Omfattande guide till HPLC-provförbehandling – filtrering, extraktion och derivatisering
Hem
Nyheter
Hem > FAQ
kategorier
FÖRFRÅGAN

HPLC-provförbehandling – steg-för-steg-guide

21 oktober 2025
TAGGAR:

Översikt över provförbehandling

Provförbehandling inkluderar alla operationer före injektion. Förutom vägning, upplösning och utspädning, innefattar det också följande steg:

  • Filtrering
  • Extraktion
  • Derivatisering (derivatisering före kolumn)
  • Vätskekromatografi (lågtryckskolonnkromatografi)

Förbehandling kan utföras manuellt eller automatiserat. Är du bekant med provförbehandling?


Derivatisering

Vissa prover kan fortfarande inte injiceras direkt efter förbehandling. Derivatisering krävs för att göra föreningar utan UV-absorption eller fluorescens detekterbara med UV- eller fluorescensdetektorer.

  • Förbättrar känsligheten
  • Förbättrar separationen (kvalitetsförändring)

Möjliga problem inkluderar provförlust, kontaminering, ofullständiga reaktioner eller flera biprodukter, vilket kan påverka noggrannheten eller skapa fel.

Provfiltrering

LC-prover måste vara enhetliga och partikelfria; partiklar kan skada injektorn eller blockera kolonnen. Stegen inkluderar:

  • Skaka provet före injektion och kontrollera för partiklar, grumlighet eller emulsioner
  • Om partiklar observeras, filtrera provet med ett membran som kan hålla kvar ≥0,15 μm partiklar

Potentiella problem: provkontamination, adsorptionsreducerande komponentkoncentration och lösningsmedelsavdunstning som orsakar fel.

Extraktionsmetoder

Extraktion separerar analyter från hjälplösningsmedel eller tar bort störande ämnen (t.ex. proteiner). Organiska lösningsmedel bör ha låg toxicitet, flyktiga, låga i föroreningar och lösa provet väl.

Vanliga lösningsmedel: dietyleter, etylacetat, diklormetan, kloroform, bensen eller blandningar.

Efter extraktion kan prover injiceras direkt eller koncentreras för att öka analytkoncentrationen och känsligheten.

Vattenlöslig provextraktion

  1. Sura komponenter och salter: extrahera föroreningar med organiskt lösningsmedel, justera till surt, extrahera eller injicera sedan; eller torka under N2 och lös upp i lämpligt lösningsmedel före injektion.
  2. Grundkomponenter och salter: extrahera föroreningar med organiskt lösningsmedel, justera till basiskt, extrahera eller injicera sedan; eller torka under N2 och lös upp i lämpligt lösningsmedel före injektion.
  3. Neutrala komponenter: extrahera föroreningar med organiskt lösningsmedel, analysera sedan direkt med omvänd faskromatografi.


Fettlöslig provextraktion

Extrahera med organiskt lösningsmedel eller injicera direkt; eller torka under N2 och lös upp i lämpligt lösningsmedel före injektion.


Kontamineringskällor

Potentiella källor till kontaminering vid analys:

Typ av förorening

Källa

Förebyggande åtgärder

Miljömässigt

Skadliga gaser, damm, aerosoler

Håll instrumentrummet isolerat, rent; installera AC; kontrollera fuktighet <70%; förhindra fukt, korrosion, vibrationer

Behållare

Laboratorieartiklar av glas, keramik, kvarts, plast

Välj lämpliga behållare per provtyp; rengör noggrant

Reagens

Reagenser av icke-kromatografisk kvalitet

Använd reagens av kromatografisk kvalitet, hög renhet eller analytisk kvalitet


Standardlösningsförberedelse

  • Förbered intern standardlösning först; använd samma batch i standarder och prover för att minska fel
  • Ämnen måste vara kromatografiska och stabila
  • Förvara standardlösningar i bruna flaskor vid låg temperatur
  • För vitaminer, använd bruna mätkolvar eller skydda mot ljus


Vanliga problem vid provförbehandling och lösningar

Problem

Orsak

Lösning

Orelaterade toppar i kromatogram

Filtrera kontaminering

  1. Blötlägg filtret i provlösningsmedel och testinjektion

  2. Ändra filtertyp

  3. Använd alternativa rengöringsmetoder

Låg topprespons (särskilt lågkoncentrationsprov)

Adsorption på filterytan

  1. Ändra filtertyp

  2. Bearbeta alla prover under samma förhållanden

  3. Använd alternativa rengöringsmetoder

Låg återhämtning

Ofullständig extraktion

  1. Öka extraktionstiden, använd varmt lösningsmedel

  2. Justera rengöringsmetoden

Breddade toppar, förkortad pelarlivslängd

Provinterferens och kontaminering

Förbättra rengöringsmetoden

Dålig precision

Ofullständig återhämtning

  1. Optimera eller ersätta derivatisering, separation, extraktion eller andra villkor

  2. Använd automatiserad hantering för att förbättra precisionen

Förfrågan