מאַסטערינג די לויפן: א לאַב וועטעראַן גייד צו HPLC מאָביל פאַסעס

הקדמה

איך בין געווען ווו איר זענט - סטערינג אויף אַ מאָניטאָר ביי 2:00, וואַטשינג אַ באַסעלינע דריפט ווי אַ פאַרפאַלן שיפל אין ים, וואַנדערינג אויב די "HPLC doo-hickey" איז ינווענטאַד נאָר צו פּרובירן מיין סייכל. אויב איר פילן דיליריאַס טריינג צו ייַנוויקלען דיין קאָפּ אַרום הויך פאָרשטעלונג פליסיק קראָומאַטאַגראַפי (HPLC), נעמען אַ אָטעם. עס איז נישט בלויז אַ קעסטל פון טייַער טיילן; עס איז אַ יידל טאַנצן צווישן כעמיע און פיזיק.

אין די לאַבאָראַטאָריע, מיר אָפט זאָגן די רירעוודיק פאַסע איז די "לעבן ליניע" פון די סיסטעם. אָן עס, דיין מוסטער איז נאָר זיצן אין אַ ינדזשעקטער, גיין ינ ערגעצ ניט. אָבער ווי טאָן איר קלייַבן די רעכט "באַן" צו פירן דיין מאַלאַקיולז צו די דעטעקטאָר? זאל ס ברעכן עס אַראָפּ ווי מיר שמועסן איבער אַ קאַווע אין די ברייקרום.

1. וואָס איז HPLC, טאַקע?

אין זיין האַרץ, HPLC איז וועגן צעשיידונג. טראַכטן פון עס ווי אַ ראַסע ווו די "שפּור" איז די סטיישאַנערי פאַסע (די זייַל) און די "ווינט" פּושינג די ראַנערז צוזאמען איז די הפּלק רירעוודיק פאַסע.

די מאַגיש כאַפּאַנז ווייַל פאַרשידענע מאַלאַקיולז האָבן פאַרשידענע "אַפיניטיעס." עטלעכע מאַלאַקיולז ליב די רירעוודיק פאַסע און פארגרעסער דורך די זייַל. אנדערע זענען "קלעפּיק" - זיי האָבן אַ ענגשאַפט אויף די סטיישאַנערי פאַסע און פאַרהאַלטן הינטער. דער חילוק אין גיכקייַט איז וואָס קריייץ די פּיקס אויף דיין טשראָמאַטאָגראַם.

2. נאָרמאַל פאַסע ווס פאַרקערט פאַסע

דאָס איז יוזשאַוואַלי ווו אַלעמען סטאַרץ פּולינג זייער האָר. אין מיין יאָרן פון פיר, איך געפונען די יזיאַסט וועג צו געדענקען דעם איז דורך קוקן אין פּאָולעראַטי.

יי נאָרמאַל פאַסע קראָומאַטאַגראַפי

דאָס איז דער "אַלט שול" וועג. אין נאָרמאַל פאַסע קראָומאַטאַגראַפי, די סטיישאַנערי פאַסע איז פּאָליאַר - טראַכטן וועגן אים ווי אַ מאַגנעט פֿאַר פּאָליאַר מאַלאַקיולז. די רירעוודיק פאַסע וואָס מיר נוצן דאָ איז ניט-פּאָליאַר, יוזשאַוואַלי סאָלוואַנץ ווי העקסאַן אָדער העפּטאַנע.

• די לאָגיק: פּאָליאַר "קלעפּיק" מאַלאַקיולז ווערן געהאלטן צוריק דורך די פּאָליאַר זייַל. ניט-פּאָולער מאַלאַקיולז וואַש אויס געשווינד מיט די ניט-פּאָולער רירעוודיק פאַסע.

• די פּראָ עצה: אויב איר פאַרגרעסערן די פּאָולעראַטי פון דיין רירעוודיק פאַסע (אַדינג אַ ביסל יסאָפּראָפּאַנאָל), דיין סאַמפּאַלז וועט אַקשלי מאַך פאַסטער.

ב. פאַרקערט פאַסע טשראָמאַטאַגראַפי

הייַנט, דאָס איז די גאָלד נאָרמאַל. מיסטאָמע 90% פון די אַרבעט איך טאָן אין די לאַבאָראַטאָריע ינוואַלווז פאַרקערט פאַסע קראָומאַטאַגראַפי. דאָ, מיר פליפּ די שריפט. דער זייַל איז ניט-פּאָליאַר (הידראָפאָביק, ווי ייל), און די פאַסע רירעוודיק איז פּאָליאַר (יוזשאַוואַלי אַ מישן פון וואַסער און מעטאַנאָל אָדער אַסאַטאָוניטרילע).

• די לאָגיק: וואַסער-לאַווינג (פּאָליאַר) מאַלאַקיולז פארגרעסער ווייַל זיי האַסן די ייליק זייַל. פעט-לאַווינג (ניט-פּאָליאַר) מאַלאַקיולז שטעקן צו די זייַל ווי קליי.

• פארוואס מיר ליבע עס: עס איז פּרידיקטאַבאַל, ווערסאַטאַל און ניצט וואַסער-באזירט סאָלוואַנץ וואָס זענען גרינגער צו פירן.

3. די "גאָלדען רול" פון סאַלוואַנט קוואַליטי

איר וועט זען "HPLC גראַדע" אויף לאַבעלס פֿאַר אַ סיבה. דו זאלסט נישט אפילו טראַכטן וועגן ניצן ACS מיינונג אָדער עפּעס ווייניקער. פארוואס? ווייַל די "קליינטשיק" ימפּיוראַטיז אין נידעריק-מיינונג סאָלוואַנץ וועט אַקיומיאַלייט אויף דיין זייַל איבער צייַט, מאָרד דיין האַכלאָטע און קריייטינג מאָדנע גייַסט פּיקס.

שטענדיק נוצן Milli-Q (18.2 MΩ.cm) מיינונג וואַסער. אויב דיין וואַסער איז "גראָב," דיין באַסעלינע וועט קוקן ווי אַ באַרג קייט, און איר וועט פאַרברענגען דריי טעג אין טריינג צו רעכענען וואָס.

4. דעגאַססינג און פילטריישאַן: די פאָרשטעלונג קיללערס

לופט איז די פייַנט פון די hplc רירעוודיק פאַסע. אונטער נאָרמאַל דרוק, לופט דיסאַלווז אין דיין סאָלוואַנץ. אבער אַמאָל אַז סאַלוואַנט היץ די פּאָמפּע, די קליינטשיק באַבאַלז קענען באַקומען טראַפּט אין די טשעק וואַלווז אָדער די דעטעקטאָר צעל.

• דער רעזולטאַט: פלאַקטשויישאַנז פון לויפן קורס, פּאַלסינג באַסליינז און ריטענשאַן צייט.

• די פאַרריכטן: ניצן געבויט-אין דעגאַסערז, אָדער סאָניקאַטיאָן \/ וואַקוום פילטריישאַן אויב איר לויפן הויך-סענסיטיוויטי אַססעס.

פילטריישאַן איז ניט אָפּטיאָנאַל. אפילו HPLC מיינונג סאָלוואַנץ קענען האָבן מיקראָסקאָפּיק פּאַרטיקאַלז פון די מאַנופאַקטורינג פּראָצעס אָדער די פלאַש היטל. פילטער שטענדיק דורך אַ 0.22 μm אָדער 0.45 μm מעמבראַנע איידער עס רירט דיין רעזערוווואַר. עס איז אַ 5-מינוט אַרבעט וואָס קענען ראַטעווען דיין זייַל פון אַ צו פרי טויט.

5. באַפערס און די גלאז טראַפּ

אין פאַרקערט פאַסע קראָומאַטאַגראַפי, מיר נוצן באַפערז צו האַלטן ף סטאַביל פֿאַר ייאַניזאַבאַל סאַמפּאַלז.

• פּראָ עצה: אויב איר געוויינט אַ באַפער הייַנט, וואַשן די סיסטעם מיט ריין וואַסער\/ אָרגאַניק מישן איידער איר גיין היים. אויב איר טאָן ניט, די סאָלץ וועט קריסטאַלייז און פּיצל דיין פּאָמפּע סתימות.

• די גלאז טראַפּ: צי האָט איר וויסן אַז אויב דיין הפּלק רירעוודיק פאַסע ף איז> 8.0, עס קענען אַקשלי ליטש מעטאַל ייאַנז פון גלאז רעזערוווואַרז? באַשטימען צו ומבאַפלעקט שטאָל אָדער ספּעשאַלייזד פּלאַסטיק קאַנטיינערז אין די קאַסעס.

זאל ס באַקומען דיין צעשיידונג פּערפעקט

באַקומען די רירעוודיק פאַסע רעכט איז 80% פון די שלאַכט אין HPLC. אויב איר 'רע סטראַגאַלינג מיט "שאַג טעפּעך" באַסליינז, דרוק ספּייקס, אָדער סתירה רעזולטאַטן, טאָן ניט וויסט אנדערן טאָג געסינג.

איך האָבן פארבראכט טויזנטער פון שעה אין דער באַנק טראָובלעשאָאָטינג די פּינטלעך ישוז. איך בין שטענדיק צופרידן צו טיילן אַ ביסל פון "לאַב-פּראָווען" עצה צו באַקומען דיין פּרויעקט צוריק אויף שפּור.

• ווהאַצאַפּפּ: 86 18338832256

• בליצפּאָסט:boonemi@aijirenvial.com
  

רעפערענצן

• Snyder, L. R., Kirkland, JJ, & Dolan, JW (2011). הקדמה צו מאָדערן פליסיק טשראָמאַטאָגראַפי. 3rd אַדישאַן. יוחנן ווילי & זין. (די "גאָלד סטאַנדאַרד" פֿאַר פארשטאנד HPLC צעשיידונג מעקאַניזאַמז).

• Dolan, JW (2002). "מאָביל פאַסע צוגרייטונג." LCGC צפון אַמעריקע, טראָובלעשאָאָטינג סעריע. (יקערדיק פּראַקטיש פירער פֿאַר דיגאַססינג און פילטריישאַן).

• Aparicio, R. (עד.). (2013). מאַנואַל פון HPLC אָפּטימיזאַטיאָן. Elsevier. (פולשטענדיק דאַטן אויף סאַלוואַנט פּאָולעראַטי און באַפער סעלעקציע אין פאַרקערט פאַסע קראָומאַטאַגראַפי).

• Agilent Technologies. "HPLC סיסטעם טראָובלעשאָאָטינג גייד: אַוווידינג פּראָסט מאָביל פאַסע ערראָרס." טעכניש ריסאָרס ביבליאָטעק.

• וואַטערס קאָרפּאָראַטיאָן. "פּרינסיפּאַלס פון טשראָמאַטאָגראַפי: נאָרמאַל פאַסע ווס פאַרקערט פאַסע." בילדונג סעריע.

• אינטערנאַציאָנאַלע קאָנפֿערענץ אויף האַרמאָניזאַטיאָן (ICH). ק 2 (ר 1) וואַלאַדיישאַן פון אַנאַליטיקאַל פּראָוסידזשערז: טעקסט און מעטאַדאַלאַדזשי. (סטאַנדאַרד פֿאַר שפּיץ געגנט קוואַנטאַפאַקיישאַן און ריטענשאַן צייט פעסטקייַט).