Preparação e filtragem de amostras: garantir a qualidade em cromatografia

Preparação de amostra adequada - recipientes de limpeza, remover partículas, enriquecer os analitos e, se necessário, derivatizar - elimina mais de 90% das anomalias basais de ruído e pressão, garantindo picos acentuados e linhas de base estáveis. A falha aqui resulta em pico de cauda, ​​à deriva linhas de base ou bloqueio da coluna.

1. Contaminação e interferência da matriz

Problema

• Drift de linha de base e ruído crescente obscurece picos menores.

• Picos inesperados aparecem a partir de impurezas lixiviadas.

• Baixa reprodutibilidade entre injeções.
  

  

Causa

• Resíduos em copos: Incompleto - lavagem ácida deixa silicatos; O plástico pode lixiviar plastificantes.

• Agentes de limpeza: rastrear orgânicos em solventes de enxaguar permanecem adsorvidos.

• Partículas ambientais: pó de ar e vocs de laboratório adsorve em amostras abertas.
  

  

Solução

1. POP de limpeza estrita: Mergulhe ácido → Enxágue de água pura ultrassônica → Nitrogênio seco para copos; detergente dedicado para plásticos.

2. Pré -filtragem: Centrifugue a 3000rpm por 10min ou use um pré -filtro de 5 µm antes da filtração final de 0,22 µm.

3. Ambiente controlado: Execute a preparação em um capô de fluxo laminar para minimizar a contaminação no ar.
   
   

2. Filtro de entupimento de filtros incompatíveis

Problema

• Alarmes de pressão de amostrador automático e substituição frequente de agulha.

• Diminuição da vazão, áreas de pico inconsistentes.

• Backpressure elevada e bloqueio de entrada da coluna.
  

  

Causa

• Indatibilidade da membrana: nylon incha em solventes orgânicos; O PVDF flui a temperatura elevada.

• Tamanho incorreto de poros: filtros de 0,22 µm de retirada de partículas finas, mas reduz o fluxo; Os filtros de 0,45 µm ainda podem entupir com microcristais.

Solução

1. Matriz de membrana -solvente: Use pes hidrofílicos \ / mCe para aquoso (ph4-8), ptfe hidrofóbico \ / pvdf para fases orgânicas; Evite acetato de celulose em ácidos fortes.

2. Selecione o tamanho adequado dos poros: Use 0,45 µm para HPLC de rotina, 0,22 µm para UHPLC ou Trace Work; Amostras de alta viscosidade de pré -filtro através de 5 µm.

3. Monitore ΔP: Aumento da pressão da pista; Substitua o filtro quando a contrapressão aumentar> 15%.
   
   

   

3. Incompatibilidade química de solvente -membrana

Problema

• A amostra filtrada parece nublada ou carrega partículas.

• Novo ruído da linha de base ou picos de fantasmas após a filtragem.

• Recuperação reduzida do analito.
  

  

Causa

• Inchaço do solvente: THF incha o PTFE, alterando o tamanho e o fluxo dos poros.

• Lixiviados de membrana: O nylon em ácido fórmico libera oligômeros que absorvem a 214 nm.

Solução

1. Teste de compatibilidade: Mergulhe o filtro no solvente pretendido por 24h a 25 ° C; Inspecione o inchaço ou a mudança de peso.

2. Teste piloto LC -MS: Compare os cromatogramas de íons totais da amostra filtrada versus não filtrada.

3. Use filtros de baixa lixiviação: PTFE ou PEs com adesivos.
   
   

Sistema de qualidade: Correção de Defesa -Monitoramento

Defesa

Padronize os POPs para limpeza, filtração e seleção de membrana para evitar erros.

Monitoramento

Taxa de fluxo recorde, backpressure e linhas de base em branco para detectar o desvio.

Correção

Mantenha uma análise de árvore de falhas para identificação rápida por causa da raízes e ação corretiva.

"A precisão analítica começa com a interceptação da menor partícula."