Tot el que necessiteu saber sobre la preparació de mostres per HPLC

La preparació de la mostra és un pas crític en l'anàlisi HPLC per diverses raons.

Minimitzar les interferències:Les mostres sovint contenen impureses i components de la matriu que poden interferir amb la detecció dels analits objectiu. Les tècniques efectives de preparació de mostres poden ajudar a eliminar aquestes substàncies no desitjades i millorar la precisió analítica.

Millorar la recuperació d'analits:La preparació adequada millora la recuperació de l'analit i assegura que els resultats reflecteixen la concentració real de la mostra original. Això és especialment important per a l'anàlisi de traces on els analits estan presents a concentracions baixes.

Forma de pic millorada:Les mostres preparades correctament ajuden a formar pics simètrics i ben definits en el cromatograma. Això és essencial per a una quantificació precisa. La preparació inadequada de la mostra pot provocar un pic de cua i l'ampliació, cosa que complica la interpretació de les dades.

Protegiu el vostre sistema HPLC:Els contaminants de la vostra mostra poden danyar columnes i altres components del vostre sistema HPLC, la qual cosa comporta un augment dels costos de manteniment i temps d'inactivitat. La preparació adequada de la mostra redueix el risc d'obstrucció i desgast del sistema.

El primer pas per preparar la mostra és recollir la mostra correctament. Això inclou:

Utilitzeu recipients nets:Utilitzeu sempre recipients nets i inerts per evitar la contaminació. Es recomanen envasos de vidre o plàstic d'alta qualitat.

Evitar la contaminació:Utilitzeu guants i eines netes per evitar la contaminació del sèu i altres fonts.

Etiquetatge adequat:Etiqueta clarament les mostres per evitar confusions i garantir la traçabilitat.

L'homogeneïtzació de la mostra garanteix l'homogeneïtat, la qual cosa és important per a resultats reproduïbles. Les tècniques d'homogeneïtzació inclouen:

Homogeneïtzació mecànica: mescla de mostres sòlides o semisòlides mitjançant un agitador o homogeneïtzador.

Homogeneïtzació per ultrasons:Aplicació d'ultrasons per dispersar partícules dins d'una mostra líquida.

Depenent de la concentració esperada d'anàlits, pot ser que s'hagin de diluir o concentrar les mostres. Això es pot aconseguir mitjançant:

Dilució:Diluir la mostra a la concentració desitjada utilitzant el mateix dissolvent que la fase mòbil.

Concentració:Els analits es poden concentrar mitjançant tècniques com l'evaporació o l'extracció en fase sòlida (SPE).

La filtració és essencial per eliminar les partícules que poden obstruir les columnes d'HPLC. Els mètodes de filtrat habituals inclouen:

Filtració per membrana:ÚsFiltres de 0,2 µm o 0,45 µmper eliminar partícules. Normalment s'utilitzen filtres de polietersulfona (PES) o niló.

Prefiltració:Per a mostres amb un alt contingut de partícules, la prefiltració a través d'un filtre de mida de porus més gran pot evitar l'obstrucció.


50 preguntes freqüents sobre els filtres de xeringues, assegureu-vos de consultar aquest article informatiu: El tema del "filtre de xeringa" 50 preguntes freqüents

Considereu estabilitzar la vostra mostra per evitar la degradació de l'analit.

Ajust de pH:Ajustar el pH pot ajudar a estabilitzar certs analits. Per exemple, els compostos àcids poden requerir acidificació per evitar la degradació.

Additius:L'addició d'estabilitzadors o conservants pot ajudar a mantenir la integritat de la mostra durant l'emmagatzematge i l'anàlisi.

És important seleccionar el dissolvent correcte per dissoldre la mostra i garantir la compatibilitat amb el vostre sistema HPLC. Tingueu en compte el següent:

Polaritat del dissolvent:Per aconseguir la dissolució completa, el dissolvent ha de coincidir amb la polaritat de l'analit.

Compatibilitat de la fase mòbil: Utilitzeu un dissolvent compatible amb la fase mòbil per minimitzar les possibles interferències.

7. Elaboració de Normes

La preparació dels estàndards de calibratge és essencial per quantificar un analit en una mostra. Això inclou:

Preparació de la corba de calibratge:Prepareu una sèrie de concentracions conegudes de l'analit per establir una corba de calibratge per a la quantificació.

Utilitzeu el mateix dissolvent:Per mantenir la consistència, prepareu sempre els vostres estàndards amb el mateix dissolvent i condicions que les mostres.

Seguiu els procediments operatius estàndard (SOP):Establir i complir els SOP per a la preparació de mostres per garantir la consistència i la reproductibilitat.

Utilitzeu reactius i dissolvents d'alta qualitat:Utilitzeu sempre dissolvents de qualitat HPLC i reactius d'alta puresa per minimitzar la contaminació.

Mantingueu net el vostre espai de treball:Mantingueu la vostra zona de preparació de mostres neta i organitzada per reduir el risc de contaminació.

Documenteu-ho tot:Manteniu registres detallats dels vostres procediments de preparació de mostres, incloses les desviacions dels protocols estàndard.

Mètodes de validació:Valideu els mètodes de preparació de mostres periòdicament per assegurar-vos que proporcionen resultats fiables i reproduïbles.

Mala forma del pic:Si els pics són amples o amb cua, això pot indicar una dissolució incompleta o la presència de partícules. Assegureu-vos que la vostra mostra estigui ben barrejada i filtrada.

Cims fantasmes:Els pics fantasma poden ser causats per impureses en el dissolvent o la mostra, utilitzeu dissolvents d'alta puresa i assegureu-vos que tots els articles de vidre i equips estiguin nets.

Sensibilitat baixa:Si la sensibilitat és baixa, considereu optimitzar el vostre mètode d'extracció o augmentar la concentració de l'analit.

Obstrucció de la columna:L'obstrucció freqüent pot indicar que la mostra conté massa partícules o que no s'està filtrant adequadament. Torneu a avaluar el vostre procés de filtració i considereu la prefiltració.

Resultats inconsistents:La variació dels resultats pot derivar-se d'una preparació inconsistent de la mostra. Estandarditzar tots els procediments i assegurar-se que el personal implicat en la preparació de mostres està degudament format.

A mesura que augmenten les demandes analítiques, els laboratoris estan adoptant tècniques de preparació de mostres més avançades per millorar l'eficiència i la precisió:

SPE és una tècnica àmpliament utilitzada que permet l'extracció selectiva d'anàlits de matrius complexes. Implica fer passar una mostra líquida a través d'un material adsorbent sòlid que reté l'analit objectiu alhora que permet que les impureses passin.

LLE és una tècnica que separa els analits en funció de la seva solubilitat en dos líquids immiscibles. Aquest mètode és eficaç per separar compostos amb diferents polaritats i s'utilitza sovint en anàlisis mediambientals i farmacèutiques.

QuEChERS és un mètode popular per preparar mostres d'aliments i medi ambient que combina els passos d'extracció i neteja en un sol procés, fent-lo eficient i rendible.

El rendiment i la reproductibilitat es poden millorar significativament mitjançant sistemes automatitzats de preparació de mostres, que poden realitzar tasques com la dilució, la filtració i l'SPE amb una intervenció humana mínima, reduint així el risc d'errors.


Si voleu saber més sobre la preparació de mostres per HPLC, consulteu aquest article: Solucions de preparació de mostres per HPLC per obtenir els millors resultats

La preparació de mostres per HPLC és un pas crític que pot afectar significativament la precisió i la fiabilitat dels resultats analítics. Seguint les millors pràctiques, utilitzant tècniques adequades i abordant problemes comuns, els laboratoris poden optimitzar el procés de preparació de mostres adoptant tècniques i tecnologies avançades a mesura que evolucionen les necessitats analítiques. L'automatització millorarà encara més l'eficiència i l'eficàcia de les anàlisis HPLC. La preparació adequada de la mostra no només millora la qualitat dels resultats, sinó que també protegeix el sistema HPLC, assegurant la fiabilitat i el rendiment a llarg termini.