Uitgebreide gids voor HPLC-monstervoorbehandeling – filtratie, extractie en derivatisering
Nieuws
categorieën
ONDERZOEK

HPLC-monstervoorbehandeling – Stapsgewijze handleiding

21 oktober 2025
TAGS:

Overzicht monstervoorbehandeling

De monstervoorbehandeling omvat alle handelingen vóór injectie. Naast het wegen, oplossen en verdunnen omvat het ook de volgende stappen:

  • Filtratie
  • Extractie
  • Derivatisering (derivatisering vóór de kolom)
  • Vloeistofchromatografie (lagedrukkolomchromatografie)

De voorbehandeling kan handmatig of geautomatiseerd worden uitgevoerd. Bent u bekend met monstervoorbehandeling?


Derivatisering

Sommige monsters kunnen na voorbehandeling nog steeds niet direct worden geïnjecteerd. Derivatisering is vereist om verbindingen zonder UV-absorptie of fluorescentie detecteerbaar te maken door UV- of fluorescentiedetectoren.

  • Verbetert de gevoeligheid
  • Verbetert scheiding (kwaliteitsverandering)

Mogelijke problemen zijn onder meer monsterverlies, contaminatie, onvolledige reacties of meerdere bijproducten, die de nauwkeurigheid kunnen beïnvloeden of fouten kunnen introduceren.

Monsterfiltratie

LC-monsters moeten uniform en deeltjesvrij zijn; deeltjes kunnen de injector beschadigen of de kolom blokkeren. Stappen omvatten:

  • Schud het monster vóór injectie en controleer op deeltjes, troebelheid of emulsies
  • Als er deeltjes worden waargenomen, filtert u het monster met een membraan dat deeltjes van ≥ 0,15 μm kan tegenhouden

Mogelijke problemen: monsterverontreiniging, adsorptie die de concentratie van componenten vermindert en verdamping van oplosmiddelen die fouten veroorzaken.

Extractiemethoden

Extractie scheidt analyten van co-oplosmiddelen of verwijdert storende stoffen (bijvoorbeeld eiwitten). Organische oplosmiddelen moeten weinig giftig zijn, vluchtig, weinig onzuiverheden bevatten en het monster goed oplossen.

Gebruikelijke oplosmiddelen: diethylether, ethylacetaat, dichloormethaan, chloroform, benzeen of mengsels.

Na extractie kunnen monsters direct worden geïnjecteerd of geconcentreerd om de analytconcentratie en gevoeligheid te verhogen.

Wateroplosbare monsterextractie

  1. Zure componenten en zouten: onzuiverheden extraheren met organisch oplosmiddel, aanpassen aan zuur, vervolgens extraheren of injecteren; of droog onder N₂ en los vóór injectie op in een geschikt oplosmiddel.
  2. Basiscomponenten en zouten: onzuiverheden extraheren met organisch oplosmiddel, aanpassen aan basisch, vervolgens extraheren of injecteren; of droog onder N₂ en los vóór injectie op in een geschikt oplosmiddel.
  3. Neutrale componenten: extraheer onzuiverheden met organisch oplosmiddel en analyseer vervolgens rechtstreeks door middel van omgekeerde fasechromatografie.


Vetoplosbare monsterextractie

Extraheer met organisch oplosmiddel of injecteer direct; of droog onder N₂ en los vóór injectie op in een geschikt oplosmiddel.


Verontreinigingsbronnen

Potentiële bronnen van contaminatie in analyse:

Verontreinigingstype

Bron

Preventiemaatregelen

Milieu

Schadelijke gassen, stof, aërosolen

Houd de instrumentruimte geïsoleerd en schoon; AC installeren; controle vochtigheid <70%; voorkomen vocht, corrosie, trillingen

Containers

Glas, keramiek, kwarts, plastic laboratoriumgerei

Selecteer geschikte containers per monstertype; grondig reinigen

Reagentia

Reagentia die niet geschikt zijn voor chromatografie

Gebruik reagentia van chromatografiekwaliteit, hoge zuiverheid of analytische kwaliteit


Voorbereiding van standaardoplossingen

  • Bereid eerst de interne standaardoplossing voor; gebruik dezelfde batch in standaarden en monsters om fouten te verminderen
  • Stoffen moeten geschikt zijn voor chromatografie en stabiel zijn
  • Bewaar standaardoplossingen in bruine flessen bij lage temperatuur
  • Gebruik voor vitamines bruine maatkolven of bescherm tegen licht


Veelvoorkomende problemen bij monstervoorbehandeling en oplossingen

Probleem

Oorzaak

Oplossing

Niet-gerelateerde pieken in het chromatogram

Filtervervuiling

  1. Week het filter in monsteroplosmiddel en test de injectie

  2. Wijzig het filtertype

  3. Gebruik alternatieve schoonmaaktechnieken

Lage piekrespons (vooral monsters met lage concentratie)

Adsorptie op filteroppervlak

  1. Wijzig het filtertype

  2. Verwerk alle monsters onder dezelfde omstandigheden

  3. Gebruik alternatieve schoonmaaktechnieken

Laag herstel

Onvolledige extractie

  1. Verleng de extractietijd, gebruik heet oplosmiddel

  2. Pas de reinigingsmethode aan

Verbrede pieken, kortere levensduur van de kolom

Monsterinterferentie en contaminatie

Verbeter de reinigingsmethode

Slechte precisie

Onvolledig herstel

  1. Optimaliseer of vervang derivatisering, scheiding, extractie of andere omstandigheden

  2. Gebruik geautomatiseerde verwerking om de precisie te verbeteren

Onderzoek