Niektoré vzorky sa po predbežnej úprave stále nedajú priamo vstreknúť. Derivatizácia je potrebná na výrobu zlúčenín bez UV absorpcie alebo fluorescencie detegovateľnej UV alebo fluorescenčnými detektormi.

Zlepšuje citlivosť
Zlepšuje separáciu (zmena kvality)

Medzi možné problémy patrí strata vzorky, kontaminácia, neúplné reakcie alebo viaceré vedľajšie produkty, ktoré môžu ovplyvniť presnosť alebo spôsobiť chyby.

Filtrácia vzorky

LC vzorky musia byť jednotné a bez častíc; častice môžu poškodiť injektor alebo zablokovať kolónu. Kroky zahŕňajú:

Pred vstreknutím vzorku pretrepte a skontrolujte, či neobsahuje častice, zákal alebo emulzie
Ak spozorujete častice, prefiltrujte vzorku pomocou membrány, ktorá dokáže zadržať častice ≥0,15 μm

Možné problémy: kontaminácia vzorky, adsorpcia znižujúca koncentráciu komponentov a odparovanie rozpúšťadla spôsobujúce chyby.

Extrakčné metódy

Extrakcia oddeľuje analyty od ko-rozpúšťadiel alebo odstraňuje interferujúce látky (napr. proteíny). Organické rozpúšťadlá by mali byť nízkotoxické, prchavé, s nízkym obsahom nečistôt a dobre rozpúšťať vzorku.

Bežné rozpúšťadlá: dietyléter, etylacetát, dichlórmetán, chloroform, benzén alebo zmesi.

Po extrakcii môžu byť vzorky vstreknuté priamo alebo koncentrované, aby sa zvýšila koncentrácia analytu a citlivosť.

Extrakcia vzorky rozpustnej vo vode

Kyslé zložky a soli: extrahujte nečistoty organickým rozpúšťadlom, upravte na kyslé, potom extrahujte alebo vstreknite; alebo vysušte pod N2 a pred injekciou rozpustite vo vhodnom rozpúšťadle.
Základné zložky a soli: extrahujte nečistoty organickým rozpúšťadlom, upravte na zásadité, potom extrahujte alebo vstreknite; alebo vysušte pod N2 a pred injekciou rozpustite vo vhodnom rozpúšťadle.
Neutrálne zložky: extrahujte nečistoty organickým rozpúšťadlom, potom analyzujte priamo chromatografiou na reverznej fáze.

Extrakcia vzorky rozpustnej v tukoch

Extrahujte organickým rozpúšťadlom alebo vstreknite priamo; alebo vysušte pod N2 a pred injekciou rozpustite vo vhodnom rozpúšťadle.

Zdroje kontaminácie

Možné zdroje kontaminácie v analýze:

Typ kontaminácie	Zdroj	Preventívne opatrenia
Environmentálne	Škodlivé plyny, prach, aerosóly	Udržujte prístrojovú miestnosť izolovanú, čistú; nainštalujte AC; regulovať vlhkosť <70%; zabrániť vlhkosti, korózii, vibráciám
Kontajnery	Laboratórny riad zo skla, keramiky, kremeňa, plastu	Vyberte vhodné nádoby podľa typu vzorky; dôkladne vyčistiť
Činidlá	Činidlá inej ako chromatografickej kvality	Používajte reagencie chromatografickej, vysokočistej alebo analytickej kvality

Príprava štandardného roztoku

Najskôr pripravte roztok vnútorného štandardu; použite rovnakú dávku v štandardoch a vzorkách na zníženie chýb
Látky musia byť chromatografické a stabilné
Štandardné roztoky skladujte v hnedých fľašiach pri nízkej teplote
Na vitamíny používajte hnedé odmerné banky alebo chráňte pred svetlom

Bežné problémy pri predúprave vzoriek a riešeniach

Problém	Príčina	Riešenie
Nesúvisiace píky v chromatograme	Znečistenie filtra	Namočte filter do rozpúšťadla vzorky a skúšobnú injekciu Zmeňte typ filtra Používajte alternatívne techniky čistenia
Nízka maximálna odozva (najmä vzorky s nízkou koncentráciou)	Adsorpcia na povrchu filtra	Zmeňte typ filtra Všetky vzorky spracujte za rovnakých podmienok Používajte alternatívne techniky čistenia
Nízka regenerácia	Neúplná extrakcia	Zvýšte čas extrakcie, použite horúce rozpúšťadlo Upravte spôsob čistenia
Rozšírené píky, skrátená životnosť kolóny	Rušenie vzorky a kontaminácia	Zlepšite spôsob čistenia
Slabá presnosť	Neúplné zotavenie	Optimalizujte alebo nahraďte derivatizáciu, separáciu, extrakciu alebo iné podmienky Na zvýšenie presnosti použite automatizovanú manipuláciu

Predchádzajúce:

Vplyv extrémne vysokej\/nízkej teploty a vystavenia svetlu na stabilitu vzorky: teória a metodika

Ďalej:

Späť na zoznam