Муқаддима
Ман дар он ҷое, ки шумо ҳастед, будам - соати 2-и субҳ ба монитор менигаристам, ба мисли қаиқи гумшуда дар баҳр ҳаракат мекардам ва дар ҳайрат будам, ки оё "HPLC ду-хики" танҳо барои санҷидани ақли ман ихтироъ шудааст. Агар шумо худро девона ҳис кунед, ки саратонро дар атрофи хроматографияи моеъи баландсифат (HPLC) печонед, нафас гиред. Ин танҳо як қуттии қисмҳои гаронбаҳо нест; ин ракси нозуки байни химия ва физика аст.
Дар лаборатория мо аксар вақт мегӯем, ки марҳилаи мобилӣ "хати ҳаёт" -и система аст. Бе он, намунаи шумо танҳо дар инжектор нишастааст ва ба ҳеҷ ҷо намеравад. Аммо чӣ гуна шумо "поезди" дурустро интихоб мекунед, то молекулаҳои худро ба детектор интиқол диҳед? Биёед онро вайрон кунем, ки мо дар қаҳва дар ҳуҷраи танаффус сӯҳбат мекунем.
1. HPLC чист, дар ҳақиқат?
Дар асл, HPLC дар бораи ҷудошавӣ аст. Онро мисли пойга тасаввур кунед, ки дар он "трек" марҳилаи статсионарӣ (сутун) ва "шамол" давандагонро тела медиҳад, марҳилаи мобилии hplc аст.
Ҷодугарӣ аз он сабаб ба амал меояд, ки молекулаҳои гуногун "ҳамбастагӣ" -и гуногун доранд. Баъзе молекулаҳо марҳилаи мобилиро дӯст медоранд ва сутунро васеъ мекунанд. Дигарон "часпак" ҳастанд - онҳо ба марҳилаи статсионарӣ майл доранд ва ақиб мемонанд. Ин фарқият дар суръат он чизест, ки он қуллаҳоро дар хроматограммаи шумо ба вуҷуд меорад.
2. Марҳилаи муқаррарӣ ва марҳилаи баръакс
Дар ин ҷо одатан ҳама ба кашидани мӯйҳои худ шурӯъ мекунанд. Дар солҳои таҷрибаомӯзии худ ман роҳи осонтарини дар хотир доштанро ёфтам, ки ин назар ба қутбият аст.
A. Хроматографияи марҳилаи муқаррарӣ
Ин роҳи «мактаби кӯҳна» аст. Дар хроматографияи фазавии муқаррарӣ, фазаи статсионарӣ қутбӣ аст - онро ҳамчун магнит барои молекулаҳои қутбӣ фикр кунед. Марҳилаи мобилӣ, ки мо дар ин ҷо истифода мебарем, ғайриқутбӣ аст, одатан ҳалкунандаҳо ба монанди гексан ё гептан.
-
Мантиқ: Молекулаҳои қутбӣ "часпанда" аз сутуни қутбӣ нигоҳ дошта мешаванд. Молекулаҳои ғайриқутбӣ бо фазаи мобилии ғайриқутбӣ зуд шуста мешаванд.
-
Маслиҳати Pro: Агар шумо полярии марҳилаи мобилии худро зиёд кунед (илова кардани каме изопропанол), намунаҳои шумо воқеан тезтар ҳаракат мекунанд.
B. Хроматографияи марҳилаи баръакс
Имрӯз ин стандарти тиллоӣ аст. Эҳтимол 90% корҳое, ки ман дар лаборатория анҷом медиҳам, хроматографияи марҳилаи баръаксро дар бар мегирад. Дар ин ҷо мо скриптро иваз мекунем. Сутун ғайриқутбӣ аст (гидрофобӣ, ба монанди нафт) ва фазаҳои мобилӣ қутбӣ мебошанд (одатан омехтаи об ва метанол ё ацетонитрил).
-
Мантиқ: Молекулаҳои об дӯстдошта (қутбӣ) наздик мешаванд, зеро онҳо сутуни равғаниро бад мебинанд. Молекулаҳои фарбеҳ дӯстдошта (ғайриқутбӣ) мисли ширеш ба сутун мечаспанд.
-
Чаро мо онро дӯст медорем: Ин пешгӯинашаванда, ҳамаҷониба аст ва ҳалкунандаҳои обро истифода мебарад, ки идора кардан осонтар аст.
3. «Қоидаи тиллоӣ»-и сифати пардохтпазир
Бо ягон сабаб шумо дар тамғакоғазҳо "Баҳои HPC" -ро хоҳед дид. Ҳатто дар бораи истифодаи дараҷаи ACS ё чизи камтар фикр накунед. Чаро? Зеро он наҷосатҳои "ночизи" дар ҳалкунандаҳои дараҷаи поёнӣ бо мурури замон дар сутуни шумо ҷамъ мешаванд, ки ҳалли шуморо мекушанд ва қуллаҳои аҷиби арвоҳ эҷод мекунанд.
Ҳамеша оби дараҷаи Milli-Q (18,2 MΩ.cm) -ро истифода баред. Агар оби шумо "ифлос" бошад, хатти асосии шумо ба қаторкӯҳҳои кӯҳ монанд хоҳад буд ва шумо се рӯзро барои фаҳмидани он сарф мекунед.
4. Дегазизатсия ва филтратсия: Қотилони иҷроиш
Ҳаво душмани марҳилаи мобилии hplc аст. Дар зери фишори муқаррарӣ ҳаво дар ҳалкунандаҳои шумо ҳал мешавад. Аммо вақте ки ин ҳалкунанда ба насос ворид мешавад, он футурҳои хурд метавонанд дар клапанҳои чек ё ҳуҷайраи детектор банд шаванд.
-
Натиҷа: Тағйирёбии суръати ҷараён, набзи ибтидоӣ ва вақти нигоҳдории ҳаракат.
-
Ислоҳ: Агар шумо санҷишҳои ҳассосияти баландро иҷро кунед, дегазаторҳои дарунсохт ё филтратсияи sonication\/вакуумро истифода баред.
Филтркунӣ ихтиёрӣ нест. Ҳатто ҳалкунандаҳои дараҷаи HPLC метавонанд зарраҳои микроскопӣ аз раванди истеҳсолӣ ё сарпӯши шиша дошта бошанд. Ҳамеша мембранаи 0,22 мкм ё 0,45 мкм пеш аз он ки ба обанбори шумо бирасад, филтр кунед. Ин як вазифаи 5 дақиқаӣ аст, ки метавонад сутуни шуморо аз марги бармаҳал наҷот диҳад.
5. Буферҳо ва доми шишагӣ
Дар хроматографияи марҳилаи баръакс, мо буферҳоро барои мӯътадил нигоҳ доштани рН барои намунаҳои ионизатсияшаванда истифода мебарем.
-
Маслиҳати Pro: Агар шумо имрӯз буфер истифода карда бошед, пеш аз он ки ба хона равед, системаро бо оби соф\/омехтаи органикӣ бишӯед. Агар шумо ин корро накунед, он намакҳо кристалл мешаванд ва мӯҳрҳои насоси шуморо пора мекунанд.
-
Домаи шишагӣ: Оё шумо медонистед, ки агар pH фазаи мобилии hplc-и шумо > 8.0 бошад, он воқеан метавонад ионҳои металлиро аз обанборҳои шиша шуста кунад? Дар ин ҳолатҳо ба зарфҳои пӯлоди зангногир ё пластикии махсус гузаред.
Биёед ҷудоии шуморо комил кунем
Ба даст овардани дурусти марҳилаи мобилӣ 80% ҷанг дар HPLC мебошад. Агар шумо бо нишондиҳандаҳои асосии "шаг гилем", афзоиши фишор ё натиҷаҳои номувофиқ мубориза баред, рӯзи дигарро барои тахмин кардан беҳуда сарф накунед.
Ман ҳазорҳо соатро дар курсӣ барои ҳалли ин мушкилоти дақиқ сарф кардам. Ман ҳамеша хушҳолам, ки каме маслиҳати "дар лабораторӣ собитшуда" -ро мубодила кунам, то лоиҳаи шуморо дубора ба роҳ монанд.
Иқтибосҳо
-
Снайдер, Л.Р., Киркланд, Ҷ.Ҷ., ва Долан, Ҷ.В. (2011). Муқаддима ба хроматографияи муосири моеъ. Нашри 3-юм. Ҷон Уайли ва писарон. ("Стандарти тиллоӣ" барои фаҳмидани механизмҳои ҷудокунии HPLC).
-
Долан, Ҷ. В. (2002). "Тайёр кардани марҳилаи мобилӣ." LCGC Амрикои Шимолӣ, Силсилаи ҳалли мушкилот. (Дастури амалӣ барои дегазизатсия ва филтратсия).
-
Апарисио, R. (ред.). (2013). Дастури оптимизатсияи HPLC. Elsevier. (Маълумоти ҳамаҷониба дар бораи қутбияти ҳалкунанда ва интихоби буфер дар хроматографияи марҳилаи баръакс).
-
Agilent Technologies. "Дастур оид ба ҳалли мушкилоти системаи HPLC: Пешгирӣ аз хатогиҳои умумии марҳилаи мобилӣ." Китобхонаи захираҳои техникӣ.
-
Корпоратсияи Waters. «Принципхои хроматография: фазаи муътадил ва фазаи баръакс». Силсилаи маориф.
-
Конфронси байналмилалӣ оид ба ҳамоҳангсозӣ (ICH). Q2(R1) Санҷиши расмиёти таҳлилӣ: Матн ва методология. (Стандарт барои муайян кардани миқдори қулла ва устувории вақти нигоҳдорӣ).
англисӣ
чинӣ
