Liquidchromatografie met hoge prestaties (HPLC) is een belangrijke analytische techniek die wordt gebruikt in laboratoria in velden die zo divers zijn als farmaceutische producten, milieuwetenschappen en voedselveiligheid. Binnen de HPLC -wereld zijn er twee hoofdcategorieën: analytische HPLC en preparatieve HPLC. Hoewel beide technieken vergelijkbare principes gebruiken om verbindingen te scheiden, worden ze gebruikt voor verschillende doeleinden en hebben ze verschillende bedrijfsparameters. Deze blog zal de verschillen onderzoeken tussen analytische en preparatieve HPLC, inclusief hun doel, schaal van werking, apparatuur en toepassingen.
Wilt u volledige infor over HPLC -flesjes weten, kijk dan op dit artikel: Encyclopedie van HPLC -flesjes
Analytische HPLC begrijpen
Definitie en doel
Analytische HPLC richt zich voornamelijk op het scheiden en identificeren van verbindingen in een monster. Het primaire doel is om kwalitatieve en kwantitatieve informatie te verkrijgen over de componenten die in een mengsel aanwezig zijn. Analytische HPLC wordt vaak gebruikt voor:
Kwalitatieve analyse: het identificeren van de componenten van een monster.
Kwantitatieve analyse: het bepalen van de concentratie van een specifieke verbinding in een monster.
Werkingsschaal
Analytische HPLC werkt op een kleinere schaal, meestal met microlitermonsterinjecties. De gebruikte volumes bevinden zich in het algemeen in het bereik van 1 tot 100 µl, waardoor meerdere monsters in een enkele run kunnen worden geanalyseerd. Deze kleine schaal is ideaal voor routinematige testen en kwaliteitscontrole.
Kolomgrootte en deeltjesgrootte
De kolommen die worden gebruikt in analytische HPLC zijn meestal klein in diameter, meestal ongeveer 4,6 mm, en zijn verpakt met kleine stationaire fasedeeltjes (3-5 μm). Deze configuratie zorgt voor een hoge resolutie en efficiënte samengestelde scheiding, geschikt voor gedetailleerde analyse.
Detectiemethoden
Analytische HPLC maakt gebruik van een verscheidenheid aan detectiemethoden, waaronder UV-zichtbare, fluorescentie en massaspectrometrie. De keuze van de detector is afhankelijk van de aard van de analyt en de specifieke vereisten van de analyse. Niet-destructieve detectoren worden vaak gebruikt om ervoor te zorgen dat het monster zonder significant verlies kan worden geanalyseerd.
Wil je 50 antwoorden over HPLC -flesjes weten, kijk dan op dit artikel: 50 meest gestelde vragen over HPLC -flesjes
Inzicht in voorbereiding HPLC
Definitie en doel
Preparatieve HPLC daarentegen is bedoeld om specifieke verbindingen van een mengsel te scheiden en te zuiveren. Het belangrijkste doel is om voldoende hoeveelheden van de doelverbinding te isoleren voor verdere analyse of gebruik. Voorbereiden
HPLC wordt vaak gebruikt voor de volgende toepassingen:
Samengestelde isolatie: extractie en zuivering van specifieke verbindingen voor onderzoek of industriële toepassingen.
Voorbereiding van het monster: Bereiding van monsters voor latere analyse of formulering.
Bewerkingsschaal
Preparatieve HPLC wordt op grotere schaal uitgevoerd dan analytische HPLC. Monstervolumes kunnen variëren van enkele milliliter tot verschillende liters, afhankelijk van de verwachte opbrengst van de doelverbinding. Deze grotere schaal maakt het mogelijk om voldoende gezuiverd materiaal te verzamelen voor verder gebruik.
Kolomgrootte en deeltjesgrootte
De kolommen die worden gebruikt voor preparatieve HPLC zijn aanzienlijk groter, meestal variërend van 20 mm tot 100 mm of groter in diameter. De kolommen worden verpakt met grotere stationaire fasedeeltjes (meestal 10-20 µm) om de stroomsnelheden te verhogen en grotere monstervolumes te huisvesten. Dit ontwerp helpt de tegendruk te verminderen en een efficiënte scheiding van verbindingen te bereiken.
Detectiemethoden
In de voorbereidende HPLC kunnen detectiemethoden verschillen van die welke worden gebruikt in analytische HPLC. Hoewel niet-destructieve detectoren nog steeds gebruikelijk zijn, gebruiken voorbereidingssystemen vaak detectoren die in staat zijn om breuken te verzamelen op basis van een elutieprofiel. Hierdoor kunnen specifieke verbindingen worden geïsoleerd terwijl ze uit de kolom elueren.
Wilt u meer weten over de toepassing van chromatografie -flesjes, kijk dan op dit artikel:Vijf reinigingsmethoden voor HPLC -flesjes
Belangrijke verschillen tussen analytische en preparatieve HPLC
|
Functie
|
Analytische HPLC
|
Preparatief HPLC
|
|
Doel
|
Kwalitatieve en kwantitatieve analyse
|
Isolatie en zuivering van verbindingen
|
|
Werkingsschaal
|
Kleinschaal (µl volumes)
|
Grootschalige (ml tot L-volumes)
|
|
Kolomafmetingen
|
Kleinere diameter (4,6 mm)
|
Grotere diameter (20-100 mm)
|
|
Deeltjesgrootte
|
Kleinere deeltjes (3-5 µm)
|
Grotere deeltjes (10-20 µm)
|
|
Stroomsnelheden
|
Lagere stroomsnelheden (0,1-5 ml \ / min)
|
Hogere stroomsnelheden (10-200 ml \ / min)
|
|
Detectiemethoden
|
Niet-destructieve detectoren (UV, MS)
|
Breukverzameling op basis van elutieprofiel
|
Kiezen tussen analytische en preparatieve HPLC
Overweeg bij het kiezen tussen analytische en preparatieve HPLC de volgende factoren:
Doel van analyse: Bepaal of het primaire doel is om verbindingen kwalitatief en kwantitatief te analyseren of om specifieke verbindingen voor verder gebruik te isoleren.
Hoeveelheid monster: evalueer de beschikbare hoeveelheid monster. Als een kleine hoeveelheid monster beschikbaar is, kan analytische HPLC geschikter zijn. Omgekeerd, als een grote hoeveelheid monster vereist is, is de voorbereidende HPLC een betere keuze.
Vereiste zuiverheid en opbrengst: overweeg de vereiste zuiverheid en opbrengst van de doelverbinding. Preparatieve HPLC heeft als doel het herstel van een specifieke verbinding te maximaliseren, terwijl analytische HPLC zich richt op het verstrekken van gedetailleerde informatie over de samenstelling van het monster.
Bronnen en apparatuur: evalueer beschikbare bronnen, inclusief apparatuur en budget. Preparatieve HPLC -systemen zijn meestal duurder en vereisen meer investeringen in apparatuur en bedrijfskosten.
Geïnteresseerd in het beheersen van HPLC -monstervoorbereiding? Bekijk dit artikel:HPLC Sample Preparation Solutions voor de beste resultaten.
Conclusie
Zowel analytische als preparatieve HPLC zijn waardevolle technieken op het gebied van chromatografie, en elk heeft verschillende toepassingen, afhankelijk van de behoeften van onderzoekers en industrie. Hoewel analytische HPLC ideaal is voor gedetailleerde analyse en kwantificering van verbindingen, is preparatieve HPLC essentieel voor het isoleren en zuiveren van specifieke verbindingen voor verdere toepassingen. Inzicht in de verschillen tussen deze twee technieken zal onderzoekers helpen geïnformeerde beslissingen te nemen, hun workflows te optimaliseren en nauwkeurige en betrouwbare resultaten in hun analyses te behalen. Naarmate de HPLC -technologie verder gaat, blijven zowel analytische als preparatieve methoden een integraal onderdeel van succesvol wetenschappelijk onderzoek van alle soorten.
Engels
Chinese
