်တဲ့ နေရာပါ။ ကျွန်ုပ်၏ နှစ်ပေါင်းများစွာ လေ့ကျင့်မှုတွင်၊ ဤအရာအား မှတ်မိရန် အလွယ်ကူဆုံးနည်းလမ်းမှာ ဝင်ရိုးစွန်းကို ကြည့်ခြင်းအားဖြင့် ဖြစ်သည်။
A. Normal Phase Chromatography
ဒါက "ကျောင်းဟောင်း" ပါ။ သာမာန်အဆင့် ခရိုမာတီဂရပ်ဖစ်တွင်၊ ငုတ်လျှိုးနေသောအဆင့်သည် ဝင်ရိုးစွန်းဖြစ်သည်—၎င်းကို ဝင်ရိုးစွန်းမော်လီကျူးများအတွက် သံလိုက်တစ်ခုလို ယူဆပါ။ ဤနေရာတွင် ကျွန်ုပ်တို့အသုံးပြုသည့် မိုဘိုင်းအဆင့်သည် အများအားဖြင့် hexane သို့မဟုတ် heptane ကဲ့သို့သော ပျော်ရည်များတွင် ဝင်ရိုးစွန်းမဟုတ်ပေ။
-
ယုတ္တိဗေဒ- ဝင်ရိုးစွန်း "စေးကပ်သော" မော်လီကျူးများကို ဝင်ရိုးစွန်းကော်လံမှ ပြန်လည်ဆုပ်ကိုင်ထားသည်။ ဝင်ရိုးစွန်းမဟုတ်သော မော်လီကျူးများသည် ဝင်ရိုးစွန်းမဟုတ်သော မိုဘိုင်းအဆင့်ဖြင့် လျင်မြန်စွာ ဖယ်ရှားပေးသည်။
-
Pro အကြံပြုချက်- သင့်မိုဘိုင်းအဆင့်၏ polarity တိုးလာပါက (isopropanol အနည်းငယ်ထည့်ခြင်း)၊ သင်၏နမူနာများသည် အမှန်တကယ် ပိုမိုမြန်ဆန်လာမည်ဖြစ်သည်။
B. Reverse Phase Chromatography
ဒီနေ့ ဒီရွှေစံနှုန်း။ ဓာတ်ခွဲခန်းတွင် ကျွန်ုပ်လုပ်သော အလုပ်၏ 90% သည် reverse phase chromatography ပါ၀င်သည်။ ဤတွင်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် ဇာတ်ညွှန်းကိုလှန်သည်။ ကော်လံသည် ဝင်ရိုးစွန်းမဟုတ်သော (ရေနံကဲ့သို့ ရေအားလျှပ်စစ်) ဖြစ်ပြီး အဆင့်မိုဘိုင်းသည် ဝင်ရိုးစွန်း (များသောအားဖြင့် ရေနှင့် မီသနော သို့မဟုတ် အက်စီတိုနိုက်ထရီးလ်) ရောနှောထားသည်။
-
ယုတ္တိဗေဒ- ရေကိုနှစ်သက်သော (ဝင်ရိုးစွန်း) မော်လီကျူးများသည် အဆီပြန်သောကော်လံများကို မုန်းတီးသောကြောင့် ချဲ့နိုင်သည်။ အဆီနှစ်သက်သော (ဝင်ရိုးစွန်းမဟုတ်သော) မော်လီကျူးများသည် ကော်ကဲ့သို့ ကော်လံတွင် ကပ်ထားသည်။
-
ကျွန်ုပ်တို့ ၎င်းကို အဘယ်ကြောင့်နှစ်သက်သနည်း- ၎င်းသည် ကြိုတင်ခန့်မှန်းနိုင်သော၊ စွယ်စုံရရှိပြီး စီမံရန်ပိုမိုလွယ်ကူသည့် ရေကိုအခြေခံသည့် ပျော်ရည်များကို အသုံးပြုထားသည်။
3. Solvent Quality ၏ "ရွှေစည်းမျဉ်း"
အကြောင်းပြချက်ကြောင့် အညွှန်းများတွင် "HPLC Grade" ကို တွေ့ရပါမည်။ ACS grade သို့မဟုတ် ပိုနည်းသောအရာကို အသုံးပြုရန်ပင် မစဉ်းစားပါနှင့်။ ဘာကြောင့်လဲ? အဘယ်ကြောင့်ဆိုသော် အောက်တန်းကျသော ပျော်ရည်များတွင် ထို "သေးငယ်သော" အညစ်အကြေးများသည် သင့်ကော်လံပေါ်တွင် အချိန်ကြာလာသည်နှင့်အမျှ စုပုံလာကာ သင်၏ ကြည်လင်ပြတ်သားမှုကို သတ်ပစ်ကာ ထူးဆန်းသော တစ္ဆေတောင်တန်းများကို ဖန်တီးပေးသောကြောင့် ဖြစ်သည်။
Milli-Q (18.2 MΩ.cm) အဆင့်ရေကို အမြဲသုံးပါ။ မင်းရဲ့ရေက "ညစ်ပတ်တယ်" ဆိုရင် မင်းရဲ့အခြေခံလိုင်းက တောင်တန်းတစ်ခုလိုဖြစ်ပြီး ဘာကြောင့်လဲဆိုတာကို အဖြေရှာဖို့ သုံးရက်ကြာအောင် ကြိုးစားရလိမ့်မယ်။
4. Degassing နှင့် Filtration - စွမ်းဆောင်ရည် သေမင်းတမန်များ
Air သည် hplc မိုဘိုင်းအဆင့်၏ရန်သူဖြစ်သည်။ သာမာန်ဖိအားအောက်တွင် သင့်အရည်ပျော်ရည်များတွင် လေသည် ပျော်ဝင်ပါသည်။ သို့သော် ထိုပျော်ရည်သည် ပန့်ကိုထိသွားသည်နှင့် ထိုပူဖောင်းသေးသေးလေးများသည် check valves သို့မဟုတ် detector cell များတွင် ပိတ်မိသွားနိုင်သည်။
-
ရလဒ်- စီးဆင်းမှုနှုန်း အတက်အကျများ၊ ခုန်နှုန်းအခြေခံမျဉ်းများနှင့် ရွေ့လျားနေသော ထိန်းသိမ်းထားချိန်များ။
-
ပြုပြင်မှု- အာရုံခံနိုင်စွမ်းမြင့်မားသော စစ်ဆေးမှုများကို လုပ်ဆောင်နေပါက တပ်ဆင်ထားသော ဒက်ဂါဆာများ သို့မဟုတ် အသံချဲ့စက်ကို အသုံးပြုပါ\/လေဟာနယ် စစ်ထုတ်မှုကို အသုံးပြုပါ။
Filtration သည် ရွေးချယ်ခွင့်မရှိပါ။ HPLC အဆင့်ရှိ ပျော်ရည်များတွင်ပင် ထုတ်လုပ်ရေးလုပ်ငန်းစဉ် သို့မဟုတ် ပုလင်းအဖုံးမှ အဏုကြည့်မှန်အမှုန်များပါရှိနိုင်သည်။ သင့်ရေလှောင်ကန်ကို မထိမီ 0.22µm သို့မဟုတ် 0.45µm အမြှေးပါးမှတဆင့် စစ်ထုတ်ပါ။ ၎င်းသည် သင့်ကော်လံကို အချိန်မတန်မီသေဆုံးခြင်းမှ ကယ်တင်နိုင်သည့် 5 မိနစ်အလုပ်ဖြစ်သည်။
5. Buffers နှင့် Glass Trap
ပြောင်းပြန်အဆင့် ခရိုမာတီဂရမ်တွင်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် အိုင်ယွန်နိုင်နိုင်သောနမူနာများအတွက် pH တည်ငြိမ်စေရန် buffers ကိုအသုံးပြုသည်။
-
အကြံပြုချက်- ယနေ့တွင် ကြားခံကိရိယာကို သင်အသုံးပြုပါက အိမ်မပြန်မီတွင် စနစ်ကို ရေသန့်သန့်ဖြင့် ဆေးပါ\/သြဂဲနစ်ရောနှောပါ။ အဲဒီလိုမှမဟုတ်ရင် အဲဒီဆားတွေဟာ ပုံဆောင်ခဲဖြစ်သွားပြီး မင်းရဲ့စုပ်တံဖျံတွေကို ဖျက်စီးပစ်လိမ့်မယ်။
-
Glass Trap- သင့် hplc မိုဘိုင်းအဆင့် pH သည် > 8.0 ဖြစ်ပါက၊ ၎င်းသည် မှန်လှောင်ကန်များမှ သတ္တုအိုင်းယွန်းများကို အမှန်တကယ် စွန့်ထုတ်နိုင်သည်ကို သင်သိပါသလား။ ဤကိစ္စများတွင် သံမဏိ သို့မဟုတ် အထူးပြုထားသော ပလပ်စတစ်ကွန်တိန်နာများသို့ ပြောင်းပါ။
မင်းရဲ့ခွဲခွာခြင်းကို ပြီးပြည့်စုံအောင် လုပ်ကြရအောင်
မိုဘိုင်းအဆင့်ကို မှန်ကန်စွာရယူခြင်းသည် HPLC တွင် တိုက်ပွဲ၏ 80% ဖြစ်သည်။ အကယ်၍ သင်သည် "shag carpet" အခြေခံမျဥ်းများ၊ ဖိအားများမြင့်တက်ခြင်း သို့မဟုတ် မကိုက်ညီသောရလဒ်များနှင့် ရုန်းကန်နေရပါက၊ နောက်တစ်ရက်ကို မှန်းဆခြင်းများကို မဖြုန်းတီးပါနှင့်။
ဒီပြဿနာတွေကို ဖြေရှင်းဖို့ ခုံတန်းလျားမှာ နာရီပေါင်း ထောင်နဲ့ချီပြီး နေခဲ့ရတယ်။ မင်းရဲ့ပရောဂျက်ကို လမ်းကြောင်းမှန်ပေါ်ရောက်အောင်လုပ်ဖို့ "ဓာတ်ခွဲခန်းမှာ သက်သေပြထားတဲ့" အကြံဉာဏ်အနည်းငယ်ကို မျှဝေရတာ အမြဲပျော်ပါတယ်။
ကိုးကား
-
Snyder, L. R., Kirkland, J. J., & Dolan, J. W. (2011)။ Modern Liquid Chromatography နိဒါန်း။ 3rd Edition John Wiley & Sons (HPLC ခွဲခြားခြင်းယန္တရားများကို နားလည်ရန်အတွက် "ရွှေစံနှုန်း"။
-
Dolan, J. W. (2002)။ "မိုဘိုင်းအဆင့်ပြင်ဆင်မှု။" LCGC မြောက်အမေရိက၊ ပြဿနာဖြေရှင်းခြင်းစီးရီး။ ( degassing နှင့် filtration အတွက် မရှိမဖြစ်လိုအပ်သော လက်တွေ့လမ်းညွှန် ) ။
-
Aparicio, R. (Ed.) (၂၀၁၃)။ HPLC Optimization ၏လက်စွဲ။ Elsevier (ပြောင်းပြန်အဆင့် chromatography တွင် ဆားဗေးဝင်ရိုးစွန်းနှင့် ကြားခံရွေးချယ်မှုဆိုင်ရာ ပြည့်စုံသောဒေတာ။
-
တက်ကြွသောနည်းပညာများ။ "HPLC စနစ်ပြဿနာဖြေရှင်းခြင်းလမ်းညွှန်- အဖြစ်များသောမိုဘိုင်းအဆင့်အမှားများကိုရှောင်ကြဉ်ခြင်း။" နည်းပညာအရင်းအမြစ်စာကြည့်တိုက်။
-
ရေလုပ်ငန်းကော်ပိုရေးရှင်း။ "Chromatography ၏ အခြေခံမူများ- ပုံမှန်အဆင့်နှင့် ပြောင်းပြန်အဆင့်။" ပညာရေးစီးရီး။
-
သဟဇာတဖြစ်အောင် နိုင်ငံတကာညီလာခံ (ICH)။ Q2(R1) ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုဆိုင်ရာ လုပ်ထုံးလုပ်နည်းများကို အတည်ပြုခြင်း- စာသားနှင့် နည်းစနစ်။ (အထွတ်အထိပ်ဧရိယာ အရေအတွက်နှင့် ထိန်းသိမ်းချိန်တည်ငြိမ်မှုအတွက် စံနှုန်း)။
အင်္ဂလိပ်စာ
တရုတ်
