Все, что вам нужно знать о подготовке образца ВЭЖХ

Подготовка выборки является важным шагом в анализе ВЭЖХ по ряду причин.

Минимизировать вмешательства:Образцы часто содержат примеси и компоненты матрицы, которые могут мешать обнаружению целевых аналитов. Эффективные методы подготовки образцов могут помочь удалить эти нежелательные вещества и повысить аналитическую точность.

Улучшить восстановление аналита:Правильная подготовка улучшает восстановление аналита и гарантирует, что результаты отражают фактическую концентрацию исходной выборки. Это особенно важно для анализа трассировки, где аналиты присутствуют при низких концентрациях.

Улучшенная пиковая форма:Правильно приготовленные образцы помогают образовать симметричные и четко определенные пики в хроматограмме. Это важно для точной количественной оценки. Неправильная подготовка образца может привести к пиковому хвосту и расширению, что усложняет интерпретацию данных.

Защитите свою систему ВЭЖХ:Загрязняющие вещества в вашей выборке могут повредить столбцы и другие компоненты в вашей системе ВЭЖХ, что приводит к увеличению затрат на техническое обслуживание и простоя. Правильная подготовка образца снижает риск засорения и износа системы.

Первым шагом в подготовке образца является правильное собрание вашего образца. Это включает в себя:

Используйте чистые контейнеры:Всегда используйте чистые инертные контейнеры, чтобы избежать загрязнения. Рекомендуются стеклянные или высококачественные пластиковые контейнеры.

Избегайте загрязнения:Используйте перчатки и чистые инструменты, чтобы предотвратить загрязнение кожного сала и других источников.

Правильная маркировка:Четко маркировки образцов, чтобы избежать смешивания и обеспечить отслеживание.

Гомогенизация выборки обеспечивает однородность, которая важна для воспроизводимых результатов. Методы гомогенизации включают:

Механическая гомогенизация: смешивание твердых или полусветных образцов с использованием мешалки или гомогенизатора.

Ультразвуковая гомогенизация:Применение ультразвука для диспергирования частиц в образце жидкости.

В зависимости от ожидаемой концентрации аналитов, образцы могут быть разбавлены или концентрироваться. Это может быть достигнуто:

Разрушение:Разбавьте образец до желаемой концентрации, используя тот же растворитель, что и подвижный этап.

Концентрация:Аналиты могут быть сконцентрированы с использованием таких методов, как испарение или экстракция твердой фазы (SPE).

Фильтрация необходима для удаления частиц, которые могут засорить столбцы ВЭЖХ. Общие методы фильтрации включают в себя ：

Мембранная фильтрация:ИспользоватьФильтры 0,2 мкм или 0,45 мкмудалить частицы. Обычно используются полиэфирфона (PES) или нейлоновые фильтры.

Префильтрация:Для образцов с высоким содержанием частиц префильтрация через больший фильтр размер пор может предотвратить засорение.


50 часто задаваемые вопросы о фильтрах шприц, обязательно ознакомьтесь с этой информативной статьей: Тема «фильтра шприца» 50 часто задаваемых вопросов

Рассмотрим стабилизацию вашего образца, чтобы предотвратить деградацию аналита.

Регулировка pH:Регулировка pH может помочь стабилизировать определенные аналиты. Например, кислые соединения могут потребовать подкисления для предотвращения разложения.

Добавки:Добавление стабилизаторов или консервантов может помочь поддерживать целостность образца во время хранения и анализа.

Важно выбрать правильный растворитель, чтобы растворить образец и обеспечить совместимость с вашей системой ВЭЖХ. Рассмотрим следующее:

Полярность растворителя:Для достижения полного растворения растворитель должен соответствовать полярности аналита.

Совместимость мобильной фазы: Используйте растворитель, который совместим с мобильной фазой, чтобы минимизировать потенциальные помехи.

7. Подготовка стандартов

Подготовка стандартов калибровки имеет важное значение для количественной оценки аналита в образце. Это включает в себя:

Приготовление калибровочной кривой:Подготовьте серию известных концентраций аналита, чтобы установить калибровочную кривую для количественной оценки.

Используйте тот же растворитель:Чтобы поддерживать согласованность, всегда готовите свои стандарты, используя тот же растворитель и условия, что и ваши образцы.

Следуйте стандартным рабочим процедурам (СОП):Установить и придерживаться SOP для подготовки образца, чтобы обеспечить согласованность и воспроизводимость.

Используйте высококачественные реагенты и растворители:Всегда используйте растворители ВЭЖХ-класса и реагенты с высокой чистотой прочткой, чтобы минимизировать загрязнение.

Держите свое рабочее пространство в чистоте:Держите зону приготовления образца в чистоте и организованной, чтобы снизить риск загрязнения.

Документировать все:Ведите подробные записи о процедурах подготовки образца, включая любые отклонения от стандартных протоколов.

Проверить методы:Регулярно проверять методы подготовки образца, чтобы обеспечить надежные и воспроизводимые результаты.

Плохая форма пика:Если пики широкие или хвост, это может указывать на неполное растворение или наличие частиц. Убедитесь, что ваш образец тщательно смешан и отфильтрован.

Призрак пиков:Призрачные пики могут быть вызваны примесями в растворителе или образце, используют растворители высокой чистоты и гарантировать, что все стеклянные посуды и оборудование будут чистыми.

Низкая чувствительность:Если чувствительность низкая, рассмотрите возможность оптимизации метода экстракции или увеличить концентрацию вашего аналита.

Забивание столбца:Частое засорение может указывать на то, что ваш образец содержит слишком много частиц или недостаточно отфильтрована. Переоценка процесса фильтрации и рассмотрите предварительную фильтрацию.

Противоречивые результаты:Различия в результатах могут быть связаны с непоследовательной подготовкой образца. Стандартизировать все процедуры и обеспечить должным образом подготовку персонала, участвующего в подготовке образцов.

По мере увеличения аналитических требований лаборатории принимают более продвинутые методы подготовки образцов для повышения эффективности и точности:

SPE - это широко используемый метод, который позволяет селективную извлечение аналитов из сложных матриц. Он включает в себя прохождение образца жидкости через твердый адсорбентный материал, который сохраняет целевой аналит, позволяя проходить примеси.

LLE - это метод, который разделяет аналиты, основанные на их растворимости в двух несмешивающихся жидкостях. Этот метод эффективен в разделении соединений с различными полярностями и часто используется в экологическом и фармацевтическом анализе.

Quechers-это популярный метод для приготовления образцов продуктов питания и окружающей среды, который сочетает в себе этапы извлечения и очистки в один процесс, что делает его эффективным и экономически эффективным.

Пропускная способность и воспроизводимость могут быть значительно улучшены с помощью автоматических систем подготовки образцов, которые могут выполнять такие задачи, как разбавление, фильтрация и SPE с минимальным вмешательством человека, тем самым снижая риск ошибок.


Хотите узнать больше о подготовке образцов ВЭЖХ, пожалуйста, проверьте эту статью: Решения для приготовления образца ВЭЖХ для достижения наилучших результатов

Подготовка образца ВЭЖХ является важнейшей шагом, которая может значительно повлиять на точность и надежность аналитических результатов. Следуя лучшим практикам, используя соответствующие методы и решая общие проблемы, лаборатории могут оптимизировать процесс подготовки выборки путем принятия передовых методов и технологий по мере развития аналитических потребностей. Автоматизация еще больше повысит эффективность и эффективность анализа ВЭЖХ. Правильная подготовка выборки не только улучшает качество результатов, но и защищает систему ВЭЖХ, обеспечивая долгосрочную надежность и производительность.