Folasaga
Sa ou i ai i le mea o e i ai-o sioa atu i le mataʻitu i le 2 i le taeao, ma matamata i se laina faʻasolo e pei o se vaʻa leiloa i le sami, ma mafaufau pe o le "HPLC doo-hickey" na faia e na o le tofotofoina o loʻu mafaufau. Afai o lo'o e lagona le fa'avalevalea e taumafai e afifi lou ulu ile chromatography vai maualuga (HPLC), manava. E le na o se pusa o vaega taugata; o se siva maaleale i le va o kemisi ma le fisiki.
I totonu o le fale suesue, e masani ona matou fai mai o le vaega feaveaʻi o le "laina ola" o le faiga. A aunoa ma lena, o lau faʻataʻitaʻiga o loʻo nofo i totonu o se tui, e le alu i se mea. Ae fa'afefea ona e filifilia le "to'ele'ele" sa'o e ave ai au mole i le mea e iloa ai? Tatou talepe i lalo e pei o loo tatou talatalanoa i luga o se kofe i le potu malolo.
1. O le a le HPLC, Moni?
I lona autu, HPLC e uiga i le vavaeeseina. Mafaufau e pei o se tuuga lea o le "ala" o le vaega tumau (o le koluma) ma le "matagi" o loo tuleia le au tamo'e i luga o le hplc vaega feaveai.
E tupu le togafiti ona o mole mole eseese e eseese "affinities." O nisi molela'au e fiafia i le vaega feavea'i ma fa'asolo i le koluma. O isi e "pi'i"—o lo'o tu'imomomo i le vaega tumau ma tuai ai. O lenei eseesega i le saoasaoa o le mea lea e tupu ai na pito i luga o lau chromatogram.
2. Vaega masani vs. Fa'asaga Fa'asaga
O le mea masani lea e amata ai ona toso ese e tagata uma o latou lauulu. I oʻu tausaga o faʻataʻitaʻiga, ua ou maua le auala sili ona faigofie e manatua ai lenei mea o le vaʻavaʻai i le polarity.
A. Chromatography Vaega masani
O le "aoga tuai" auala lea. I le chromatography vaega masani, o le vaega tumau e polar—manatu i ai e pei o se maneta mo molelaula polar. O le vaega feavea'i matou te fa'aogaina iinei e le polar, e masani lava solvents pei hexane po'o heptane.
-
Le Fa'atonu: Polar molela'au "pipii" e taofia i tua e le koluma polar. O molelaula e le polar e fufulu vave i le vaega feaveai e le polar.
-
Le Fautuaga Pro: Afai e te faʻateleina le polarity o lau vaega feaveaʻi (faʻaopoopo sina isopropanol), o au faʻataʻitaʻiga o le a sili atu le saoasaoa.
B. Fa'ata'ita'i Fa'asologa Fa'asolosolo
I aso nei, o le tulaga auro lea. Masalo o le 90% o le galuega ou te faia i totonu o le fale su'esu'e e aofia ai le chromatography fa'asolosolo. O iinei, matou te fesuiai le tusitusiga. O le koluma e le polar (hydrophobic, pei o le suauu), ma o le vaega feaveai e polar (e masani lava o se fefiloi o le vai ma le methanol poʻo le acetonitrile).
-
O le Fa'atatau: O molelaula e fiafia i le vai (polar) e sosolo atu aua latou te 'ino'ino i le koluma ga'o. O molelaula e fiafia i ga'o (e le polar) e pipii i le koluma e pei o le kelu.
-
Aisea tatou te fiafia ai: E mafai ona vaʻaia, faʻaogaina, ma faʻaoga vai faʻavae vai e faigofie ona pulea.
3. O le "Tulafono Auro" o Solvent Quality
E te va'ai i le "Vaega HPLC" i luga o igoa mo se mafua'aga. Aua e te mafaufau e uiga i le faʻaaogaina o le ACS poʻo se mea itiiti. Aisea? Aua o na mea leaga "laititi" i solvents i lalo ifo o le vasega o le a faʻaputu i luga o lau koluma i le aluga o taimi, faʻaumatia lau iugafono ma faʻatupuina aitu uiga ese.
Fa'aaoga i taimi uma Milli-Q (18.2 MΩ.cm) vai vai. Afai o lau vai e "palapala," o lau laina faavae o le a pei o se mauga, ma e tolu aso e te faʻaaluina e taumafai ai e iloa pe aisea.
4. Degassing ma Filtration: Le Fa'atinoga Fasioti
O le ea o le fili o le hplc vaega feaveai. I lalo o le mamafa masani, e solo le ea i au solvents. Ae o le taimi lava e pa ai lena solvent i le pamu, e mafai ona maileia na pupuni laiti i totonu o le siaki siaki po o le cell detector.
-
Le I'uga: Fesuia'i fua o le tafe, laina fa'atutusa, ma taimi fa'atumauina fe'avea'i.
-
Le Fix: Fa'aoga mea fa'amama fa'afale, po'o le sonication\/vacuum filtration pe afai o lo'o e su'e su'ega maualuga.
E le Filifilia le filiga. E o'o fo'i i vaimea o le HPLC e mafai ona iai ni vaega ninii mai le gaosiga po'o le tapuni fagu. Fa'amama i taimi uma i le 0.22μm po'o le 0.45μm membrane a'o le'i pa'i i lau faatanoa. O se galuega e 5-minute e mafai ona lavea'i ai lau koluma mai le oti vave.
5. Puipui ma le Mailei tioata
I le chromatography fa'asaga i tua, matou te fa'aogaina pa puipui e fa'amautu ai le pH mo fa'ata'ita'iga fa'aona.
-
Pro Fautuaga: Afai na e faʻaaogaina se paʻu i aso nei, fufulu le masini ile vai mama\/faafefiloi faʻaola ae e te leʻi alu i le fale. Afai e te le faia, o na masima o le a tioata ma ta'e au fa'amau pamu.
-
O le Mailei Matai: Na e iloa afai o lau hplc mobile phase pH e > 8.0, e mafai moni lava ona fa'amama iona u'amea mai faatanoa tioata? Su'e i u'amea u'amea po'o pusa palasitika fa'apitoa i nei tulaga.
Ia Fa'aatoatoaina Lou Tete'a
O le sa'o o le vaega feavea'i o le 80% ole taua ile HPLC. Afai o lo'o e tauivi ma laina fa'avae "shag carpet", fa'aoso fa'aoso, po'o fa'ai'uga le fetaui, aua le fa'amaimauina se isi aso e matemate ai.
Ua ou faʻaaluina le faitau afe o itula i le nofoa e foia ai nei faʻafitauli tonu. Ou te fiafia i taimi uma e faʻasoa atu sina fautuaga "faʻamaonia i le lab" e toe faʻafoʻi ai lau poloketi i le ala.
Fa'asinomaga
-
Snyder, L. R., Kirkland, J. J., & Dolan, J. W. (2011). Folasaga ile Chromatography Suavai Fa'aonaponei. Lomiga lona 3. John Wiley & Atalii. (O le "Gold Standard" mo le malamalama i le HPLC separation mechanisms).
-
Dolan, J. W. (2002). "Sauniuniga Vaega feavea'i." LCGC North America, Troubleshooting Series. (Ta'iala aoga taua mo le fa'amama ma le fa'amama).
-
Aparicio, R. (Ed.). (2013). Tusia o le HPLC Optimization. Elsevier. (Fa'amatalaga atoatoa ile polarity solvent ma le filifiliga pa'u ile chromatography fa'asolosolo).
-
Agilent Technologies. "HPLC System Troubleshooting Guide: Aloese mai Fa'alavelave Feavea'i masani." Faletusi Punaoa Fa'atekinisi.
-
Faalapotopotoga o Vai. "Mataupu Faavae o Chromatography: Vaega masani vs. Fa'asaga Fa'asaga." Fa'asologa o A'oa'oga.
-
Fonotaga Fa'ava-o-malo i luga ole Fa'atasi (ICH). Q2(R1) Fa'amaoniaga o Fa'atonuga Fa'atatau: Fa'amatalaga ma Metotia. (Tulaga mo le aofa'i o vaega pito i luga ma le fa'amautu taimi tumau).
Igilisi
Saina
