Izbira pravega medpomnilnika za vašo mobilno fazo HPLC je ključnega pomena za doseganje optimalne ločitve in analize vašega Vzorci. Vpomnilniki pomagajo ohraniti stabilen pH, kar je bistvenega pomena za nadzor ionizacijskega stanja vaših analitov, kar vpliva na njihov zadrževalni čas in vrhunsko obliko. Spodaj je podroben pregled, kako izbrati najboljši medpomnilnik za vašo aplikacijo HPLC.

Ali veste za pripravo vzorca HPLC? Kliknite ta članek, če želite izvedeti več: "Vse, kar morate vedeti o pripravi vzorca HPLC"

Pomen izbire medpomnilnika

Pufer je rešitev, katere pH se ne spremeni po dodajanju majhne količine kisline ali baze. Na podlagi njihove sestave lahko puferji razvrstimo med kisle ali osnovne. Učinkovitost pufra je določena s PKA, ki naj bi bila v idealnem primeru znotraj ± 1 pH enote želene mobilne faze pH za optimalno pufersko zmogljivost.

Ključni dejavniki, ki jih je treba upoštevati

1.PH RANE: PH mobilne faze mora biti vsaj 2 pH enoti stran od PKA analita. To pomaga pri zatiranju ionizacije kislih ali osnovnih analitov, kar maksimira njihovo zadrževanje na stolpcu. Na primer, če je analit šibka kislina s PKA 4,5, bi z uporabo mobilne faze s pH okoli 2,0 ohranil v neioniziranem stanju, kar bi povečalo zadrževanje.

2.Buffer Vrsta: Skupni medpomnilniki, ki se uporabljajo v HPLC, vključujejo:

Fosfatni puferji: Učinkoviti v območju pH od 2,0 do 8,0, fosfatni puferji se pogosto uporabljajo zaradi svoje stabilnosti in združljivosti z mnogimi analiti. Primerne so še posebej za LC-UV aplikacije.

Acetatni puferji: Ti so priljubljeni tudi za teste LC-UV in se lahko uporabljajo v podobnih pH območjih kot fosfatni puferji.

Hlapni puferji: Za aplikacije LC-MS so prednostni hlapni puferji, kot so formate, acetat in amonijev bikarbonat, ker jih je mogoče enostavno odstraniti med postopkom masne spektrometrije.

3. Koncentracija bufferja: Tipična začetna koncentracija za puferje v HPLC je med 25-50 mm. Višje koncentracije lahko izboljšajo vrhunsko obliko in učinkovitost, lahko pa tudi pri mešanju z organskimi topili vodijo do padavin. Priporočljivo je ohraniti koncentracijo pufra pod 25 mm, da se prepreči zaplete.

4.Hemična čistost: Za preprečevanje kontaminacije in zagotovitev zanesljivih rezultatov vedno uporabite pufer za kromatografsko kakovost z visoko čistočo. Nečistoče lahko privedejo do nepričakovanih interakcij in spremenljivosti v zadrževalnih časih.

Temperaturni učinki: Temperatura lahko vpliva na pH puferskih raztopin. Pomembno je pripraviti in shranjevati puferje pri dosledni temperaturi, da ohranimo njihovo učinkovitost.

Želite vedeti 50 odgovorov o vialah HPLC, preverite ta članek: 50 najpogosteje zastavljenih vprašanj o vialah HPLC

Praktični nasveti za pripravo medpomnilnika

Metoda priprave: Puferji lahko pripravimo z mešanjem enakovrednih količin njihovih kislih in osnovnih komponent ali s titriranjem osnovne raztopine s kislino. Izogibajte se prilagajanju pH po dodajanju organskih topil, saj lahko to privede do neskladnih rezultatov.

Sveže rešitve: redno pripravljajte sveže puferske raztopine, da zmanjšate rast mikrobov in razgradnjo komponent, kar lahko vpliva na kromatografsko delovanje.

Izogibanje koroziji: Nekateri puferji, kot je citrat, lahko korodirajo komponente iz nerjavečega jekla v sistemih HPLC. Za preprečevanje poškodb zagotovite temeljito izpiranje sistema.

Zaključek

Izbira pravega medpomnilnika za vašo mobilno fazo HPLC je ključnega pomena za doseganje zanesljivih in ponovljivih rezultatov. Pri izbiri razmislite o pH, tip puferju, koncentraciji in čistosti. Z upoštevanjem teh smernic lahko optimizirate svojo metodo HPLC, da učinkovito ločite in analizirate svoje vzorce.

Želite vedeti ceno viale HPLC, preverite ta članek: HPLC Viales Cena: 50 najpogosteje postavljenih vprašanj

Prejšnji:

Kako pravilno uporabiti epruvete za testne epruvete za testiranje kakovosti vode?

Naslednji:

Kako se izogniti preboju filtrov v filtrih