Alles wat u moet weet oor HPLC -voorbeeldvoorbereiding

Voorbereiding is om verskillende redes 'n kritieke stap in HPLC -analise.

Minimaliseer interferensies:Monsters bevat dikwels onsuiwerhede en matrikskomponente wat die opsporing van teikenanaliete kan beïnvloed. Effektiewe monstervoorbereidingstegnieke kan help om hierdie ongewenste stowwe te verwyder en die analitiese akkuraatheid te verbeter.

Verbeter analietherstel:Behoorlike voorbereiding verbeter die herstel van die analiet en verseker dat die resultate die werklike konsentrasie van die oorspronklike monster weerspieël. Dit is veral belangrik vir spooranalise waar ontleders teen lae konsentrasies teenwoordig is.

Verbeterde piekvorm:Behoorlik voorbereide monsters help om simmetriese en goed gedefinieerde pieke in die chromatogram te vorm. Dit is noodsaaklik vir akkurate kwantifisering. Onbehoorlike monstervoorbereiding kan lei tot 'n hoogtepunt en verbreding, wat die interpretasie van data bemoeilik.

Beskerm u HPLC -stelsel:Kontaminante in u monster kan kolomme en ander komponente in u HPLC -stelsel beskadig, wat lei tot verhoogde onderhoudskoste en stilstand. Behoorlike monstervoorbereiding verminder die risiko van verstopping en slytasie van die stelsel.

Die eerste stap in monstervoorbereiding is om u monster korrek te versamel. Dit sluit in:

Gebruik skoon houers:Gebruik altyd skoon, inerte houers om besoedeling te voorkom. Glas- of plastiekhouers van hoë gehalte word aanbeveel.

Vermy besoedeling:Gebruik handskoene en skoon werktuie om besoedeling van sebum en ander bronne te voorkom.

Behoorlike etikettering:Monsters duidelik benoem om vermengings te vermy en om naspeurbaarheid te verseker.

Voorbeeldhomogenisering verseker homogeniteit, wat belangrik is vir reproduceerbare resultate. Homogeniseringstegnieke sluit in:

Meganiese homogenisering: meng soliede of semi-vaste monsters met behulp van 'n roerder of homogenisator.

Ultrasoniese homogenisering:Toepassing van ultraklank om deeltjies binne 'n vloeistofmonster te versprei.

Afhangend van die verwagte konsentrasie van analiete, sal monsters moontlik verdun of gekonsentreer word. Dit kan bereik word deur:

Verdunning:Verdun die monster na die gewenste konsentrasie met dieselfde oplosmiddel as die mobiele fase.

Konsentrasie:Analiete kan gekonsentreer word met behulp van tegnieke soos verdamping of vaste fase -ekstraksie (SPE).

Filtrasie is noodsaaklik om deeltjies te verwyder wat HPLC -kolomme kan verstop. Algemene filtermetodes sluit in ：

Membraanfiltrasie:Gebruik0,2 μm of 0,45 μm filtersdeeltjies te verwyder. Tipies word polyethersulfone (PES) of nylonfilters gebruik.

Prefiltrasie:Vir monsters met 'n hoë deeltjie -inhoud, kan prefiltrasie deur 'n groter poriegrootte -filter verstop word.


50 Vrae wat gereeld gevra word oor spuitfilters, kyk na hierdie insiggewende artikel: Die onderwerp van 'spuitfilter' 50 vrae wat gereeld gevra word

Oorweeg dit om u monster te stabiliseer om die analiet te voorkom.

pH -aanpassing:Die aanpassing van die pH kan help om sekere ontleders te stabiliseer. Suurverbindings kan byvoorbeeld versuring benodig om afbraak te voorkom.

Bymiddels:As u stabiliseerders of preserveermiddels byvoeg, kan dit help om monsterintegriteit tydens opberging en ontleding te handhaaf.

Dit is belangrik om die korrekte oplosmiddel te kies om u monster op te los en om die versoenbaarheid met u HPLC -stelsel te verseker. Oorweeg die volgende:

Oplosmiddel polariteit:Om volledige ontbinding te bewerkstellig, moet die oplosmiddel ooreenstem met die polariteit van die analiet.

Mobiele fase -verenigbaarheid: Gebruik 'n oplosmiddel wat versoenbaar is met die mobiele fase om moontlike inmenging te verminder.

7. Voorbereiding van standaarde

Voorbereiding van kalibrasiestandaarde is noodsaaklik vir die kwantifisering van 'n analiet in 'n monster. Dit sluit in:

Voorbereiding van kalibrasiekurwe:Berei 'n reeks bekende konsentrasies van die analiet voor om 'n kalibrasiekurwe vir kwantifisering te vestig.

Gebruik dieselfde oplosmiddel:Om konsekwentheid te handhaaf, berei u standaarde altyd voor met dieselfde oplosmiddel en toestande as u monsters.

Volg standaard bedryfsprosedures (SOP's):Vestig en hou by SOP's vir monstervoorbereiding om konsekwentheid en reproduceerbaarheid te verseker.

Gebruik reagense en oplosmiddels van hoë gehalte:Gebruik altyd HPLC-graad oplosmiddels en reagense met 'n hoë suiwerheid om besoedeling te verminder.

Hou u werkruimte skoon:Hou u monstervoorbereidingsarea skoon en georganiseerd om die risiko van besoedeling te verminder.

Dokumenteer alles:Hou gedetailleerde rekords van u voorbeeldvoorbereidingsprosedures, insluitend afwykings van standaardprotokolle.

Valideer metodes:Valideer monstervoorbereidingsmetodes gereeld om te verseker dat dit betroubare en reproduceerbare resultate lewer.

Swak piekvorm:As pieke breed of aan die gang is, kan dit dui op onvolledige ontbinding of die teenwoordigheid van deeltjies. Sorg dat u monster deeglik gemeng en gefiltreer is.

Ghost Peaks:Spookpieke kan veroorsaak word deur onsuiwerhede in die oplosmiddel of monster, gebruik oplosmiddels met 'n hoë suiwerheid en sorg dat alle glasware en toerusting skoon is.

Lae sensitiwiteit:As sensitiwiteit laag is, oorweeg dit om u ekstraksiemetode te optimaliseer of die konsentrasie van u analiet te verhoog.

Kolom verstop:Gereelde verstopping kan aandui dat u monster te veel deeltjies bevat of nie voldoende gefiltreer word nie. Evalueer u filtrasieproses en oorweeg dit voorfiltrasie.

Inkonsekwente resultate:Variasie in resultate kan spruit uit inkonsekwente monstervoorbereiding. Standaardiseer alle prosedures en verseker dat personeel wat by monstervoorbereiding betrokke is, behoorlik opgelei word.

Namate analitiese eise toeneem, neem laboratoriums meer gevorderde monstervoorbereidingstegnieke aan om doeltreffendheid en akkuraatheid te verbeter:

SPE is 'n wyd gebruikte tegniek wat die selektiewe ekstraksie van analiete uit komplekse matrikse moontlik maak. Dit behels die deurgang van 'n vloeistofmonster deur 'n soliede adsorberende materiaal wat die teikenanaliet behou, terwyl onsuiwerhede deurgaan.

LLE is 'n tegniek wat analiete skei op grond van hul oplosbaarheid in twee onbevoegde vloeistowwe. Hierdie metode is effektief in die skeiding van verbindings met verskillende polariteite en word dikwels in omgewings- en farmaseutiese analise gebruik.

Quechers is 'n gewilde metode om voedsel- en omgewingsmonsters voor te berei wat die ekstraksie- en opruimingsstappe in een proses kombineer, wat dit doeltreffend en koste-effektief maak.

Deurvoer en reproduceerbaarheid kan aansienlik verbeter word deur outomatiese monstervoorbereidingstelsels, wat take soos verdunning, filtrasie en SPE met minimale menslike ingryping kan uitvoer, en sodoende die risiko van foute verminder.


Wil u meer weet oor HPLC -voorbeeldvoorbereiding, kyk gerus na hierdie artikel: HPLC -monstervoorbereidingsoplossings vir die beste resultate

HPLC -monstervoorbereiding is 'n kritieke stap wat die akkuraatheid en betroubaarheid van analitiese resultate aansienlik kan beïnvloed. Deur die beste praktyke te volg, toepaslike tegnieke te gebruik en algemene probleme aan te spreek, kan laboratoriums die monstervoorbereidingsproses optimaliseer deur gevorderde tegnieke en tegnologieë aan te neem namate analitiese behoeftes ontwikkel. Outomatisering sal die doeltreffendheid en doeltreffendheid van HPLC -ontledings verder verbeter. Behoorlike monstervoorbereiding verbeter nie net die kwaliteit van die resultate nie, maar beskerm ook die HPLC-stelsel, wat langtermynbetroubaarheid en werkverrigting verseker.