اپنے HPLC موبائل مرحلے کے لئے صحیح بفر کا انتخاب آپ کے زیادہ سے زیادہ علیحدگی اور تجزیہ کے حصول کے لئے اہم ہے نمونے. بفر ایک مستحکم پییچ کو برقرار رکھنے میں مدد کرتے ہیں ، جو آپ کے تجزیہ کاروں کی آئنائزیشن کی حالت کو کنٹرول کرنے کے لئے ضروری ہے ، اس طرح ان کے برقرار رکھنے کے وقت اور چوٹی کی شکل کو متاثر کرتا ہے۔ ذیل میں آپ کے HPLC ایپلی کیشن کے لئے بہترین بفر کو منتخب کرنے کا طریقہ کا ایک تفصیلی جائزہ ہے۔

کیا آپ HPLC نمونے کی تیاری کے بارے میں جانتے ہیں؟ مزید جاننے کے لئے اس مضمون پر کلک کریں: "HPLC نمونے کی تیاری کے بارے میں آپ کو جاننے کی ہر چیز کی ضرورت ہے"

بفر کے انتخاب کی اہمیت

ایک بفر ایک حل ہے جس کا پییچ تھوڑی مقدار میں تیزاب یا اڈے کو شامل کرنے کے بعد تبدیل نہیں ہوتا ہے۔ ان کی تشکیل کی بنیاد پر ، بفرز کو تیزابیت یا بنیادی کے طور پر درجہ بندی کیا جاسکتا ہے۔ بفر کی تاثیر کا تعین اس کے پی کے اے کے ذریعہ کیا جاتا ہے ، جو زیادہ سے زیادہ بفرنگ کی صلاحیت کے ل ide مطلوبہ موبائل فیز پییچ کے 1 پی ایچ یونٹ کے اندر ہونا چاہئے۔

غور کرنے کے لئے کلیدی عوامل

1. پی ایچ رینج: موبائل مرحلے کا پییچ تجزیہ کار کے پی کے اے سے کم از کم 2 پی ایچ یونٹ دور ہونا چاہئے۔ اس سے تیزابیت یا بنیادی تجزیہ کاروں کی آئنائزیشن کو دبانے میں مدد ملتی ہے ، اور کالم پر ان کی برقراری کو زیادہ سے زیادہ کیا جاتا ہے۔ مثال کے طور پر ، اگر تجزیہ کار 4.5 کے پی کے اے کے ساتھ ایک کمزور تیزاب ہے تو ، موبائل مرحلے کا استعمال پییچ کے ساتھ 2.0 کے ارد گرد استعمال کرے گا ، اسے برقرار رکھنے میں اضافہ کرے گا۔

2. بفر قسم: HPLC میں استعمال ہونے والے عام بفروں میں شامل ہیں:

فاسفیٹ بفرز: 2.0 سے 8.0 کے پییچ رینج میں موثر ، فاسفیٹ بفر بہت سے تجزیہ کاروں کے ساتھ استحکام اور مطابقت کی وجہ سے بڑے پیمانے پر استعمال ہوتے ہیں۔ وہ خاص طور پر LC-UV ایپلی کیشنز کے لئے موزوں ہیں۔

ایسیٹیٹ بفرز: یہ LC-UV اسیس کے لئے بھی مقبول ہیں اور اسی طرح کے پییچ کی حدود میں فاسفیٹ بفرز کی طرح استعمال ہوسکتے ہیں۔

اتار چڑھاؤ بفرز: LC-MS ایپلی کیشنز کے لئے ، فارمیٹ ، ایسیٹیٹ ، اور امونیم بائک کاربونیٹ جیسے اتار چڑھاؤ والے بفروں کو ترجیح دی جاتی ہے کیونکہ بڑے پیمانے پر اسپیکٹومیٹری کے عمل کے دوران انہیں آسانی سے ہٹایا جاسکتا ہے۔

3. بفر حراستی: HPLC میں بفرز کے لئے ایک عام شروعاتی حراستی 25-50 ملی میٹر کے درمیان ہے۔ اعلی حراستی چوٹی کی شکل اور کارکردگی کو بہتر بنا سکتی ہے لیکن جب نامیاتی سالوینٹس کے ساتھ مل جاتی ہے تو بارش کا باعث بھی ہوسکتی ہے۔ یہ مشورہ دیا جاتا ہے کہ پیچیدگیوں سے بچنے کے لئے بفر حراستی کو 25 ملی میٹر سے نیچے رکھیں۔

4. کیمیائی طہارت: آلودگی کو روکنے اور قابل اعتماد نتائج کو یقینی بنانے کے لئے ہمیشہ اعلی طہارت کرومیٹوگرافک گریڈ بفر استعمال کریں۔ نجاست برقرار رکھنے کے اوقات میں غیر متوقع تعامل اور تغیر کا باعث بن سکتی ہے۔

درجہ حرارت کے اثرات: درجہ حرارت بفر حل کے پییچ کو متاثر کرسکتا ہے۔ ان کی تاثیر کو برقرار رکھنے کے لئے مستقل درجہ حرارت پر بفروں کو تیار کرنا اور اسٹور کرنا ضروری ہے۔

HPLC شیشیوں کے بارے میں 50 جوابات جاننا چاہتے ہیں ، براہ کرم اس مضمون کو چیک کریں: 50 اکثر HPLC شیشیوں پر سوالات پوچھے جاتے ہیں

بفر کی تیاری کے لئے عملی نکات

تیاری کا طریقہ: بفرز ان کے تیزابیت اور بنیادی اجزاء کی مساوی مقدار میں ملا کر یا تیزاب کے ساتھ بنیادی حل کو ٹائٹرنگ کرکے تیار کیے جاسکتے ہیں۔ نامیاتی سالوینٹس کو شامل کرنے کے بعد پییچ کو ایڈجسٹ کرنے سے گریز کریں ، کیونکہ اس سے متضاد نتائج برآمد ہوسکتے ہیں۔

تازہ حل: مائکروبیل نمو اور اجزاء کی انحطاط کو کم سے کم کرنے کے لئے باقاعدگی سے تازہ بفر حل تیار کریں ، جو کرومیٹوگرافک کارکردگی کو متاثر کرسکتے ہیں۔

سنکنرن سے گریز کرنا: کچھ بفرز ، جیسے سائٹریٹ ، HPLC سسٹم کے سٹینلیس سٹیل کے اجزاء کو خراب کرسکتے ہیں۔ نقصان کو روکنے کے ل such اس طرح کے بفروں کے استعمال کے بعد سسٹم کی مکمل فلشنگ کو یقینی بنائیں۔

نتیجہ

اپنے HPLC موبائل مرحلے کے لئے صحیح بفر کا انتخاب قابل اعتماد اور تولیدی نتائج کے حصول کے لئے اہم ہے۔ منتخب کرتے وقت پییچ ، بفر کی قسم ، حراستی اور طہارت پر غور کریں۔ ان رہنما خطوط پر عمل کرتے ہوئے ، آپ اپنے نمونوں کو موثر انداز میں الگ اور تجزیہ کرنے کے لئے اپنے HPLC کے طریقہ کار کو بہتر بناسکتے ہیں۔

HPLC شیشیوں کی قیمت جاننا چاہتے ہیں ، براہ کرم اس مضمون کو چیک کریں: HPLC شیشی قیمت: 50 اکثر پوچھے گئے سوالات

پچھلا:

پانی کے معیار کی جانچ کے لئے کوڈ ٹیسٹ ٹیوبوں کا صحیح طریقے سے استعمال کیسے کریں؟

اگلا:

سرنج فلٹرز میں فلٹر کی پیشرفت سے کیسے بچیں