Предварительная обработка пробы включает в себя все операции перед инъекцией. Помимо взвешивания, растворения и разведения, он также включает в себя следующие этапы:

Фильтрация
Добыча
Дериватизация (дериватизация перед колонкой)
Жидкостная хроматография (колоночная хроматография низкого давления)

Предварительная обработка может выполняться вручную или автоматически. Знакомы ли вы с предварительной обработкой проб?

Дериватизация

Некоторые образцы по-прежнему нельзя вводить напрямую после предварительной обработки. Дериватизация необходима для получения соединений без УФ-поглощения или флуоресценции, обнаруживаемых УФ- или флуоресцентными детекторами.

Улучшает чувствительность
Улучшает разделение (изменение качества)

Возможные проблемы включают потерю образца, загрязнение, неполные реакции или множественные побочные продукты, которые могут повлиять на точность или привести к ошибкам.

Фильтрация проб

Образцы ЖХ должны быть однородными и не содержать частиц; частицы могут повредить инжектор или заблокировать колонку. Шаги включают в себя:

Перед инъекцией встряхните образец и проверьте его на наличие частиц, мутности или эмульсий.
Если наблюдаются частицы, отфильтруйте образец, используя мембрану, которая может удерживать частицы размером ≥0,15 мкм.

Потенциальные проблемы: загрязнение пробы, адсорбция, снижающая концентрацию компонентов, и испарение растворителя, вызывающее ошибки.

Методы извлечения

Экстракция отделяет аналиты от сорастворителей или удаляет мешающие вещества (например, белки). Органические растворители должны быть малотоксичными, летучими, малопримесными и хорошо растворять пробу.

Обычные растворители: диэтиловый эфир, этилацетат, дихлорметан, хлороформ, бензол или их смеси.

После экстракции образцы можно вводить напрямую или концентрировать для повышения концентрации и чувствительности аналита.

Водорастворимая экстракция проб

Кислотные компоненты и соли: экстрагировать примеси органическим растворителем, довести до кислотности, затем экстрагировать или ввести; или высушить под N₂ и растворить в подходящем растворителе перед инъекцией.
Основные компоненты и соли: экстрагировать примеси органическим растворителем, довести до основного состояния, затем экстрагировать или ввести; или высушить под N₂ и растворить в подходящем растворителе перед инъекцией.
Нейтральные компоненты: экстрагируйте примеси органическим растворителем, затем проанализируйте непосредственно с помощью обращенно-фазовой хроматографии.

Экстракция жирорастворимых проб

Экстрагировать органическим растворителем или ввести напрямую; или высушить под N₂ и растворить в подходящем растворителе перед инъекцией.

Источники загрязнения

Потенциальные источники загрязнения при анализе:

Тип загрязнения	Источник	Меры профилактики
Экологическая	Вредные газы, пыль, аэрозоли	Содержите приборную комнату изолированной и чистой; установить кондиционер; контролировать влажность <70%; предотвращают попадание влаги, коррозии, вибрации
Контейнеры	Стеклянная, керамическая, кварцевая, пластиковая лабораторная посуда	Выберите подходящие контейнеры для каждого типа пробы; тщательно очистить
Реагенты	Реагенты нехроматографического качества	Используйте реагенты хроматографического, высокой чистоты или аналитического качества.

Приготовление стандартного раствора

Сначала подготовьте раствор внутреннего стандарта; используйте одну и ту же партию в стандартах и образцах, чтобы уменьшить количество ошибок
Вещества должны быть хроматографически чистыми и стабильными.
Стандартные растворы хранят в коричневых флаконах при низкой температуре.
Для витаминов используйте коричневые мерные колбы или защищайте от света.

Распространенные проблемы предварительной обработки проб и их решения

Проблема	Причина	Решение
Несвязанные пики на хроматограмме	Загрязнение фильтра	Замочите фильтр в растворителе пробы и выполните пробный ввод. Изменить тип фильтра Используйте альтернативные методы очистки.
Низкий пиковый отклик (особенно образцы с низкой концентрацией)	Адсорбция на поверхности фильтра	Изменить тип фильтра Обработка всех образцов в одинаковых условиях Используйте альтернативные методы очистки.
Низкое восстановление	Неполное извлечение	Увеличьте время экстракции, используйте горячий растворитель. Отрегулируйте метод очистки
Расширенные пики, сокращенный срок службы колонки	Помехи и загрязнение проб	Улучшить метод очистки
Плохая точность	Неполное восстановление	Оптимизируйте или замените дериватизацию, разделение, экстракцию или другие условия. Используйте автоматизированную обработку для повышения точности

Влияние чрезвычайно высоких/низких температур и светового воздействия на стабильность образцов: теория и методология

Вернуться к списку