تعارف
مان اتي پهتو آهيان جتي توهان آهيو- 2 AM تي هڪ مانيٽر تي نظر وجهندي، سمنڊ ۾ گم ٿيل ٻيڙي وانگر بيس لائين ڊرفٽ ڏسي، حيران ٿي ويس ته ڇا ”HPLC ڊو-هڪي“ ايجاد ڪئي وئي هئي صرف منهنجي عقل کي جانچڻ لاءِ. جيڪڏهن توهان پنهنجي سر کي اعلي ڪارڪردگي مائع ڪروميگرافي (HPLC) جي چوڌاري لپڻ جي ڪوشش ڪري رهيا آهيو، هڪ سانس وٺو. اهو صرف قيمتي حصن جو هڪ دٻو ناهي؛ اهو ڪيمسٽري ۽ فزڪس جي وچ ۾ هڪ نازڪ رقص آهي.
ليبارٽري ۾، اسان اڪثر چوندا آهيون موبائل مرحلو سسٽم جي "زندگي لائن" آهي. ان کان سواء، توهان جو نمونو صرف هڪ انجنيئر ۾ ويٺي آهي، ڪٿي به نه وڃي. پر توهان پنهنجي ماليڪيول کي ڊيڪٽر تائين پهچائڻ لاءِ صحيح ”ٽرين“ ڪيئن چونڊيندا آهيو؟ اچو ته ان کي ٽوڙي ڇڏيون جيئن اسان بريڪ روم ۾ ڪافي تي گفتگو ڪري رهيا آهيون.
1. HPLC ڇا آهي، واقعي؟
ان جي بنياد تي، HPLC علحدگيء بابت آهي. ان کي هڪ ريس وانگر سوچيو جتي "ٽريڪ" اسٽيشنري مرحلو آهي (ڪالمن) ۽ "واءِ" ڊوڙندڙن کي دٻائي hplc موبائل مرحلو آهي.
جادو ٿئي ٿو ڇاڪاڻ ته مختلف انوولن ۾ مختلف "تعلقات" آهن. ڪجھ ماليڪيولز موبائيل مرحلي کي پسند ڪن ٿا ۽ ڪالمن ذريعي زوم ڪن ٿا. ٻيا "چپچپا" آهن - انهن کي اسٽيشنري مرحلي تي ڪاوڙ آهي ۽ پوئتي رهجي ويا آهن. رفتار ۾ هي فرق اهو آهي جيڪو توهان جي ڪروميٽگرام تي اهي چوٽي ٺاهي ٿو.
2. عام مرحلو بمقابله ريورس مرحلو
اهو عام طور تي آهي جتي هرڪو پنهنجا وار ڪڍڻ شروع ڪري ٿو. منهنجي سالن جي مشق ۾، مون کي ياد ڪرڻ جو آسان طريقو مليو آهي پولارٽي کي ڏسڻ سان.
A. نارمل فيز ڪروميٽوگرافي
هي آهي "پراڻي اسڪول" جو طريقو. ڪروميٽوگرافي جي عام مرحلي ۾، اسٽيشنري مرحلو پولر هوندو آهي- ان کي پولر ماليڪيولز لاءِ مقناطيس وانگر سمجهو. موبائيل مرحلو جيڪو اسان هتي استعمال ڪندا آهيون غير پولر آهي، عام طور تي سولوينٽس جهڙوڪ هيڪسين يا هيپٽين.
-
منطق: پولر "چپچپا" ماليڪيولز پولر ڪالمن طرفان واپس رکيا ويندا آهن. غير پولر ماليڪيولز نان پولر موبائيل مرحلي سان جلدي ڌوئي ويندا آهن.
-
پرو ٽپ: جيڪڏهن توهان پنهنجي موبائيل مرحلي جي قطبيت کي وڌايو (ٿورو آئوسوپروپنول شامل ڪرڻ)، توهان جا نمونا اصل ۾ تيز ٿي ويندا.
B. ريورس فيز ڪروميٽوگرافي
اڄ، هي سون معيار آهي. شايد 90 سيڪڙو ڪم جيڪو آئون ليب ۾ ڪريان ٿو ان ۾ ريورس فيز ڪروميٽوگرافي شامل آهي. هتي، اسان اسڪرپٽ کي ڦيرايو. ڪالم غير پولر آهي (هائيڊروفوبڪ، تيل وانگر)، ۽ فيز موبائل پولر آهي (عام طور تي پاڻي ۽ ميٿانول يا ايسٽونائيٽريل جو ميلاپ).
-
منطق: پاڻي سان پيار ڪندڙ (پولر) ماليڪيولز ان ڪري وڌندا آهن ڇاڪاڻ ته اهي تيل واري ڪالمن کان نفرت ڪندا آهن. ٿلهي سان پيار ڪندڙ (غير قطبي) ماليڪيول ڪالمن سان چپڪندا آهن جيئن گلو.
-
اسان ان سان ڇو پيار ڪندا آهيون: اهو پيش گوئي، ورڇيل، ۽ پاڻي تي ٻڌل سالوينٽس استعمال ڪري ٿو جيڪي منظم ڪرڻ آسان آهن.
3. Solvent معيار جو "گولڊن اصول".
توهان ڏسندا "HPLC گريڊ" ليبل تي هڪ سبب لاء. ACS گريڊ يا ڪجھ به گھٽ استعمال ڪرڻ بابت به نه سوچيو. ڇو؟ ڇاڪاڻ ته اهي "ننڍا" نجاست جيڪي هيٺين درجي جي سالوينٽس ۾ توهان جي ڪالمن تي وقت سان گڏ گڏ ٿيندا، توهان جي قرارداد کي ماريندا ۽ عجيب ماضي جي چوٽي ٺاهيندا.
هميشه Milli-Q (18.2 MΩ.cm) گريڊ پاڻي استعمال ڪريو. جيڪڏهن توهان جو پاڻي "گندي" آهي، توهان جي بنيادي لڪير هڪ جبل جي حد وانگر نظر ايندي، ۽ توهان ٽن ڏينهن تائين اهو ڄاڻڻ جي ڪوشش ڪندا ڇو.
4. Degassing ۽ فلٽريشن: ڪارڪردگي قاتل
ايئر hplc موبائل مرحلي جو دشمن آهي. عام دٻاء هيٺ، هوا توهان جي محلولن ۾ ڦهلائي ٿي. پر هڪ دفعو اهو محلول پمپ تي اچي ٿو، اهي ننڍڙا بلبل چيڪ والوز يا ڊيڪٽر سيل ۾ ڦاسي سگهن ٿا.
فلٽريشن اختياري نه آهي. ايستائين جو HPLC گريڊ سولوينٽس ۾ پيداوار جي عمل يا بوتل جي ڪيپ مان خوردبيني ذرات هوندا. هميشه 0.22µm يا 0.45µm جھلي ذريعي فلٽر ڪريو ان کان اڳ جو اهو توهان جي ذخيري کي ڇهيو. اهو هڪ 5 منٽن جو ڪم آهي جيڪو توهان جي ڪالمن کي وقت کان اڳ موت کان بچائي سگهي ٿو.
5. بفر ۽ شيشي جا پيچ
ريورس فيز ڪروميٽوگرافي ۾، اسان بفر استعمال ڪندا آهيون پي ايڇ کي مستحڪم رکڻ لاءِ ionizable نموني لاءِ.
-
پرو ترڪيب: جيڪڏهن توهان اڄ بفر استعمال ڪيو ٿا، گهر وڃڻ کان اڳ سسٽم کي خالص پاڻي سان ڌوئو \/ نامياتي مکس. جيڪڏهن توهان نٿا ڪريو، اهي نمونا توهان جي پمپ جي مهر کي ڇڪيندا ۽ ڇڪيندا.
-
The Glass Trap: ڇا توهان کي خبر آهي ته جيڪڏهن توهان جو hplc موبائل مرحلو pH> 8.0 آهي، ته اهو اصل ۾ شيشي جي ذخيرن مان ڌاتو آئن کي خارج ڪري سگهي ٿو؟ انهن حالتن ۾ اسٽينلیس سٹیل يا خاص پلاسٽڪ ڪنٽينرز کي تبديل ڪريو.
اچو ته توهان جي علحدگي کي مڪمل طور تي حاصل ڪريو
موبائل مرحلو صحيح حاصل ڪرڻ HPLC ۾ جنگ جو 80٪ آهي. جيڪڏهن توهان جدوجهد ڪري رهيا آهيو "شگ قالين" بيس لائينز، پريشر اسپيڪس، يا متضاد نتيجا، ٻيو ڏينهن ضايع نه ڪريو اندازو لڳايو.
مون بينچ تي هزارين ڪلاڪ گذاريا آهن انهن صحيح مسئلن کي حل ڪرڻ. مان توهان جي منصوبي کي ٽريڪ تي واپس آڻڻ لاءِ “ليب ثابت ٿيل” مشوري جو ٿورو شيئر ڪرڻ لاءِ هميشه خوش آهيان.
حوالو
-
سنيڊر، ايل آر، ڪرڪلينڊ، جي جي، ۽ ڊولن، جي ڊبليو (2011). جديد مائع ڪروميٽوگرافي جو تعارف. ٽيون ايڊيشن. جان ويلي اينڊ سنز. (HPLC علحدگيء واري ميڪانيزم کي سمجھڻ لاء "گولڊ معيار").
-
ڊولن، جي ڊبليو (2002). "موبائيل مرحلي جي تياري." LCGC اتر آمريڪا، مسئلو حل ڪرڻ وارو سلسلو. (ڊيگاسنگ ۽ فلٽريشن لاءِ لازمي عملي گائيڊ).
-
Aparicio، R. (ايڊ.). (2013). HPLC اصلاح جو دستور. ايلسويئر. (ريورس فيز ڪروميٽوگرافي ۾ سولوينٽ پولارٽي ۽ بفر جي چونڊ تي جامع ڊيٽا).
-
Agilent ٽيڪنالاجي. "HPLC سسٽم جي مشڪلاتن جي ھدايت: عام موبائل مرحلن جي غلطي کان بچڻ." ٽيڪنيڪل ريسورس لائبريري.
-
واٽر ڪارپوريشن. "Chromatography جا اصول: عام مرحلو بمقابلہ ريورس مرحلو." تعليمي سلسلو.
-
هارمونائيزيشن تي بين الاقوامي ڪانفرنس (ICH). Q2(R1) تجزياتي طريقيڪار جي تصديق: متن ۽ طريقو. (چوٽي واري علائقي جي مقدار ۽ برقرار رکڻ واري وقت جي استحڪام لاءِ معياري).
انگريزي
چيني
