Wszystko, co musisz wiedzieć o przygotowaniu próbki HPLC

Przygotowanie próbki jest kluczowym krokiem w analizie HPLC z wielu powodów.

Zminimalizować zakłócenia:Próbki często zawierają zanieczyszczenia i komponenty macierzy, które mogą zakłócać wykrywanie analitów docelowych. Skuteczne techniki przygotowania próbki mogą pomóc usunąć te niechciane substancje i poprawić dokładność analityczną.

Poprawić odzyskiwanie analitów:Właściwe przygotowanie poprawia odzyskiwanie analitów i zapewnia, że ​​wyniki odzwierciedlają faktyczne stężenie pierwotnej próbki. Jest to szczególnie ważne dla analizy śladu, w których anality występują w niskich stężeniach.

Ulepszony kształt szczytowy:Właściwie przygotowane próbki pomagają tworzyć symetryczne i dobrze zdefiniowane piki w chromatogramie. Jest to niezbędne do dokładnej kwantyfikacji. Niewłaściwe przygotowanie próbki może powodować szczytowe ogon i poszerzenie, co komplikuje interpretację danych.

Chroń swój system HPLC:Zanieczyszczenia w próbce mogą uszkodzić kolumny i inne elementy w systemie HPLC, co prowadzi do zwiększonych kosztów konserwacji i przestojów. Właściwe przygotowanie próbki zmniejsza ryzyko zatykania i zużycia systemu.

Pierwszym krokiem w przygotowaniu próbki jest prawidłowe zebranie próbki. Obejmuje to:

Używaj czystych pojemników:Zawsze używaj czystych, obojętnych pojemników, aby uniknąć zanieczyszczenia. Zalecane są szklane lub wysokiej jakości plastikowe pojemniki.

Unikaj zanieczyszczenia:Używaj rękawiczek i czystych narzędzi, aby zapobiec zanieczyszczeniu sebum i innymi źródłami.

Właściwe etykietowanie:Wyraźnie oznacz próbki, aby uniknąć mieszania i zapewnić identyfikowalność.

Homogenizacja próbek zapewnia jednorodność, która jest ważna dla powtarzalnych wyników. Techniki homogenizacji obejmują:

Mechaniczna homogenizacja: mieszanie próbek stałych lub pół-stały za pomocą mieszadła lub homogenizatora.

Homogenizacja ultradźwiękowa:Zastosowanie ultradźwięków do rozproszenia cząstek w płynnej próbce.

W zależności od oczekiwanego stężenia analitów próbki mogą wymagać rozcieńczania lub zatężania. Można to osiągnąć przez:

Roztwór:Rozcieńcz próbkę do pożądanego stężenia przy użyciu tego samego rozpuszczalnika co faza mobilna.

Stężenie:Anality można skoncentrować przy użyciu technik takich jak parowanie lub ekstrakcja fazy stałej (SPE).

Filtracja jest niezbędna do usunięcia cząstek stałych, które mogą zatykać kolumny HPLC. Typowe metody filtrowania obejmują ：

Filtracja błony:Używać0,2 µm lub 0,45 µm filtryusunąć cząstki. Zazwyczaj stosuje się filtry polietalne (PE) lub nylonowe.

Prefiltracja:W przypadku próbek o wysokiej zawartości cząstek prefiltracja przez większy filtr wielkości porów może zapobiec zatkaniu.


50 często zadawanych pytań na temat filtrów strzykawki, sprawdź ten artykuł pouczający: Temat „filtra strzykawki” 50 często zadawanych pytań

Rozważ stabilizację próbki, aby zapobiec degradacji analitu.

Dostosowanie pH:Dostosowanie pH może pomóc ustabilizować niektóre anality. Na przykład kwaśne związki mogą wymagać zakwaszenia, aby zapobiec degradacji.

Dodatki:Dodanie stabilizatorów lub konserwantów może pomóc utrzymać integralność próbki podczas przechowywania i analizy.

Ważne jest, aby wybrać poprawny rozpuszczalnik, aby rozpuścić próbkę i zapewnić zgodność z systemem HPLC. Rozważ następujące:

Polaryzacja rozpuszczalnika:Aby osiągnąć całkowite rozwiązanie, rozpuszczalnik musi pasować do polaryzacji analitu.

Mobilna kompatybilność fazy: Użyj rozpuszczalnika kompatybilnego z fazą mobilną, aby zminimalizować potencjalne zakłócenia.

7. Przygotowanie standardów

Przygotowanie standardów kalibracji jest niezbędne do kwantyfikacji analitu w próbce. Obejmuje to:

Przygotowanie krzywej kalibracji:Przygotuj serię znanych stężeń analitu w celu ustalenia krzywej kalibracji do kwantyfikacji.

Użyj tego samego rozpuszczalnika:Aby zachować spójność, zawsze przygotuj swoje standardy przy użyciu tego samego rozpuszczalnika i warunków co próbki.

Postępuj zgodnie ze standardowymi procedurami operacyjnymi (SOP):Ustal i przestrzegaj SOP w celu przygotowania próbki, aby zapewnić spójność i odtwarzalność.

Używaj wysokiej jakości odczynników i rozpuszczalników:Zawsze używaj rozpuszczalników klasy HPLC i odczynników o dużej czystości, aby zminimalizować zanieczyszczenie.

Utrzymuj swój obszar roboczy w czystości:Utrzymuj obszar przygotowania próbki i zorganizowany, aby zmniejszyć ryzyko zanieczyszczenia.

Dokumentuj wszystko:Zachowaj szczegółowe zapisy swoich procedur przygotowania próbek, w tym wszelkie odchylenia od standardowych protokołów.

W sprawdzeniu metody:Regularnie zweryfikuj metody przygotowania próbek, aby zapewnić one niezawodne i powtarzalne wyniki.

Słaby kształt szczytowy:Jeśli piki są szerokie lub ogonowe, może to wskazywać na niepełne rozpuszczanie lub obecność cząstek stałych. Upewnij się, że próbka jest dokładnie wymieszana i filtrowana.

Ghost Peaks:Ghost Peaks mogą być spowodowane zanieczyszczeniami w rozpuszczalniku lub próbce, używać rozpuszczalników o dużej czystości i upewnić się, że całe szklane naczynia i sprzęt są czyste.

Niska czułość:Jeśli czułość jest niska, rozważ optymalizację metody ekstrakcji lub zwiększenie stężenia analitu.

Zatknięcie kolumn:Częste zatykanie może wskazywać, że próbka zawiera zbyt wiele cząstek stałych lub nie jest odpowiednio filtrowana. Ponownie oceń proces filtracji i rozważ wstępną filtrację.

Niespójne wyniki:Zmienność wyników może wynikać z niespójnego przygotowania próbki. Standaryzuj wszystkie procedury i upewnij się, że personel zaangażowany w przygotowanie próbki jest odpowiednio wyszkolony.

Wraz ze wzrostem zapotrzebowania analitycznego laboratoria przyjmują bardziej zaawansowane techniki przygotowania próbek w celu poprawy wydajności i dokładności:

SPE jest szeroko stosowaną techniką, która pozwala na selektywną ekstrakcję analitów ze złożonych macierzy. Obejmuje przekazanie płynnej próbki przez stały materiał adsorbentowy, który zachowuje docelowy analit, jednocześnie umożliwiając przechodzenie zanieczyszczeń.

LLE to technika oddzielająca anality na podstawie ich rozpuszczalności w dwóch niemieszalnych płynach. Ta metoda jest skuteczna w oddzielaniu związków o różnych polaryzacji i jest często stosowana w analizie środowiskowej i farmaceutycznej.

Quechers to popularna metoda przygotowywania próbek żywności i środowiska, która łączy kroki ekstrakcji i czyszczenia w jednym procesie, czyniąc ją wydajną i opłacalną.

Przepustowość i odtwarzalność można znacznie ulepszyć poprzez zautomatyzowane systemy przygotowania próbek, które mogą wykonywać takie zadania, jak rozcieńczenie, filtracja i SPE przy minimalnej interwencji człowieka, zmniejszając w ten sposób ryzyko błędów.


Chcesz dowiedzieć się więcej o przygotowaniu próbki HPLC, sprawdź ten artykuł: Rozwiązania przygotowania próbki HPLC dla najlepszych wyników

Przygotowanie próbki HPLC jest kluczowym krokiem, który może znacząco wpłynąć na dokładność i niezawodność wyników analitycznych. Postępując zgodnie z najlepszymi praktykami, stosując odpowiednie techniki i rozwiązywanie typowych problemów, laboratoria mogą zoptymalizować proces przygotowania próbki, przyjmując zaawansowane techniki i technologie w miarę ewolucji potrzeb analitycznych. Automatyzacja jeszcze bardziej poprawi wydajność i skuteczność analiz HPLC. Właściwe przygotowanie próbki nie tylko poprawia jakość wyników, ale także chroni system HPLC, zapewniając długoterminową niezawodność i wydajność.