Bazı numuneler ön işlemden sonra hâlâ doğrudan enjekte edilememektedir. UV absorpsiyonu veya floresansı olmayan bileşiklerin UV veya floresans dedektörleri tarafından tespit edilebilir hale getirilmesi için türevlendirme gereklidir.

Hassasiyeti artırır
Ayırmayı geliştirir (kalite değişimi)

Olası sorunlar arasında numune kaybı, kontaminasyon, eksik reaksiyonlar veya doğruluğu etkileyebilecek veya hatalara yol açabilecek birden fazla yan ürün yer alır.

Numune Filtreleme

LC numuneleri tekdüze ve partikülsüz olmalıdır; parçacıklar enjektöre zarar verebilir veya kolonu tıkayabilir. Adımlar şunları içerir:

Enjeksiyondan önce numuneyi çalkalayın ve partikül, bulanıklık veya emülsiyon olup olmadığını kontrol edin
Parçacıklar gözlemlenirse numuneyi ≥0,15μm parçacıkları tutabilen bir membran kullanarak filtreleyin

Potansiyel sorunlar: numune kirliliği, bileşen konsantrasyonunu azaltan adsorpsiyon ve hatalara neden olan solvent buharlaşması.

Ekstraksiyon Yöntemleri

Ekstraksiyon, analitleri yardımcı solventlerden ayırır veya müdahale eden maddeleri (örn. proteinler) uzaklaştırır. Organik çözücüler düşük toksisiteli, uçucu, düşük safsızlıklı olmalı ve numuneyi iyi çözmelidir.

Yaygın çözücüler: dietil eter, etil asetat, diklorometan, kloroform, benzen veya bunların karışımları.

Ekstraksiyondan sonra numuneler doğrudan enjekte edilebilir veya analit konsantrasyonunu ve hassasiyetini artırmak için konsantre edilebilir.

Suda Çözünür Numune Ekstraksiyonu

Asidik bileşenler ve tuzlar: yabancı maddeleri organik solventle çıkarın, asidik hale getirin, ardından ekstrakte edin veya enjekte edin; veya N₂ altında kurutun ve enjeksiyondan önce uygun solvent içerisinde çözün.
Temel bileşenler ve tuzlar: safsızlıkları organik solventle çıkarın, bazik hale getirin, ardından ekstrakte edin veya enjekte edin; veya N₂ altında kurutun ve enjeksiyondan önce uygun solvent içerisinde çözün.
Nötr bileşenler: yabancı maddeleri organik solventle ekstrakte edin, ardından ters fazlı kromatografiyle doğrudan analiz edin.

Yağda Çözünür Numune Ekstraksiyonu

Organik solvent ile ekstrakte edin veya doğrudan enjekte edin; veya N₂ altında kurutun ve enjeksiyondan önce uygun solvent içerisinde çözün.

Kirlenme Kaynakları

Analizdeki potansiyel kontaminasyon kaynakları:

Kirlenme Türü	Kaynak	Önleme Tedbirleri
Çevresel	Zararlı gazlar, tozlar, aerosoller	Alet odasını izole ve temiz tutun; AC'yi kurun; nem kontrolü <%70; nem, korozyon ve titreşimi önler
Konteynerler	Cam, seramik, kuvars, plastik laboratuvar malzemeleri	Numune türüne göre uygun kapları seçin; iyice temizleyin
Reaktifler	Kromatografi sınıfı olmayan reaktifler	Kromatografi dereceli, yüksek saflıkta veya analitik dereceli reaktifler kullanın

Standart Çözelti Hazırlama

Önce dahili standart çözümü hazırlayın; Hataları azaltmak için standartlarda ve numunelerde aynı partiyi kullanın
Maddeler kromatografi kalitesinde ve kararlı olmalıdır
Standart çözeltileri kahverengi şişelerde düşük sıcaklıkta saklayın
Vitaminler için kahverengi ölçülü şişeler kullanın veya ışıktan koruyun

Numune Ön İşleminde ve Çözümlerinde Yaygın Sorunlar

Sorun	Sebep	Çözüm
Kromatogramda ilgisiz zirveler	Filtre kirliliği	Filtreyi numune solventine batırın ve test enjeksiyonunu yapın Filtre türünü değiştir Alternatif temizleme tekniklerini kullanın
Düşük tepe yanıtı (özellikle düşük konsantrasyonlu numuneler)	Filtre yüzeyinde adsorpsiyon	Filtre türünü değiştir Tüm numuneleri aynı koşullar altında işleyin Alternatif temizleme tekniklerini kullanın
Düşük iyileşme	Eksik çıkarma	Ekstraksiyon süresini artırın, sıcak solvent kullanın Temizleme yöntemini ayarlayın
Genişletilmiş tepe noktaları, kısaltılmış sütun ömrü	Numune girişimi ve kirlenme	Temizleme yöntemini geliştirin
Zayıf hassasiyet	Eksik kurtarma	Türetme, ayırma, ekstraksiyon veya diğer koşulları optimize edin veya değiştirin Hassasiyeti artırmak için otomatik işlemeyi kullanın

Son Derece Yüksek\/Düşük Sıcaklık ve Işığa Maruz Kalmanın Numune Stabilitesi Üzerindeki Etkileri: Teori ve Metodolojik

Listeye Dön