HPLC Sample Preparation Solutions voor de beste resultaten

Vier stappen voor HPLC -monsterbereiding

Stap 1. Analyse van waterige oplossingen

Stap 2. Voorbereiding van normen

Het voorbereiden van normen voor verbindingsidentificatie en kwantificering kan een vervelend en tijdrovend proces zijn. Nauwkeurig een vaste stof wegen zodat een vooraf gedefinieerd volume oplosmiddel kan worden gebruikt, is moeilijk en afval als gevolg van fouten kan kostbaar zijn - vooral bij het werken met farmaceutische producten. Andere factoren zoals temperatuur bemoeilijken de standaardvoorbereiding verder. Temperatuurschommelingen veranderen de oplosmiddeldichtheid en dragen bij aan dramatische concentratieverschillen.



Het gebruik van een evenwicht dat een weegnauwkeurigheid tot verschillende decimalen mogelijk maakt en het proces kan automatiseren door het saldo te koppelen aan een oplosmiddel dispenser garandeert de hoogste precisie. Het gebruik van software zoals de YAPP16-dosering Q-APP maakt automatische berekeningen en gravimetrische monitoring van gemeten waarden mogelijk. Het documenteren van de temperatuur en dichtheid van het oplosmiddel zorgt ook voor zeer nauwkeurige concentraties, vooral bij het voorbereiden van normen op volgende dagen. Directe gegevensoverdracht van de YAPP16 -weegtoepassing naar de Thermo Scientific ™ Chromeleon ™ 7.2 Chromatography Data System (CDS) -software is een optie voor papierloze gegevensverwerking met volledige gegevensintegriteit.

Stap 3. Ga terug naar de basis met goede pipetting

Het belang van nauwkeurige en precieze pipetten wordt te vaak over het hoofd gezien en als vanzelfsprekend beschouwd. Het niveau van de gebruikersvaardigheid en de ervaring kunnen belangrijke implicaties hebben voor gevoelige analyses zoals HPLC. Het kiezen van de juiste pipet kan de menselijke fouten en de bijbehorende kosten van verspilde oplosmiddelen verminderen.



Mechanische pipetten met een volume -vergrendeling bieden een eenvoudige oplossing voor het voorkomen van accidentele volumeveranderingen, terwijl meer geavanceerde elektronische pipetten gebruikersvariabiliteit elimineren om consequent precieze volumes te leveren. De pipet -tip is ook een belangrijk detail om te overwegen voor HPLC -analyses. Tips voor lage retenties zijn het beste bij het werken met oplosmiddelen van verschillende viscositeiten, omdat ze het monsterherstel maximaliseren. Monsterbesmetting kan ook optreden als gevolg van uitloging van de pipetpunt. Als zodanig behouden tips met een hoge chemische weerstandsmonsterintegriteit.

Stap 4. Filter voor nauwkeurigheid en levensduur

Aanvullende zorg om monsters te filteren voorafgaand aan de analyse verbetert de betrouwbaarheid en kan de levensduur van de HPLC -kolom verlengen door verstoppingseffecten te voorkomen. Spuitfilters zijn een eenvoudige, snelle oplossing voor het filteren van monsters voorafgaand aan kolomchromatografie. Net als bij pipettips vereisen de in HPLC gebruikte oplosmiddelen specifieke filters om uitloging en monsterbesmetting te voorkomen.

Cellulosemembranen zijn resistent tegen dimethylsulfoxide (DMSO), amiden, ketonen, ester en etherverbindingen. Voor vooral harde oplosmiddelen voorkomen niet -gecoate polyethersulfone (PTFO) membranen uitloging en monsterbesmetting. Monsterfiltratie wordt zeer tijdrovend wanneer het monsternummer toeneemt. Multi-sample filtratie-eenheden, zoals het Claristep®-filtratiesysteem, kunnen monsters verwerken zonder spuiten en fast-track monsterbereiding zonder kwaliteit op te offeren.

Vijf problemen waar u op moet letten！

1. Wat zijn de grootste problemen met het voorbereiden van monsters waarmee laboratoria worden geconfronteerd?

Laboratoria staan ​​onder toenemende druk in termen van tijd en kosten, vaak niet alleen met veel monsters, maar ook om monsters van verschillende aard. Voorbereiding van het monster is een gebied waar subtiele verschillen tussen monstertypen of de gebruikte monstervoorbereidingsmethoden en materialen de verkregen resultaten kunnen beïnvloeden. Zorgen voor compatibiliteit tussen de materialen in het filtratieapparaat en het oplosmiddel kan problemen minimaliseren; De niveaus van extraheerbare verbindingen die kunnen interfereren met analytdetectie.

2. Wat gebeurt er als het voorbeeld van de voorbeeldvoorbereiding fout gaat?

Voorafgaand aan analytische krachtige vloeistofchromatografie (HPLC) -toepassingen (HPLC), worden monsters bereid met verschillende methoden, die allemaal het potentieel hebben om analytische resultaten te beïnvloeden door het monster dat in het systeem is geïnjecteerd te beïnvloeden. Ineffectieve monsterbereiding kan leiden tot een vermindering van de kolomleven, verhoogde servicevereisten voor componenten, potentiële downtime van instrumentatie, vermindering van de efficiëntie en reproduceerbaarheid van chromatografische scheiding en vele andere problemen.

3. Op het eerste gezicht lijkt filtratie een eenvoudig proces ...

Hoewel filtratie een schijnbaar klein deel van een grote workflow is, kan de impact van het kiezen van het juiste filter voor een bepaalde toepassing aanzienlijk zijn. Methoden die niet voldoende deeltjes verwijderen, kunnen bijvoorbeeld leiden tot kolomblokkering. Ongepaste keuze van monsterbereidingsapparaten zou onder bepaalde omstandigheden extraheerbare verbindingen in het monster kunnen vrijgeven, analyten van interessante analyten kunnen binden of fouten introduceren door monsterverlies - allemaal beïnvloeden de kwaliteit en reproduceerbaarheid van de waargenomen resultaten. Als u ervan overtuigd bent dat uw filtratiebeenables niet bijdragen aan fouten die onderzoek of wortel-oorzaakonderzoeken vereisen, bespaart u geld en geeft u uzelf gemoedsrust.

4. Wat zijn de meest voorkomende monstervoorbereiding ‘mislukt’?

Onjuiste keuze van het filtermembraan is een probleem dat we veel zien. Problemen kunnen verschijnen als externe pieken uit extractables, die de detectie van de interessante analyten kunnen verstoren. De incompatibiliteit van filtermedia met een monster of oplosmiddel in termen van chemische resistentie is niet alleen beperkt tot oplossingseffecten op de filtermedia. Oplosmiddelen kunnen een lichte zwelling van polymere membraanmaterialen veroorzaken wanneer ze niet volledig compatibel zijn, wat op zijn beurt de filtratieprestaties kan beïnvloeden, wat leidt tot ineffectieve opruiming van monsters. Een manier om dit probleem aan te pakken is door een membraan te kiezen dat in grote lijnen compatibel is met zowel waterige als organische oplosmiddelen. Voor typische HPLC -monsterbereiding zijn spuit- en spuitloze filters die geregenereerde cellulosemembranen bevatten een goede optie vanwege hun brede compatibiliteit met oplosmiddelen.

Het gebruik van een filterapparaat dat groter is dan nodig is voor het voorbereide volume is een andere veel voorkomende valkuil. Het gebruik van te grote filterapparaten betekent dat kleine hoeveelheden van het monster in het filter blijven, zelfs nadat voorzorgsmaatregelen zoveel mogelijk zijn genomen.

5. Wat zijn de voordelen van het serieus nemen van de filtratiestap?

Een fundamenteel doel van de meeste laboratoria die zich bezighouden met analytische testen, is het ontwikkelen van consistente processen die consistente resultaten ten grondslag liggen - en die consistente filtering vereisen. De selectie van een filtratieapparaat met de rechterporiegrootte en retentiekenmerken helpt bij het garanderen van effectieve deeltjesverwijdering, terwijl de keuze van de juiste grootte en het ontwerp van de filtereenheid kan helpen om het monsterverlies te minimaliseren. Goede filtratie helpt ook om de kolom te beschermen en verlengt mogelijk de levensduur van zowel de injector als de kolom.

Conclusie

HPLC is een waardevolle techniek voor levenswetenschappen en biofarmaceutisch onderzoek omdat het nauwkeurige, reproduceerbare resultaten oplevert. Deze nauwkeurigheid hangt af van de integriteit van het HPLC-monster, en de beste manier om te zorgen voor monsters van hoge kwaliteit is om te beginnen met de beste tools. Met oplossingen voor ultrapure water, standaardvoorbereiding, pipetten, tips en filters, houdt de HPLC -monsterbereidingslijn voor elk detail rekening. Geautomatiseerde oplossingen en software helpen ook om de voorbereiding van het voorbeeld te stroomlijnen om schone monsters te leveren voor schone resultaten.

Meer discussies over HPLC -monsterbereidingoplossingen zijn welkom!