Выбор правильного буфера для мобильной фазы ВЭЖХ имеет решающее значение для достижения оптимального разделения и анализа вашего образцыПолем Буферы помогают поддерживать стабильный рН, который необходим для контроля состояния ионизации ваших аналитов, что влияет на время их удержания и пиковую форму. Ниже приведен подробный обзор того, как выбрать лучший буфер для вашего приложения ВЭЖХ.

Вы знаете о приготовлении образцов ВЭЖХ? Нажмите на эту статью, чтобы узнать больше: «Все, что вам нужно знать о приготовлении образца ВЭЖХ» »

Важность выбора буфера

Буфер - это раствор, pH которого не изменяется после добавления небольшого количества кислоты или основания. Основываясь на их составе, буферы могут быть классифицированы как кислые или базовые. Эффективность буфера определяется его PKA, который в идеале должен находиться в пределах ± 1 PH единицы желаемой мобильной фазы pH для оптимальной буферизации.

Ключевые факторы, которые следует учитывать

1.PH Диапазон: pH подвижной фазы должен находиться не менее 2 PH единиц от PKA аналита. Это помогает подавить ионизацию кислых или основных аналитов, максимизируя их удержание в колонке. Например, если аналит представляет собой слабую кислоту с PKA 4,5, использование подвижной фазы с pH около 2,0 сохранит ее в неионизированном состоянии, улучшая удержание.

2. Тип буфера: общие буферы, используемые в ВЭЖХ, включают:

Фосфатные буферы: эффективные в диапазоне pH от 2,0 до 8,0, фосфатные буферы широко используются из -за их стабильности и совместимости со многими аналитами. Они особенно подходят для приложений LC-UV.

Ацетатные буферы: они также популярны для анализов LC-UV и могут использоваться в аналогичных диапазонах рН, что и фосфатные буферы.

Волатильные буферы: для применений LC-MS, летучие буферы, такие как формиат, ацетат и бикарбонат аммония, являются предпочтительными, потому что их можно легко удалить в процессе масс-спектрометрии.

3. Концентрация буфера: Типичная начальная концентрация для буферов в ВЭЖХ составляет от 25 до 50 мм. Более высокие концентрации могут улучшить пиковую форму и эффективность, но также могут привести к осадкам при смешивании с органическими растворителями. Рекомендуется сохранить концентрацию буфера ниже 25 мм, чтобы избежать осложнений.

4. Химическая чистота: всегда используйте буферы хроматографического уровня высокого чистоты, чтобы предотвратить загрязнение и обеспечить надежные результаты. Примеси могут привести к неожиданному взаимодействию и изменчивости во время удержания.

Температурные эффекты: температура может влиять на рН буферных растворов. Важно подготовить и хранить буферы при постоянной температуре, чтобы поддерживать их эффективность.

Хотите узнать 50 ответов о флаконах ВЭЖХ, пожалуйста, проверьте эту статью: 50 наиболее часто задаваемые вопросы о флаконах ВЭЖХ

Практические советы для подготовки буфера

Метод приготовления: буферы могут быть получены путем смешивания эквимолярных количеств их кислых и основных компонентов или титрования основного раствора с кислотой. Избегайте корректировки pH после добавления органических растворителей, так как это может привести к непоследовательным результатам.

Свежие растворы: регулярно готовите свежие буферные растворы, чтобы минимизировать рост микробов и деградацию компонентов, что может повлиять на хроматографические характеристики.

Избегание коррозии: некоторые буферы, такие как цитрат, могут корродировать компоненты из нержавеющей стали систем ВЭЖХ. Обеспечить тщательное промывание системы после использования таких буферов для предотвращения повреждения.

Заключение

Выбор правильного буфера для мобильной фазы ВЭЖХ имеет решающее значение для достижения надежных и воспроизводимых результатов. Рассмотрим pH, тип буфера, концентрацию и чистоту при выборе. Следуя этим рекомендациям, вы можете оптимизировать свой метод ВЭЖХ, чтобы эффективно разделить и проанализировать ваши образцы.

Хотите узнать цену флаконов ВЭЖХ, пожалуйста, проверьте эту статью: ВЭЖХ цена флаконов: 50 наиболее часто задаваемые вопросы

Как правильно использовать пробирки для трески для тестирования качества воды?

Как избежать прорыва фильтра в фильтрах шприц