Vše, co potřebujete vědět o přípravě vzorku HPLC

Příprava vzorku je kritickým krokem v analýze HPLC z mnoha důvodů.

Minimalizovat interference:Vzorky často obsahují nečistoty a komponenty matrice, které mohou narušit detekci cílových analytů. Efektivní techniky přípravy vzorku mohou pomoci odstranit tyto nežádoucí látky a zlepšit analytickou přesnost.

Zlepšit zotavení analytu:Správná příprava zlepšuje zotavení analytu a zajišťuje, že výsledky odrážejí skutečnou koncentraci původního vzorku. To je zvláště důležité pro analýzu stopování, kde jsou analyty přítomny při nízkých koncentracích.

Vylepšený tvar píku:Správné připravené vzorky pomáhají tvořit symetrické a dobře definované píky v chromatogramu. To je nezbytné pro přesnou kvantifikaci. Nesprávná příprava vzorku může vést k špičkovému ocasu a rozšíření, což komplikuje interpretaci dat.

Chraňte svůj systém HPLC:Kontaminanty ve vašem vzorku mohou poškodit sloupce a další komponenty ve vašem systému HPLC, což vede ke zvýšeným nákladům na údržbu a prostoje. Správná příprava vzorku snižuje riziko ucpávání a opotřebení systému.

Prvním krokem v přípravě vzorku je správné shromažďování vzorku. To zahrnuje:

Použijte čisté kontejnery:Chcete -li se zabránit kontaminaci, vždy používejte čisté inertní nádoby. Doporučuje se sklo nebo vysoce kvalitní plastové nádoby.

Vyvarujte se kontaminace:Použijte rukavice a čisté nástroje, abyste zabránili kontaminaci z mazu a jiných zdrojů.

Správné označování:Je zřejmé, že označují vzorky, aby se zabránilo smíchání a zajistila sledovatelnost.

Homogenizace vzorku zajišťuje homogenitu, což je důležité pro reprodukovatelné výsledky. Homogenizační techniky zahrnují:

Mechanická homogenizace: Míchání pevných nebo polotuhých vzorků pomocí míchadla nebo homogenizátoru.

Ultrazvuková homogenizace:Aplikace ultrazvuku na rozptylování částic ve vzorku kapaliny.

V závislosti na očekávané koncentraci analytů může být nutné zředit nebo koncentrovat vzorky. Toho lze dosáhnout:

Ředění:Zřeďte vzorek na požadovanou koncentraci pomocí stejného rozpouštědla jako mobilní fáze.

Koncentrace:Analyty mohou být koncentrovány pomocí technik, jako je odpařování nebo extrakce pevné fáze (SPE).

Filtrace je nezbytná pro odstranění částic, které mohou ucpat sloupce HPLC. Mezi běžné metody filtrování patří ：

Filtrace membrány:Použití0,2 um nebo 0,45 um filtryodstranit částice. Obvykle se používají polyethersulfone (PES) nebo nylonové filtry.

Prefiltrace:U vzorků s vysokým obsahem částic může prefiltrace prostřednictvím filtru velikosti pórů zabránit ucpávání.


50 často kladených otázek o filtrech stříkačky, nezapomeňte se podívat na tento informativní článek: Téma „filtru stříkačky“ 50 často kladených otázek

Zvažte stabilizaci vzorku, abyste zabránili degradaci analytu.

Nastavení pH:Nastavení pH může pomoci stabilizovat určité analyty. Například kyselé sloučeniny mohou vyžadovat okyselení, aby se zabránilo degradaci.

Přísady:Přidání stabilizátorů nebo konzervačních látek může pomoci udržet integritu vzorku během skladování a analýzy.

Je důležité vybrat správné rozpouštědlo pro zrušení vzorku a zajistit kompatibilitu se systémem HPLC. Zvažte následující:

Polarita rozpouštědla:Aby se dosáhlo úplného rozpuštění, musí rozpouštědlo odpovídat polaritě analytu.

Kompatibilita mobilní fáze: Použijte rozpouštědlo, které je kompatibilní s mobilní fází, abyste minimalizovali potenciální interference.

7. Příprava standardů

Příprava kalibračních standardů je nezbytná pro kvantifikaci analytu ve vzorku. To zahrnuje:

Příprava kalibrační křivky:Připravte řadu známých koncentrací analytu za účelem vytvoření kalibrační křivky pro kvantifikaci.

Použijte stejné rozpouštědlo:Chcete -li udržovat konzistenci, vždy připravujte své standardy pomocí stejného rozpouštědla a podmínek jako vaše vzorky.

Sledujte standardní operační postupy (SOP):Stanovte a dodržujte SOP pro přípravu vzorku, aby se zajistila konzistence a reprodukovatelnost.

Používejte vysoce kvalitní činidla a rozpouštědla:K minimalizaci kontaminace vždy používejte rozpouštědla HPLC a činidla s vysokou čistotou.

Udržujte svůj pracovní prostor čistý:Udržujte oblast přípravy vzorku v čistotě a organizované, aby se snížilo riziko kontaminace.

Zdokumentujte vše:Podrobné záznamy o postupech přípravy vzorků, včetně jakýchkoli odchylek od standardních protokolů.

Ověření metod:Pravidelně ověřte metody přípravy vzorku, abyste zajistili, že poskytují spolehlivé a reprodukovatelné výsledky.

Špatný tvar píku:Pokud jsou píky široké nebo ocasy, může to znamenat neúplné rozpuštění nebo přítomnost částic. Zajistěte, aby byl vzorek důkladně smíšený a filtrován.

Duchové vrcholy:Vrcholy duchů mohou být způsobeny nečistotami v rozpouštědle nebo vzorku, používat vysoce čisté rozpouštědla a zajistit, aby veškeré sklo a vybavení byly čisté.

Nízká citlivost:Pokud je citlivost nízká, zvažte optimalizaci metody extrakce nebo zvýšení koncentrace analytu.

Ucpávání sloupců:Časté ucpávání může naznačovat, že váš vzorek obsahuje příliš mnoho částic nebo není přiměřeně filtrován. Přehodnoťte svůj filtrační proces a zvažte předfiltraci.

Nekonzistentní výsledky:Variace ve výsledcích mohou pramenit z nekonzistentní přípravy vzorku. Standardizovat všechny postupy a zajistit, aby byl personál zapojený do přípravy vzorku řádně vyškolen.

Jak se zvyšují analytické požadavky, laboratoře přijímají pokročilejší techniky přípravy vzorků ke zlepšení účinnosti a přesnosti:

SPE je široce používaná technika, která umožňuje selektivní extrakci analytů z komplexních matic. Zahrnuje průchod vzoru kapaliny pomocí pevného adsorbentového materiálu, který si zachovává cílový analyt a zároveň umožňuje projít nečistotami.

LLE je technika, která odděluje analyty založené na jejich rozpustnosti ve dvou nemísitelných kapalinách. Tato metoda je účinná při oddělování sloučenin s různými polaritami a často se používá při environmentální a farmaceutické analýze.

Quechers je populární metoda přípravy vzorků potravin a životního prostředí, které kombinují kroky extrakce a vyčištění do jednoho procesu, což je efektivní a nákladově efektivní.

Propustnost a reprodukovatelnost lze výrazně zlepšit automatizovanými systémy přípravy vzorků, které mohou provádět úkoly, jako je zředění, filtrace a SPE s minimálním zásahem člověka, čímž se snižuje riziko chyb.


Chcete se dozvědět více o přípravě vzorku HPLC, zkontrolujte tento článek: Řešení přípravy vzorku HPLC pro nejlepší výsledky

Příprava vzorku HPLC je kritickým krokem, který může významně ovlivnit přesnost a spolehlivost analytických výsledků. Dodržováním osvědčených postupů, používáním vhodných technik a řešením běžných problémů mohou laboratoře optimalizovat proces přípravy vzorku přijetím pokročilých technik a technologií, jak se vyvíjí analytické potřeby. Automatizace dále zlepší účinnost a účinnost analýz HPLC. Správná příprava vzorku nejen zlepšuje kvalitu výsledků, ale také chrání systém HPLC, což zajišťuje dlouhodobou spolehlivost a výkon.