மாஸ்டரிங் தி ஃப்ளோ: ஹெச்பிஎல்சி மொபைல் ஃபேஸ்களுக்கான ஆய்வக அனுபவ வழிகாட்டி

அறிமுகம்

நீங்கள் இருக்கும் இடத்தில் நான் இருந்தேன்—அதிகாலை 2 மணிக்கு மானிட்டரைப் பார்த்துக் கொண்டிருந்தேன், கடலில் தொலைந்து போன படகு போன்ற அடிப்படைச் சறுக்கலைப் பார்த்துக் கொண்டிருந்தேன், "HPLC doo-hickey" எனது நல்லறிவைச் சோதிப்பதற்காகக் கண்டுபிடிக்கப்பட்டதா என்று ஆச்சரியப்படுகிறேன். உயர் செயல்திறன் கொண்ட திரவ நிறமூர்த்தத்தை (HPLC) உங்கள் தலையில் சுற்றிக் கொள்ள முயற்சிப்பதில் உங்களுக்கு மயக்கம் ஏற்பட்டால், மூச்சு விடுங்கள். இது விலையுயர்ந்த பாகங்களின் பெட்டி மட்டுமல்ல; இது வேதியியல் மற்றும் இயற்பியல் இடையே ஒரு நுட்பமான நடனம்.

ஆய்வகத்தில், மொபைல் கட்டம் அமைப்பின் "வாழ்க்கை வரி" என்று அடிக்கடி கூறுகிறோம். இது இல்லாமல், உங்கள் மாதிரி ஒரு உட்செலுத்தியில் உட்கார்ந்து, எங்கும் செல்லவில்லை. ஆனால் உங்கள் மூலக்கூறுகளை டிடெக்டருக்கு எடுத்துச் செல்ல சரியான "ரயிலை" எவ்வாறு தேர்வு செய்வது? பிரேக்ரூமில் காபி குடித்துக்கொண்டு அரட்டை அடிப்பது போல உடைப்போம்.

1. HPLC என்றால் என்ன?

அதன் மையத்தில், HPLC பிரிவினை பற்றியது. "டிராக்" என்பது நிலையான கட்டம் (நெடுவரிசை) மற்றும் "காற்று" ஓட்டப்பந்தய வீரர்களைத் தள்ளுவது hplc மொபைல் கட்டமாகும்.

வெவ்வேறு மூலக்கூறுகள் வெவ்வேறு "தொடர்புகளை" கொண்டிருப்பதால் மந்திரம் நடக்கிறது. சில மூலக்கூறுகள் மொபைல் கட்டத்தை விரும்புகின்றன மற்றும் நெடுவரிசை வழியாக பெரிதாக்குகின்றன. மற்றவை "ஒட்டும்"-அவை நிலையான கட்டத்தில் ஒரு ஈர்ப்பு மற்றும் பின்தங்கிய நிலையில் உள்ளன. இந்த வேக வேறுபாடுதான் உங்கள் குரோமடோகிராமில் அந்த சிகரங்களை உருவாக்குகிறது.

2. இயல்பான கட்டம் எதிராக தலைகீழ் கட்டம்

பொதுவாக இங்குதான் எல்லோரும் முடியை வெளியே எடுக்கத் தொடங்குவார்கள். எனது பல வருட நடைமுறையில், துருவமுனைப்பைப் பார்ப்பதன் மூலம் இதை நினைவில் கொள்வதற்கான எளிதான வழியைக் கண்டேன்.

A. இயல்பான கட்ட குரோமடோகிராபி

இது "பழைய பள்ளி" முறை. சாதாரண கட்ட குரோமடோகிராஃபியில், நிலையான கட்டம் துருவமானது - துருவ மூலக்கூறுகளுக்கான ஒரு காந்தம் போல் நினைத்துக்கொள்ளுங்கள். நாம் இங்கு பயன்படுத்தும் மொபைல் கட்டமானது துருவமற்றது, பொதுவாக ஹெக்ஸேன் அல்லது ஹெப்டேன் போன்ற கரைப்பான்கள்.

• தர்க்கம்: துருவ "ஒட்டும்" மூலக்கூறுகள் துருவ நெடுவரிசையால் தடுக்கப்படுகின்றன. துருவமற்ற மூலக்கூறுகள் துருவமற்ற மொபைல் கட்டத்துடன் விரைவாகக் கழுவப்படுகின்றன.

• புரோ உதவிக்குறிப்பு: உங்கள் மொபைல் கட்டத்தின் துருவமுனைப்பை நீங்கள் அதிகரித்தால் (சிறிதளவு ஐசோப்ரோபனோல் சேர்த்து), உங்கள் மாதிரிகள் உண்மையில் வேகமாக நகரும்.

பி. தலைகீழ் நிலை குரோமடோகிராபி

இன்று, இதுதான் தங்கத் தரம். ஆய்வகத்தில் நான் செய்யும் வேலைகளில் 90% ரிவர்ஸ் பேஸ் க்ரோமடோகிராஃபியை உள்ளடக்கியது. இங்கே, நாம் ஸ்கிரிப்டை புரட்டுகிறோம். நெடுவரிசை துருவமற்றது (எண்ணெய் போன்ற ஹைட்ரோஃபோபிக்), மற்றும் கட்ட மொபைல் துருவமானது (பொதுவாக நீர் மற்றும் மெத்தனால் அல்லது அசிட்டோனிட்ரைலின் கலவையாகும்).

• தர்க்கம்: நீர்-அன்பான (துருவ) மூலக்கூறுகள் எண்ணெய் பத்தியை வெறுப்பதால் பெரிதாக்குகின்றன. கொழுப்பை விரும்பும் (துருவமற்ற) மூலக்கூறுகள் பசை போல நெடுவரிசையில் ஒட்டிக்கொள்கின்றன.

• நாம் ஏன் அதை விரும்புகிறோம்: இது யூகிக்கக்கூடியது, பல்துறை திறன் கொண்டது மற்றும் நிர்வகிக்க எளிதான நீர் சார்ந்த கரைப்பான்களைப் பயன்படுத்துகிறது.

3. கரைப்பான் தரத்தின் "கோல்டன் ரூல்"

ஒரு காரணத்திற்காக லேபிள்களில் "HPLC கிரேடு" என்பதைக் காண்பீர்கள். ஏசிஎஸ் கிரேடு அல்லது குறைவாகப் பயன்படுத்துவதைப் பற்றி யோசிக்க வேண்டாம். ஏன்? ஏனெனில் குறைந்த-தர கரைப்பான்களில் உள்ள அந்த "சிறிய" அசுத்தங்கள் காலப்போக்கில் உங்கள் நெடுவரிசையில் குவிந்து, உங்கள் தெளிவுத்திறனைக் கொன்று விசித்திரமான பேய் சிகரங்களை உருவாக்கும்.

எப்போதும் Milli-Q (18.2 MΩ.cm) தர நீரைப் பயன்படுத்தவும். உங்கள் தண்ணீர் "அழுக்காக" இருந்தால், உங்கள் அடித்தளம் ஒரு மலைத்தொடர் போல் இருக்கும், மேலும் ஏன் என்று கண்டுபிடிக்க நீங்கள் மூன்று நாட்கள் செலவிடுவீர்கள்.

4. வாயு நீக்கம் மற்றும் வடிகட்டுதல்: செயல்திறன் கொலையாளிகள்

காற்று hplc மொபைல் கட்டத்தின் எதிரி. சாதாரண அழுத்தத்தின் கீழ், உங்கள் கரைப்பான்களில் காற்று கரைகிறது. ஆனால் அந்த கரைப்பான் பம்பைத் தாக்கியவுடன், அந்த சிறிய குமிழ்கள் காசோலை வால்வுகள் அல்லது டிடெக்டர் செல்களில் சிக்கிக்கொள்ளலாம்.

• முடிவு: ஓட்ட விகித ஏற்ற இறக்கங்கள், துடிக்கும் அடிப்படைகள் மற்றும் நகரும் தக்கவைப்பு நேரங்கள்.

• பிழைத்திருத்தம்: நீங்கள் அதிக உணர்திறன் மதிப்பீடுகளை இயக்குகிறீர்கள் என்றால், உள்ளமைக்கப்பட்ட டீகாஸர்களை அல்லது சொனிகேஷன்\/வெற்றிட வடிகட்டலைப் பயன்படுத்தவும்.

வடிகட்டுதல் விருப்பமானது அல்ல. HPLC தர கரைப்பான்கள் கூட உற்பத்தி செயல்முறை அல்லது பாட்டில் மூடியிலிருந்து நுண்ணிய துகள்களைக் கொண்டிருக்கலாம். உங்கள் நீர்த்தேக்கத்தைத் தொடும் முன் எப்போதும் 0.22µm அல்லது 0.45µm சவ்வு மூலம் வடிகட்டவும். இது 5 நிமிட பணியாகும், இது உங்கள் நெடுவரிசையை அகால மரணத்திலிருந்து காப்பாற்ற முடியும்.

5. இடையகங்கள் மற்றும் கண்ணாடி பொறி

தலைகீழ் நிலை குரோமடோகிராஃபியில், அயனியாக்கம் செய்யக்கூடிய மாதிரிகளுக்கு pH ஐ நிலையாக வைத்திருக்க பஃபர்களைப் பயன்படுத்துகிறோம்.

• ப்ரோ உதவிக்குறிப்பு: நீங்கள் இன்று பஃபரைப் பயன்படுத்தினால், வீட்டிற்குச் செல்வதற்கு முன் கணினியை சுத்தமான தண்ணீரில்\/ஆர்கானிக் கலவையைக் கொண்டு கழுவவும். நீங்கள் அவ்வாறு செய்யாவிட்டால், அந்த உப்புகள் உங்கள் பம்ப் முத்திரைகளை படிகமாக்கி துண்டாக்கும்.

• கண்ணாடிப் பொறி: உங்கள் ஹெச்பிஎல்சி மொபைல் ஃபேஸ் pH> 8.0 ஆக இருந்தால், அது உண்மையில் கண்ணாடித் தேக்கங்களில் இருந்து உலோக அயனிகளை வெளியேற்றும் என்பது உங்களுக்குத் தெரியுமா? இந்த சந்தர்ப்பங்களில் துருப்பிடிக்காத எஃகு அல்லது சிறப்பு பிளாஸ்டிக் கொள்கலன்களுக்கு மாறவும்.

உங்கள் பிரிவினை பெர்ஃபெக்ட் பெறுவோம்

மொபைல் கட்டத்தை சரியாகப் பெறுவது HPLC இல் 80% போரில் உள்ளது. "ஷாக் கார்பெட்" பேஸ்லைன்கள், பிரஷர் ஸ்பைக்குகள் அல்லது சீரற்ற முடிவுகளுடன் நீங்கள் சிரமப்படுகிறீர்கள் என்றால், மற்றொரு நாளை யூகித்து வீணாக்காதீர்கள்.

இந்தச் சரியான சிக்கல்களைச் சரிசெய்வதில் ஆயிரக்கணக்கான மணிநேரங்களை நான் பெஞ்சில் செலவிட்டேன். உங்கள் திட்டத்தைத் திரும்பப் பெறுவதற்கு "ஆய்வகத்தால் நிரூபிக்கப்பட்ட" ஆலோசனைகளைப் பகிர்ந்து கொள்வதில் நான் எப்போதும் மகிழ்ச்சியடைகிறேன்.

• WhatsApp: 86 18338832256

• மின்னஞ்சல்:boonemi@aijirenvial.com
  

குறிப்புகள்

• Snyder, L. R., Kirkland, J. J., & Dolan, J. W. (2011). நவீன திரவ குரோமடோகிராஃபி அறிமுகம். 3வது பதிப்பு. ஜான் வில்லி & சன்ஸ். (HPLC பிரிப்பு வழிமுறைகளைப் புரிந்துகொள்வதற்கான "தங்க தரநிலை").

• டோலன், ஜே. டபிள்யூ. (2002). "மொபைல் கட்ட தயாரிப்பு." LCGC வட அமெரிக்கா, சரிசெய்தல் தொடர். (வாயு நீக்கம் மற்றும் வடிகட்டுதலுக்கான அத்தியாவசிய நடைமுறை வழிகாட்டி).

• Aparicio, R. (Ed.). (2013) HPLC ஆப்டிமைசேஷன் கையேடு. எல்சேவியர். (தலைகீழ் நிலை நிறமூர்த்தத்தில் கரைப்பான் துருவமுனைப்பு மற்றும் தாங்கல் தேர்வு பற்றிய விரிவான தரவு).

• அஜிலன்ட் டெக்னாலஜிஸ். "HPLC சிஸ்டம் சரிசெய்தல் வழிகாட்டி: பொதுவான மொபைல் கட்டப் பிழைகளைத் தவிர்ப்பது." தொழில்நுட்ப வள நூலகம்.

• வாட்டர்ஸ் கார்ப்பரேஷன். "குரோமடோகிராஃபியின் கோட்பாடுகள்: இயல்பான கட்டம் மற்றும் தலைகீழ் நிலை." கல்வித் தொடர்.

• ஒத்திசைவுக்கான சர்வதேச மாநாடு (ICH). Q2(R1) பகுப்பாய்வு நடைமுறைகளின் சரிபார்ப்பு: உரை மற்றும் முறை. (உச்ச பகுதி அளவீடு மற்றும் தக்கவைப்பு நேர நிலைத்தன்மைக்கான தரநிலை).