Ghid cuprinzător pentru pretratarea probelor HPLC – filtrare, extracție și derivatizare
Știri
categorii
INTEROARE

Pretratarea probelor HPLC – Ghid pas cu pas

21 octombrie 2025
Etichete:

Prezentare generală a pretratării eșantionului

Pretratarea probei include toate operațiunile înainte de injectare. Pe lângă cântărire, dizolvare și diluare, acesta implică și următorii pași:

  • Filtrare
  • Extracție
  • Derivatizare (derivare pre-coloană)
  • Cromatografia lichidă (cromatografia pe coloană la presiune joasă)

Pretratarea poate fi efectuată manual sau automat. Sunteți familiarizat cu pretratarea probei?


Derivatizarea

Unele probe încă nu pot fi injectate direct după pretratare. Derivatizarea este necesară pentru a face compuși fără absorbție UV sau fluorescență detectabili de detectoare UV sau fluorescență.

  • Îmbunătățește sensibilitatea
  • Îmbunătățește separarea (schimbarea calității)

Problemele posibile includ pierderea probei, contaminarea, reacțiile incomplete sau mai multe produse secundare, care pot afecta acuratețea sau pot introduce erori.

Filtrarea probei

Probele LC trebuie să fie uniforme și fără particule; particulele pot deteriora injectorul sau pot bloca coloana. Pașii includ:

  • Agitați proba înainte de injectare și verificați dacă există particule, turbiditate sau emulsii
  • Dacă se observă particule, filtrați proba folosind o membrană care poate reține particule ≥0,15 μm

Probleme potențiale: contaminarea probei, concentrația de componente care reduce adsorbția și evaporarea solventului care provoacă erori.

Metode de extracție

Extracția separă analiții de co-solvenți sau elimină substanțele interferente (de exemplu, proteinele). Solvenții organici trebuie să fie cu toxicitate scăzută, volatili, săraci în impurități și să dizolve bine proba.

Solvenți obișnuiți: dietil eter, acetat de etil, diclormetan, cloroform, benzen sau amestecuri.

După extracție, probele pot fi injectate direct sau concentrate pentru a crește concentrația și sensibilitatea analitului.

Extragerea probelor solubile în apă

  1. Componente și săruri acide: extrageți impuritățile cu solvent organic, ajustați la acid, apoi extrageți sau injectați; sau se usucă sub N₂ și se dizolvă în solvent adecvat înainte de injectare.
  2. Componente de bază și săruri: extrageți impuritățile cu solvent organic, ajustați la bazic, apoi extrageți sau injectați; sau se usucă sub N₂ și se dizolvă în solvent adecvat înainte de injectare.
  3. Componente neutre: extrageți impuritățile cu solvent organic, apoi analizați direct prin cromatografie în fază inversă.


Extragerea probelor solubile în grăsimi

Se extrage cu solvent organic sau se injectează direct; sau se usucă sub N₂ și se dizolvă în solvent adecvat înainte de injectare.


Surse de contaminare

Surse potențiale de contaminare în analiză:

Tipul de contaminare

Sursa

Măsuri de prevenire

de mediu

Gaze nocive, praf, aerosoli

Păstrați camera instrumentelor izolată, curată; instalați AC; controlul umidității <70%; prevenirea umezelii, coroziunii, vibrațiilor

Containere

Articole de laborator din sticlă, ceramică, cuarț, plastic

Selectați recipientele adecvate pentru fiecare tip de probă; curatati bine

Reactivi

Reactivi non-cromatografici

Utilizați reactivi de calitate pentru cromatografie, de înaltă puritate sau de calitate analitică


Prepararea soluției standard

  • Pregătiți mai întâi soluția standard internă; utilizați același lot în standarde și mostre pentru a reduce erorile
  • Substanțele trebuie să fie de calitate cromatografică și stabile
  • Depozitați soluțiile standard în sticle maro la temperatură scăzută
  • Pentru vitamine, folosiți baloane cotate maro sau protejați de lumină


Probleme comune în pretratarea probelor și soluții

Problemă

Cauza

Soluție

Vârfuri neînrudite în cromatogramă

Contaminarea filtrului

  1. Înmuiați filtrul în solvent de probă și testați injecția

  2. Schimbați tipul de filtru

  3. Utilizați tehnici alternative de curățare

Răspuns de vârf scăzut (în special probe cu concentrație scăzută)

Adsorbție pe suprafața filtrului

  1. Schimbați tipul de filtru

  2. Procesați toate probele în aceleași condiții

  3. Utilizați tehnici alternative de curățare

Recuperare scăzută

Extracție incompletă

  1. Măriți timpul de extracție, utilizați solvent fierbinte

  2. Reglați metoda de curățare

Vârfuri lărgite, durata de viață scurtă a coloanei

Interferența probei și contaminarea

Îmbunătățiți metoda de curățare

Precizie slabă

Recuperare incompletă

  1. Optimizați sau înlocuiți derivatizarea, separarea, extracția sau alte condiții

  2. Utilizați manipularea automată pentru a îmbunătăți precizia

Anchetă