د جریان ماسټر کول: د HPLC ګرځنده مرحلو لپاره د لابراتوار تجربه کونکي لارښود

پیژندنه

زه چیرته تللی یم — د ماسپښین په 2 بجو یو مانیټر ته ګورم، په سمندر کې د ورکې شوې کښتۍ په څیر د بیس لاین څپې ګورم، حیران یم چې ایا "HPLC ډو-هکی" یوازې زما د هوښیارتیا ازموینې لپاره اختراع شوی و. که تاسو د لوړ فعالیت مایع کروماتګرافي (HPLC) شاوخوا خپل سر وتړئ هڅه وکړئ خوندور یاست ، ساه واخلئ. دا یوازې د قیمتي برخو بکس نه دی؛ دا د کیمیا او فزیک تر مینځ یو نازک نڅا ده.

په لابراتوار کې، موږ ډیری وختونه وایو چې ګرځنده مرحله د سیسټم "ژوند کرښه" ده. پرته له دې، ستاسو نمونه یوازې په انجیکټر کې ناست دی، هیڅ ځای ته نه ځي. مګر تاسو څنګه سم "ټرین" غوره کوئ ترڅو خپل مالیکولونه کشف کونکي ته ورسوي؟ راځئ چې دا مات کړو لکه څنګه چې موږ په وقفه خونه کې د قهوې په اړه خبرې کوو.

1. HPLC څه شی دی، واقعیا؟

په اصل کې، HPLC د جلا کولو په اړه دی. د ریس په څیر فکر وکړئ چیرې چې "ټریک" د سټیشنري مرحله (کالم) دی او "باد" د hplc ګرځنده مرحله ده.

جادو پیښیږي ځکه چې مختلف مالیکولونه مختلف "تعلقات" لري. ځینې ​​مالیکولونه د ګرځنده مرحلې سره مینه لري او د کالم له لارې زوم کوي. نور یې "چپکې" دي - دوی د سټینري پړاو سره مینه لري او وروسته پاتې دي. په سرعت کې دا توپیر هغه څه دي چې ستاسو په کروماتگرام کې دا چوټونه رامینځته کوي.

2. نورمال مرحله د برعکس مرحله

دا معمولا هغه ځای دی چیرې چې هرڅوک خپل ویښتان ایستل پیل کوي. زما د کلونو په تمرین کې، ما د دې یادولو لپاره ترټولو اسانه لاره موندلې ده چې د قطبیت په لټه کې دي.

الف. د نورمال پړاو کروماتګرافي

دا د "زاړه ښوونځي" لاره ده. په نورمال پړاو کروماتګرافي کې، سټیشنري مرحله قطبي ده — د قطبي مالیکولونو لپاره د مقناطیس په څیر فکر وکړئ. د ګرځنده مرحله چې موږ یې دلته کاروو غیر قطبي دی، معمولا محلول لکه هیکسین یا هیپټین.

• منطق: قطبي "چپچپانده" مالیکولونه د قطبي کالم په واسطه ساتل کیږي. غیر قطبي مالیکولونه د غیر قطبي ګرځنده مرحلې سره په چټکۍ سره مینځل کیږي.

• د پرو لارښوونه: که تاسو د خپل ګرځنده مرحلې قطبیت زیات کړئ (یو څه isopropanol اضافه کړئ) ، ستاسو نمونې به واقعیا ګړندي حرکت وکړي.

B. د ریورس فیز کروماتګرافي

نن ورځ، دا د سرو زرو معیار دی. شاید 90٪ هغه کار چې زه یې په لابراتوار کې کوم د ریورس مرحله کروماتګرافي شامله ده. دلته، موږ سکریپټ فلپ کوو. کالم غیر قطبي دی (هایډروفوبیک، د تیلو په څیر)، او د ګرځنده مرحله یې قطبي ده (معمولا د اوبو او میتانول یا اکټونیتریل مخلوط).

• منطق: د اوبو سره مینه لرونکي (قطبي) مالیکولونه زوم کوي ځکه چې دوی د غوړ کالم څخه کرکه کوي. غوړ لرونکي (غیر قطبي) مالیکولونه د ګلو په څیر کالم ته ودریږي.

• ولې موږ له دې سره مینه لرو: دا د وړاندوینې وړ ، څو اړخیزه ده او د اوبو پراساس محلولونه کاروي کوم چې اداره کول اسانه دي.

3. د محلول کیفیت "طلایی اصول".

تاسو به د یو دلیل لپاره په لیبلونو کې "HPLC درجه" وګورئ. حتی د ACS درجې یا لږ څه کارولو په اړه فکر مه کوئ. ولې؟ ځکه چې د ټیټې درجې محلولونو کې دا "کوچني" ناپاکۍ به د وخت په تیریدو سره ستاسو په کالم کې راټول شي ، ستاسو حل وژني او عجیب غرونه رامینځته کوي.

تل د ملی-Q (18.2 MΩ.cm) درجې اوبه وکاروئ. که ستاسو اوبه "ناپاکه" وي، ستاسو اساس به د غرونو سلسلې په څیر ښکاري، او تاسو به درې ورځې تیرې کړئ ترڅو معلومه کړئ چې ولې.

4. Degassing او فلټریشن: د فعالیت وژونکي

هوا د hplc ګرځنده مرحلې دښمن دی. د نورمال فشار لاندې، هوا ستاسو په محلولونو کې منحل کیږي. مګر یوځل چې محلول پمپ ته ننوځي ، دا کوچني بلبلونه کولی شي د چیک والو یا کشف کونکي حجرې کې ګیر شي.

• پایله: د جریان نرخ بدلونونه، د نبض اساسات، او د ساتلو وخت حرکت کوي.

• فکس: جوړ شوي ډیګاسرونه وکاروئ ، یا سونیکیشن\/ ویکیوم فلټریشن که تاسو د لوړ حساسیت ازموینې پرمخ وړئ.

فلټر کول اختیاري ندي. حتی د HPLC درجې محلولونه کولی شي د تولید پروسې یا د بوتل کیپ څخه مایکروسکوپیک ذرات ولري. تل د 0.22µm یا 0.45µm جھلی له لارې فلټر کړئ مخکې لدې چې دا ستاسو زیرمو ته لمس کړي. دا یو 5 دقیقې دنده ده چې کولی شي ستاسو کالم د وخت دمخه مړینې څخه وژغوري.

5. بفرونه او د شیشې جال

په ریورس مرحله کروماتګرافي کې، موږ د ionizable نمونو لپاره د pH مستحکم ساتلو لپاره بفرونه کاروو.

• پرو لارښوونه: که تاسو نن ورځ بفر کاروئ، کور ته د تګ دمخه سیسټم په خالصو اوبو سره وینځئ\/عضوي مخلوط. که تاسو نه کوئ، دا مالګې به ستاسو د پمپ مهرونه کرسټال کړي او ټوټه کړي.

• د شیشې جال: ایا تاسو پوهیږئ چې که ستاسو د hplc ګرځنده مرحله pH> 8.0 وي، دا واقعیا کولی شي د شیشې زیرمو څخه فلزي آیونونه وباسي؟ په دې قضیو کې سټینلیس سټیل یا ځانګړي پلاستيکي کانتینرونو ته لاړشئ.

راځئ چې ستاسو جلا کول بشپړ کړو

د ګرځنده مرحلې سم ترلاسه کول په HPLC کې د جګړې 80٪ ده. که تاسو د "شګ غالۍ" اساساتو، د فشار سپکونو، یا متضاد پایلو سره مبارزه کوئ، بله ورځ اټکل مه ضایع کوئ.

ما د دې دقیقو مسلو په حل کولو کې په بنچ کې زرګونه ساعته تیر کړل. زه تل خوښ یم چې یو څه "لابراتوار ثابت" مشورې شریکوم ترڅو ستاسو پروژه بیرته په لاره واچوم.

• WhatsApp: 86 18338832256

• بریښنالیک:boonemi@aijirenvial.com
  

حوالې

• Snyder, L. R. Kirkland, J. J., & Dolan, J. W. (2011). د عصري مایع کروماتګرافي پیژندنه. دریمه نسخه. جان ویلی او سنز. (د HPLC جلا کولو میکانیزمونو د پوهیدو لپاره "د سرو زرو معیار").

• Dolan، J. W. (2002). "د ګرځنده پړاو چمتووالی." LCGC شمالي امریکا، د ستونزو د حل لړۍ. (د ډیګاس کولو او فلټر کولو لپاره لازمي عملي لارښود).

• Aparicio، R. (Ed.). (۲۰۱۳). د HPLC اصلاح کولو لارښود. ایلسیویر. (په ریورس فیز کروماتګرافي کې د محلول قطبي او بفر انتخاب په اړه جامع معلومات).

• Agilent ټیکنالوژي. "د HPLC سیسټم ستونزې حل کولو لارښود: د عام ګرځنده مرحلې غلطیو څخه مخنیوی." د تخنیکي سرچینو کتابتون.

• د اوبو کارپوریشن "د کروماتګرافي اصول: نورمال مرحله د برعکس مرحله." د زده کړې لړۍ.

• د همغږي کولو نړیوال کنفرانس (ICH). Q2(R1) د تحلیلي پروسیجرونو اعتبار: متن او میتودولوژي. (د لوړ ساحې اندازه کولو او ساتلو وخت ثبات لپاره معیاري).