การเลือกบัฟเฟอร์ที่เหมาะสมสำหรับเฟส HPLC Mobile ของคุณนั้นมีความสำคัญอย่างยิ่งต่อการแยกการแยกและการวิเคราะห์ที่ดีที่สุดของคุณ ตัวอย่าง บัฟเฟอร์ช่วยรักษาค่า pH ที่เสถียรซึ่งเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการควบคุมสถานะไอออไนเซชันของการวิเคราะห์ของคุณซึ่งส่งผลต่อเวลาการเก็บรักษาและรูปร่างสูงสุด ด้านล่างนี้เป็นภาพรวมโดยละเอียดของวิธีการเลือกบัฟเฟอร์ที่ดีที่สุดสำหรับแอปพลิเคชัน HPLC ของคุณ

คุณรู้เกี่ยวกับการเตรียมตัวอย่าง HPLC หรือไม่? คลิกบทความนี้เพื่อเรียนรู้เพิ่มเติม: “ ทุกสิ่งที่คุณจำเป็นต้องรู้เกี่ยวกับการเตรียมตัวอย่าง HPLC”

ความสำคัญของการเลือกบัฟเฟอร์

บัฟเฟอร์เป็นวิธีแก้ปัญหาที่ค่า pH ไม่เปลี่ยนแปลงหลังจากเพิ่มกรดหรือฐานจำนวนเล็กน้อย ขึ้นอยู่กับองค์ประกอบของพวกเขาบัฟเฟอร์สามารถจัดเป็นกรดหรือพื้นฐาน ประสิทธิภาพของบัฟเฟอร์ถูกกำหนดโดย PKA ซึ่งควรอยู่ในหน่วย± 1 pH ของค่า pH เฟสมือถือที่ต้องการเพื่อความสามารถในการบัฟเฟอร์ที่ดีที่สุด

ปัจจัยสำคัญที่ควรพิจารณา

1.PH ช่วง: ค่า pH ของเฟสมือถือควรอยู่ห่างจาก PKA อย่างน้อย 2 หน่วยจาก PKA ของ analyte สิ่งนี้จะช่วยยับยั้งการเกิดไอออไนซ์ของการวิเคราะห์ที่เป็นกรดหรือพื้นฐานซึ่งเพิ่มการเก็บรักษาไว้ในคอลัมน์ให้ได้มากที่สุด ตัวอย่างเช่นหาก analyte เป็นกรดอ่อนที่มี PKA 4.5 การใช้เฟสมือถือที่มีค่า pH ประมาณ 2.0 จะทำให้มันอยู่ในสถานะที่ไม่ได้เป็นไอออน

2. Buffer Type: บัฟเฟอร์ทั่วไปที่ใช้ใน HPLC รวมถึง:

บัฟเฟอร์ฟอสเฟต: มีประสิทธิภาพในช่วง pH 2.0 ถึง 8.0 บัฟเฟอร์ฟอสเฟตถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายเนื่องจากความเสถียรและความเข้ากันได้กับการวิเคราะห์จำนวนมาก เหมาะอย่างยิ่งสำหรับแอปพลิเคชัน LC UV

บัฟเฟอร์อะซิเตท: สิ่งเหล่านี้ยังเป็นที่นิยมสำหรับการทดสอบ LC UV และสามารถใช้ในช่วงค่า pH ที่คล้ายกันกับบัฟเฟอร์ฟอสเฟต

บัฟเฟอร์ระเหย: สำหรับแอพพลิเคชั่น LC MS, บัฟเฟอร์ระเหยเช่น Formate, Acetate และแอมโมเนียมไบคาร์บอเนตเป็นที่ต้องการเนื่องจากสามารถลบออกได้ง่ายในระหว่างกระบวนการมวลสารสเปกโตรเมตรี

3. ความเข้มข้นของบัฟเฟอร์: ความเข้มข้นเริ่มต้นทั่วไปสำหรับบัฟเฟอร์ใน HPLC อยู่ระหว่าง 25 50 มม. ความเข้มข้นที่สูงขึ้นสามารถปรับปรุงรูปร่างและประสิทธิภาพสูงสุด แต่อาจนำไปสู่การตกตะกอนเมื่อผสมกับตัวทำละลายอินทรีย์ ขอแนะนำให้รักษาความเข้มข้นของบัฟเฟอร์ต่ำกว่า 25 มม. เพื่อหลีกเลี่ยงภาวะแทรกซ้อน

4. ความบริสุทธิ์ทางเคมี: ใช้บัฟเฟอร์เกรดโครมาโตกราฟีที่มีความบริสุทธิ์สูงเสมอเพื่อป้องกันการปนเปื้อนและให้ผลลัพธ์ที่เชื่อถือได้ สิ่งสกปรกสามารถนำไปสู่การมีปฏิสัมพันธ์และความแปรปรวนที่ไม่คาดคิดในเวลาเก็บรักษา

ผลกระทบของอุณหภูมิ: อุณหภูมิสามารถมีผลต่อค่า pH ของสารละลายบัฟเฟอร์ มันเป็นสิ่งสำคัญในการเตรียมและจัดเก็บบัฟเฟอร์ที่อุณหภูมิที่สอดคล้องกันเพื่อรักษาประสิทธิภาพ

ต้องการทราบ 50 คำตอบเกี่ยวกับขวด HPLC โปรดตรวจสอบบทความนี้: 50 คำถามที่พบบ่อยที่สุดเกี่ยวกับขวด HPLC

เคล็ดลับการปฏิบัติสำหรับการเตรียมบัฟเฟอร์

วิธีการเตรียม: บัฟเฟอร์สามารถเตรียมได้โดยการผสมปริมาณที่เท่ากันของส่วนประกอบที่เป็นกรดและพื้นฐานหรือโดยการไตเตรทสารละลายพื้นฐานกับกรด หลีกเลี่ยงการปรับค่า pH หลังจากเพิ่มตัวทำละลายอินทรีย์เนื่องจากอาจนำไปสู่ผลลัพธ์ที่ไม่สอดคล้องกัน

โซลูชั่นใหม่: เตรียมสารละลายบัฟเฟอร์ใหม่เป็นประจำเพื่อลดการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์และการย่อยสลายของส่วนประกอบซึ่งอาจส่งผลกระทบต่อประสิทธิภาพของโครมาโตกราฟี

การหลีกเลี่ยงการกัดกร่อน: บัฟเฟอร์บางอย่างเช่นซิเตรตสามารถกัดกร่อนส่วนประกอบสแตนเลสสตีลของระบบ HPLC ได้ ตรวจสอบให้แน่ใจว่าการล้างระบบอย่างละเอียดหลังจากใช้บัฟเฟอร์ดังกล่าวเพื่อป้องกันความเสียหาย

บทสรุป

การเลือกบัฟเฟอร์ที่เหมาะสมสำหรับเฟส HPLC Mobile ของคุณนั้นมีความสำคัญต่อการบรรลุผลลัพธ์ที่เชื่อถือได้และทำซ้ำได้ พิจารณาค่า pH, ประเภทบัฟเฟอร์, ความเข้มข้นและความบริสุทธิ์เมื่อเลือก โดยทำตามแนวทางเหล่านี้คุณสามารถเพิ่มประสิทธิภาพวิธี HPLC ของคุณเพื่อแยกและวิเคราะห์ตัวอย่างของคุณได้อย่างมีประสิทธิภาพ

ต้องการทราบราคาของขวด HPLC โปรดตรวจสอบบทความนี้: ราคาขวด HPLC: 50 คำถามที่พบบ่อยที่สุด

วิธีใช้หลอดทดสอบ COD อย่างถูกต้องสำหรับการทดสอบคุณภาพน้ำ?

ต่อไป:

วิธีหลีกเลี่ยงการพัฒนาตัวกรองในตัวกรองเข็มฉีดยา