Kusimamia Mtiririko: Mwongozo wa Mkongwe wa Maabara kwa Awamu za Simu za HPLC

Utangulizi

Nimefika hapo ulipo—nikikodolea macho kifaa cha kufuatilia saa 2 asubuhi, nikitazama mteremko wa msingi kama mashua iliyopotea baharini, nikishangaa kama "HPLC doo-hickey" ilivumbuliwa ili kujaribu akili yangu timamu. Iwapo unajihisi mnyonge ukijaribu kuzungusha kichwa chako kwenye kromatografia kioevu yenye utendaji wa juu (HPLC), vuta pumzi. Sio tu sanduku la sehemu za gharama kubwa; ni densi laini kati ya kemia na fizikia.

Katika maabara, mara nyingi tunasema awamu ya rununu ni "mstari wa maisha" wa mfumo. Bila hivyo, sampuli yako imekaa tu kwenye sindano, haiendi popote. Lakini unawezaje kuchagua "treni" sahihi ya kubeba molekuli zako hadi kwenye kigunduzi? Hebu tuyachambue kana kwamba tunapiga gumzo kwenye kahawa kwenye chumba cha mapumziko.

1. HPLC ni nini, Kweli?

Katika msingi wake, HPLC inahusu kujitenga. Ifikirie kama mbio ambapo "wimbo" ni awamu ya kusimama (safu) na "upepo" unaosukuma wakimbiaji pamoja ni awamu ya rununu ya hplc.

Uchawi hutokea kwa sababu molekuli tofauti zina "mashirika" tofauti. Baadhi ya molekuli hupenda awamu ya rununu na kuvuta safu. Wengine ni "wanata"-wana kuponda kwenye awamu ya stationary na kubaki nyuma. Tofauti hii ya kasi ndiyo inaunda vilele kwenye kromatogramu yako.

2. Awamu ya Kawaida dhidi ya Awamu ya Nyuma

Hii ni kawaida ambapo kila mtu huanza kuvuta nywele zao nje. Katika miaka yangu ya mazoezi, nimepata njia rahisi ya kukumbuka hii ni kwa kuangalia polarity.

A. Chromatografia ya Awamu ya Kawaida

Hii ndio njia ya "shule ya zamani". Katika kromatografia ya awamu ya kawaida, awamu ya kusimama ni polar-ifikirie kama sumaku ya molekuli za polar. Awamu ya rununu tunayotumia hapa si ya polar, kwa kawaida vimumunyisho kama vile hexane au heptane.

• Mantiki: Molekuli za polar "nata" huzuiliwa na safu ya polar. Molekuli zisizo za polar huosha haraka na awamu ya rununu isiyo ya polar.

• Kidokezo cha Pro: Ukiongeza polarity ya awamu yako ya simu (kuongeza kidogo ya isopropanol), sampuli zako zitasonga haraka zaidi.

B. Chromatografia ya Awamu ya Nyuma

Leo, hii ni kiwango cha dhahabu. Huenda 90% ya kazi ninayofanya kwenye maabara inahusisha kromatografia ya awamu ya nyuma. Hapa, tunageuza maandishi. Safu sio ya polar (haidrofobu, kama mafuta), na awamu ya rununu ni ya polar (kawaida ni mchanganyiko wa maji na methanoli au asetonitrile).

• Mantiki: Molekuli zinazopenda maji (polar) husogeza karibu kwa sababu zinachukia safu ya mafuta. Molekuli zinazopenda mafuta (zisizo za polar) hushikamana na safu kama gundi.

• Kwa nini tunaipenda: Inaweza kutabirika, inaweza kutumika anuwai, na hutumia vimumunyisho vinavyotokana na maji ambavyo ni rahisi kudhibiti.

3. "Kanuni ya Dhahabu" ya Ubora wa kutengenezea

Utaona "HPLC Grade" kwenye lebo kwa sababu fulani. Usifikirie hata kutumia daraja la ACS au kitu chochote kidogo. Kwa nini? Kwa sababu uchafu huo "mdogo" katika vimumunyisho vya kiwango cha chini utakusanyika kwenye safu yako baada ya muda, na kuua azimio lako na kuunda kilele cha ajabu cha mzimu.

Tumia maji ya kiwango cha Milli-Q (18.2 MΩ.cm) kila wakati. Ikiwa maji yako ni "chafu," msingi wako utaonekana kama safu ya milima, na utatumia siku tatu kujaribu kujua ni kwa nini.

4. Degassing na Filtration: The Performance Killers

Hewa ni adui wa awamu ya rununu ya hplc. Chini ya shinikizo la kawaida, hewa huyeyuka katika vimumunyisho vyako. Lakini mara tu kiyeyushi hicho kinapogonga pampu, viputo hivyo vidogo vinaweza kunaswa kwenye vali za kuangalia au seli ya kigunduzi.

• Matokeo: Mabadiliko ya kiwango cha mtiririko, viwango vya msingi vya msukumo, na nyakati za kubaki zinazosonga.

• Marekebisho: Tumia viondoa gesi vilivyojengewa ndani, au uchujaji wa sonication\/utupu ikiwa unatumia majaribio ya unyeti wa hali ya juu.

Kuchuja Si Hiari. Hata vimumunyisho vya daraja la HPLC vinaweza kuwa na chembe ndogo ndogo kutoka kwa mchakato wa utengenezaji au kofia ya chupa. Chuja kila wakati kwenye membrane ya 0.22µm au 0.45µm kabla haijagusa hifadhi yako. Ni kazi ya dakika 5 inayoweza kuokoa safu yako dhidi ya kifo cha mapema.

5. Vibafa na Mtego wa Kioo

Katika kromatografia ya awamu ya nyuma, tunatumia vihifadhi kuweka pH thabiti kwa sampuli zinazoweza kuainishwa.

• Kidokezo cha Pro: Ikiwa ulitumia bafa leo, osha mfumo kwa maji safi\/mchanganyiko wa kikaboni kabla ya kwenda nyumbani. Usipofanya hivyo, chumvi hizo zitang'aa na kupasua mihuri yako ya pampu.

• Mtego wa Kioo: Je, unajua kwamba ikiwa hplc ya awamu ya simu yako ya mkononi pH ni > 8.0, inaweza kutoa ayoni za chuma kutoka kwa hifadhi za glasi? Badili utumie chuma cha pua au vyombo maalum vya plastiki katika visa hivi.

Wacha Tufanye Utengano Wako Ukamilifu

Kuweka sawa awamu ya simu ni 80% ya vita katika HPLC. Ikiwa unatatizika kutumia kanuni za msingi za "shag carpet", viwango vya shinikizo, au matokeo yasiyolingana, usipoteze siku nyingine kubahatisha.

Nimetumia maelfu ya saa kwenye benchi kusuluhisha maswala haya haswa. Daima huwa na furaha kushiriki ushauri "uliothibitishwa katika maabara" ili kurejesha mradi wako kwenye mstari.

• WhatsApp: 86 18338832256

• Barua pepe:boonemi@aijirenvial.com
  

Marejeleo

• Snyder, L. R., Kirkland, J. J., & Dolan, J. W. (2011). Utangulizi wa Kromatografia ya Kioevu ya Kisasa. Toleo la 3. John Wiley & Wana. ("Kiwango cha Dhahabu" cha kuelewa taratibu za kutenganisha HPLC).

• Dolan, J. W. (2002). "Maandalizi ya Awamu ya Simu." LCGC Amerika ya Kaskazini, Msururu wa Utatuzi wa Matatizo. (Mwongozo muhimu wa vitendo kwa degassing na filtration).

• Aparicio, R. (Mh.). (2013). Mwongozo wa Uboreshaji wa HPLC. Elsevier. (Data ya kina juu ya polarity ya kutengenezea na uteuzi wa bafa katika kromatografia ya awamu ya nyuma).

• Teknolojia ya Agilent. "Mwongozo wa Utatuzi wa Mfumo wa HPLC: Kuepuka Hitilafu za Kawaida za Awamu ya Rununu." Maktaba ya Rasilimali za Kiufundi.

• Shirika la Maji. "Kanuni za Chromatography: Awamu ya Kawaida dhidi ya Awamu ya Nyuma." Msururu wa Elimu.

• Mkutano wa Kimataifa wa Kuoanisha (ICH). Q2(R1) Uthibitishaji wa Taratibu za Uchambuzi: Maandishi na Mbinu. (Kiwango cha upimaji wa eneo la kilele na uthabiti wa muda wa kubaki).