Вибір правильного буфера для мобільної фази HPLC має вирішальне значення для досягнення оптимального розділення та аналізу вашого зразки. Буфери допомагають підтримувати стабільний рН, який має важливе значення для контролю стану іонізації ваших аналітиків, що впливає на час їх утримання та піку. Нижче наведено детальний огляд того, як вибрати найкращий буфер для вашої програми HPLC.

Чи знаєте ви про підготовку зразків HPLC? Клацніть на цю статтю, щоб дізнатися більше: "Все, що потрібно знати про підготовку зразків HPLC"

Важливість вибору буфера

Буфер - це розчин, рН якого не змінюється після додавання невеликої кількості кислоти або основи. Виходячи з їх складу, буфери можна класифікувати як кислі, або основні. Ефективність буфера визначається його PKA, який в ідеалі повинно бути в межах ± 1 рН одиниці потрібної мобільної фази pH для оптимальної буферизації.

Ключові фактори, які слід враховувати

1.PH Діапазон: рН мобільної фази повинен бути не менше 2 одиниць рН від ПКА аналіту. Це допомагає придушити іонізацію кислих або основних аналітиків, максимізуючи їх утримання на колонці. Наприклад, якщо аналіт є слабкою кислотою з PKA 4,5, використання мобільної фази з рН близько 2,0 збереже її в неіонізованому стані, посилюючи утримання.

2. Тип Buffer: Загальні буфери, що використовуються в ВЕРХ, включають:

Фосфатні буфери: Ефективні в діапазоні рН від 2,0 до 8,0, фосфатні буфери широко використовуються завдяки їх стабільності та сумісності з багатьма аналітиками. Вони особливо придатні для застосувань LC-UV.

Ацетатні буфери: Вони також популярні для аналізів LC-UV і можуть використовуватися в подібних діапазонах рН, як фосфатні буфери.

Летючі буфери: Для застосувань LC-MS летючі буфери, такі як формат, ацетат та бікарбонат амонію, є кращими, оскільки їх можна легко видалити під час процесу мас-спектрометрії.

3. Концентрація спонукання: Типова стартова концентрація для буферів у ВЕРХ становить від 25 до50 мм. Більш високі концентрації можуть покращити піку та ефективність, але також можуть призвести до опадів при змішуванні з органічними розчинниками. Доцільно тримати концентрацію буфера нижче 25 мм, щоб уникнути ускладнень.

4. Хімічна чистота: Завжди використовуйте буфери з високою чистотою хроматографічного рівня для запобігання забрудненню та забезпечення надійних результатів. Домішки можуть призвести до несподіваних взаємодій та мінливості у час утримання.

Температурні ефекти: температура може впливати на рН буферних розчинів. Важливо підготувати та зберігати буфери при постійній температурі для підтримки їх ефективності.

Хочете знати 50 відповідей про флакони ВЕРХ, будь ласка, перевірте цю статтю: 50 найчастіше задаються питання щодо флаконів ВЕРХ

Практичні поради щодо підготовки буфера

Метод підготовки: буфери можна готувати шляхом змішування еквімолярних кількостей їх кислих та основних компонентів або титруванням основного розчину кислотою. Уникайте коригування рН після додавання органічних розчинників, оскільки це може призвести до непослідовних результатів.

Свіжі розчини: регулярно готуйте свіжі буферні розчини, щоб мінімізувати ріст мікробів та деградацію компонентів, що може впливати на хроматографічні показники.

Уникнення корозії: певні буфери, такі як цитрат, можуть роззитим компоненти нержавіючої сталі систем ВЕРХ. Забезпечити ретельне промивання системи після використання таких буферів для запобігання пошкодження.

Висновок

Вибір правого буфера для мобільної фази HPLC має вирішальне значення для досягнення надійних та відтворюваних результатів. Розгляньте рН, тип буфера, концентрація та чистота при виборі. Дотримуючись цих вказівок, ви можете оптимізувати свій метод ВЕРХ, щоб ефективно розділити та проаналізувати свої зразки.

Хочете знати ціну флаконів ВЕРХ, будь ласка, перевірте цю статтю: ВЛАСНІ ВЛАСИ ЦІНА: 50 найчастіше задаються питання

Попередній:

Як правильно використовувати тестові трубки COD для тестування якості води?

Далі:

Як уникнути прориву фільтрів у фільтрах шприца