Một số mẫu vẫn không thể được tiêm trực tiếp sau khi xử lý trước. Việc tạo dẫn xuất là cần thiết để tạo ra các hợp chất không hấp thụ tia cực tím hoặc phát huỳnh quang bằng máy dò tia cực tím hoặc huỳnh quang.

Cải thiện độ nhạy
Tăng cường sự tách biệt (thay đổi chất lượng)

Các vấn đề có thể xảy ra bao gồm mất mẫu, nhiễm bẩn, phản ứng không hoàn toàn hoặc nhiều sản phẩm phụ, có thể ảnh hưởng đến độ chính xác hoặc gây ra lỗi.

Lọc mẫu

Các mẫu LC phải đồng nhất và không có hạt; các hạt có thể làm hỏng kim phun hoặc chặn cột. Các bước bao gồm:

Lắc mẫu trước khi tiêm và kiểm tra các hạt, độ đục hoặc nhũ tương
Nếu quan sát thấy các hạt, hãy lọc mẫu bằng màng có thể giữ lại ≥0,15μm hạt

Các vấn đề tiềm ẩn: nhiễm bẩn mẫu, nồng độ thành phần giảm hấp phụ và bay hơi dung môi gây ra lỗi.

Phương pháp chiết xuất

Quá trình chiết tách tách các chất phân tích khỏi các dung môi đồng thời hoặc loại bỏ các chất gây nhiễu (ví dụ: protein). Dung môi hữu cơ phải có độc tính thấp, dễ bay hơi, ít tạp chất và hòa tan tốt mẫu.

Các dung môi phổ biến: dietyl ete, etyl axetat, diclometan, cloroform, benzen hoặc hỗn hợp.

Sau khi chiết, mẫu có thể được bơm trực tiếp hoặc cô đặc để tăng nồng độ và độ nhạy của chất phân tích.

Chiết xuất mẫu hòa tan trong nước

Thành phần axit và muối: chiết tạp chất bằng dung môi hữu cơ, điều chỉnh thành axit rồi chiết hoặc bơm; hoặc làm khô dưới N₂ và hòa tan trong dung môi thích hợp trước khi tiêm.
Thành phần bazơ và muối: chiết tạp chất bằng dung môi hữu cơ, điều chỉnh về bazơ rồi chiết hoặc bơm; hoặc làm khô dưới N₂ và hòa tan trong dung môi thích hợp trước khi tiêm.
Thành phần trung tính: chiết tạp chất bằng dung môi hữu cơ, sau đó phân tích trực tiếp bằng sắc ký pha đảo.

Chiết xuất mẫu hòa tan trong chất béo

Chiết bằng dung môi hữu cơ hoặc tiêm trực tiếp; hoặc làm khô dưới N₂ và hòa tan trong dung môi thích hợp trước khi tiêm.

Nguồn ô nhiễm

Các nguồn ô nhiễm tiềm ẩn trong phân tích:

Loại ô nhiễm	Nguồn	Biện pháp phòng ngừa
Môi trường	Khí, bụi, sol khí độc hại	Giữ phòng dụng cụ cách ly, sạch sẽ; cài đặt AC; kiểm soát độ ẩm <70%; ngăn chặn độ ẩm, ăn mòn, rung động
Thùng chứa	Dụng cụ thí nghiệm thủy tinh, gốm sứ, thạch anh, nhựa	Chọn vật chứa thích hợp cho từng loại mẫu; làm sạch kỹ lưỡng
Thuốc thử	Thuốc thử không dùng cho sắc ký	Sử dụng thuốc thử cấp sắc ký, độ tinh khiết cao hoặc cấp phân tích

Chuẩn bị dung dịch chuẩn

Chuẩn bị dung dịch chuẩn nội trước; sử dụng cùng một lô chất chuẩn và mẫu để giảm sai sót
Các chất phải đạt chất lượng sắc ký và ổn định
Bảo quản dung dịch chuẩn trong chai màu nâu ở nhiệt độ thấp
Đối với vitamin, sử dụng bình định mức màu nâu hoặc tránh ánh sáng.

Các vấn đề thường gặp trong xử lý mẫu và giải pháp

vấn đề	nguyên nhân	Giải pháp
Các đỉnh không liên quan trong sắc ký đồ	Lọc ô nhiễm	Ngâm bộ lọc trong dung môi mẫu và tiêm thử Thay đổi loại bộ lọc Sử dụng các kỹ thuật làm sạch thay thế
Đáp ứng đỉnh thấp (đặc biệt là các mẫu có nồng độ thấp)	Hấp phụ trên bề mặt lọc	Thay đổi loại bộ lọc Xử lý tất cả các mẫu trong cùng điều kiện Sử dụng các kỹ thuật làm sạch thay thế
Phục hồi thấp	Khai thác không đầy đủ	Tăng thời gian chiết, sử dụng dung môi nóng Điều chỉnh phương pháp làm sạch
Đỉnh mở rộng, tuổi thọ cột rút ngắn	Sự can thiệp và ô nhiễm mẫu	Cải thiện phương pháp làm sạch
Độ chính xác kém	Phục hồi không đầy đủ	Tối ưu hóa hoặc thay thế quá trình tạo dẫn xuất, tách, chiết hoặc các điều kiện khác Sử dụng xử lý tự động để cải thiện độ chính xác

Ảnh hưởng của nhiệt độ cực cao\/Nhiệt độ thấp và ánh sáng đến độ ổn định của mẫu: Lý thuyết & phương pháp

Quay lại danh sách