Titunto si Sisan naa: Itọsọna Ogbo Lab kan si Awọn ipele Alagbeka HPLC

Ọrọ Iṣaaju

Mo ti wa nibiti o wa — ti n wo olutẹwo kan ni 2 AM, ti n wo wiwakọ ipilẹ kan bi ọkọ oju omi ti o sọnu ni okun, ni iyalẹnu boya “HPLC doo-hickey” ni a ṣẹda lati kan idanwo mimọ mi. Ti o ba ni rilara delirious igbiyanju lati fi ipari si ori rẹ ni ayika chromatography olomi iṣẹ giga (HPLC), gba ẹmi. Kii ṣe apoti kan ti awọn ẹya gbowolori; o jẹ ijó ẹlẹgẹ laarin kemistri ati fisiksi.

Ninu laabu, a nigbagbogbo sọ pe alakoso alagbeka jẹ “ila aye” ti eto naa. Laisi rẹ, ayẹwo rẹ kan joko ni injector, ko lọ nibikibi. Ṣugbọn bawo ni o ṣe yan “ọkọ oju-irin” ti o tọ lati gbe awọn moleku rẹ lọ si aṣawari naa? Jẹ ki a ya lulẹ bi a ti n sọrọ lori kọfi kan ninu yara isinmi.

1. Kini HPLC, Lootọ?

Ni ipilẹ rẹ, HPLC jẹ nipa iyapa. Ronu nipa rẹ bi ere-ije nibiti “orin” naa jẹ ipele iduro (awọn ọwọn) ati “afẹfẹ” titari awọn asare pẹlu jẹ ipele alagbeka hplc.

Idan naa n ṣẹlẹ nitori pe awọn moleku oriṣiriṣi ni “awọn ibatan” oriṣiriṣi. Diẹ ninu awọn moleku nifẹ ipele alagbeka ati sun-un nipasẹ ọwọn naa. Awọn miiran jẹ "alalepo" - wọn ni fifun pa lori ipo iduro ati aisun lẹhin. Iyatọ yii ni iyara jẹ ohun ti o ṣẹda awọn oke giga wọnyẹn lori chromatogram rẹ.

2. Deede Alakoso vs. Yiyipada Alakoso

Eyi jẹ igbagbogbo nibiti gbogbo eniyan bẹrẹ lati fa irun wọn jade. Ni awọn ọdun ti iṣe mi, Mo ti rii ọna ti o rọrun julọ lati ranti eyi ni nipa wiwo polarity.

A. Kromatography Alakoso deede

Eyi ni ọna "ile-iwe atijọ". Ni deede kiromatografi alakoso, ipele iduro jẹ pola-ronu rẹ bi oofa fun awọn moleku pola. Ipele alagbeka ti a lo nibi kii ṣe pola, nigbagbogbo awọn olomi bi hexane tabi heptane.

• Awọn kannaa: Pola “alalepo” moleku gba idaduro nipasẹ awọn pola iwe. Awọn moleku ti kii ṣe pola wẹ ni kiakia pẹlu apakan alagbeka ti kii ṣe pola.

• Italolobo Pro: Ti o ba pọ si polarity ti alakoso alagbeka rẹ (fifikun diẹ ti isopropanol), awọn ayẹwo rẹ yoo gbera ni iyara.

B. Yiyipada Kiromatografi Alakoso

Loni, eyi ni boṣewa goolu. Boya 90% ti iṣẹ ti Mo ṣe ninu laabu jẹ pẹlu kiromatogirafa alakoso yiyipada. Nibi, a yi iwe afọwọkọ pada. Awọn iwe jẹ ti kii-pola (hydrophobic, bi epo), ati awọn mobile alakoso jẹ pola (nigbagbogbo kan illa ti omi ati kẹmika tabi acetonitrile).

• Awọn Logic: Omi-ife (pola) moleku nipasẹ nitori won korira awọn ororo ọwọn. Awọn moleku olufẹ ọra (ti kii ṣe pola) duro si ọwọn bi lẹ pọ.

• Kini idi ti a fi nifẹ rẹ: O jẹ asọtẹlẹ, wapọ, ati lilo awọn nkan ti o da lori omi ti o rọrun lati ṣakoso.

3. Awọn "Golden Ofin" ti yo Didara

Iwọ yoo rii “Ite HPLC” lori awọn akole fun idi kan. Maṣe ronu paapaa nipa lilo ipele ACS tabi ohunkohun ti o kere si. Kí nìdí? Nitoripe awọn aimọ “kekere” wọnyẹn ni awọn ohun mimu ti o kere ju yoo kojọpọ lori iwe rẹ ni akoko pupọ, pipa ipinnu rẹ ati ṣiṣẹda awọn oke giga ẹmi ajeji.

Nigbagbogbo lo Milli-Q (18.2 MΩ.cm) omi ite. Ti omi rẹ ba jẹ "idọti," ipilẹ rẹ yoo dabi ibiti oke-nla, ati pe iwọ yoo lo ọjọ mẹta lati gbiyanju lati mọ idi.

4. Degassing ati Filtration: The Performance Killers

Afẹfẹ jẹ ọta ti alakoso alagbeka hplc. Labẹ titẹ deede, afẹfẹ nyọ ninu awọn olomi rẹ. Ṣugbọn ni kete ti epo naa ba de fifa soke, awọn nyoju kekere yẹn le di idẹkùn ninu awọn falifu ayẹwo tabi sẹẹli aṣawari.

• Abajade: Awọn iyipada oṣuwọn sisan, awọn ipilẹ pulsing, ati awọn akoko idaduro gbigbe.

• Awọn Fix: Lo awọn degassers ti a ṣe sinu, tabi sonication \/ filtration vacuum ti o ba nṣiṣẹ awọn igbelewọn ifamọ giga.

Sisẹ kii ṣe iyan. Paapaa awọn olufoji ipele HPLC le ni awọn patikulu airi lati ilana iṣelọpọ tabi fila igo. Ṣe àlẹmọ nigbagbogbo nipasẹ awo awọ 0.22µm tabi 0.45µm ṣaaju ki o to kan ibi ipamọ rẹ. O jẹ iṣẹ-iṣẹju iṣẹju 5 ti o le fipamọ ọwọn rẹ lati iku ti o ti tọjọ.

5. Buffers ati Gilasi Pakute

Ni yiyipada kiromatografi alakoso, a lo awọn buffers lati tọju pH iduroṣinṣin fun awọn ayẹwo ionizable.

• Italolobo Pro: Ti o ba lo ifipamọ kan loni, fọ eto naa pẹlu omi mimọ / idapọ Organic ṣaaju ki o to lọ si ile. Ti o ko ba ṣe bẹ, awọn iyọ wọnyẹn yoo gbin ati ki o ge awọn edidi fifa soke rẹ.

• Pakute Gilasi naa: Njẹ o mọ pe ti o ba jẹ pe pH alagbeka alagbeka hplc rẹ jẹ> 8.0, o le jẹ awọn ions irin gangan lati awọn ifiomipamo gilasi? Yipada si irin alagbara tabi awọn apoti ṣiṣu pataki ni awọn iṣẹlẹ wọnyi.

Jẹ ki a Gba Iyapa Rẹ Ni pipe

Gbigba alakoso alagbeka ni ẹtọ jẹ 80% ti ogun ni HPLC. Ti o ba n tiraka pẹlu awọn ipilẹ ipilẹ “ capeti shag ”, awọn spikes titẹ, tabi awọn abajade aisedede, maṣe ṣe airotẹlẹ ọjọ miiran.

Mo ti lo awọn ẹgbẹẹgbẹrun awọn wakati ni laasigbotitusita awọn ọran gangan wọnyi. Inu mi dun nigbagbogbo lati pin diẹ ninu imọran “lab-ṣafihan” lati gba iṣẹ akanṣe rẹ pada si ọna.

• WhatsApp: 86 18338832256

• Imeeli:boonemi@aijirenvial.com
  

Awọn itọkasi

• Snyder, L. R., Kirkland, J. J., & Dolan, J. W. (2011). Ifihan to Modern Liquid Chromatography. 3rd Edition. John Wiley & Awọn ọmọ. (The "Gold Standard" fun oye HPLC Iyapa ise sise).

• Dolan, J. W. (2002). "Igbaradi Alakoso Alagbeka." LCGC North America, Laasigbotitusita Series. (Itọsọna to wulo pataki fun degassing ati sisẹ).

• Aparicio, R. (Ed.). (2013). Afowoyi ti HPLC o dara ju. Elsevier. (Data okeerẹ lori polarity olomi ati yiyan saarin ni kiromatogirafi alakoso yiyipada).

• Agilent Technologies. "Itọsọna Laasigbotitusita Eto HPLC: Yẹra fun Awọn aṣiṣe Alakoso Alagbeka ti o wọpọ." Imọ Resource Library.

• Omi Corporation. "Awọn ilana ti Chromatography: Alakoso deede vs. Yiyipada Ipele." Ẹkọ Series.

• Apejọ Kariaye lori Iṣọkan (ICH). Q2(R1) Ifọwọsi Awọn ilana Itupalẹ: Ọrọ ati Ilana. (Boṣewa fun titobi agbegbe ti o ga julọ ati iduroṣinṣin akoko idaduro).