Mae cromatograffeg hylif perfformiad uchel (HPLC) a sbectrometreg màs cromatograffeg hylif (LCMS) yn ddwy dechneg ddadansoddol bwerus a ddefnyddir mewn amrywiaeth o feysydd, gan gynnwys fferyllol, gwyddorau amgylcheddol, a gwyddorau bywyd. Er bod y ddau ddull yn cynnwys gwahanu a dadansoddi cyfansoddion, mae eu hegwyddorion, eu swyddogaethau a'u cymwysiadau yn wahanol iawn. Bydd y blogbost hwn yn cymharu HPLC a LCMS, gan ganolbwyntio ar eu gwahaniaethau allweddol a manteision pob techneg.

Egwyddor gweithredu

Hplc

Mae HPLC yn dechneg cromatograffig sy'n gwahanu cyfansoddion yn seiliedig ar eu rhyngweithio â'r cyfnodau llonydd a symudol. Yn HPLC, mae cyfnod symudol hylif yn cael ei bwmpio trwy golofn wedi'i llenwi â chyfnod llonydd, sydd fel arfer yn cynnwys gronynnau bach o silica neu bolymerau. Pan gyflwynir cymysgedd sampl i'r system, mae'r cydrannau'n cael eu gwahanu yn seiliedig ar eu affinedd ar gyfer y cyfnod llonydd. Cyfansoddion sy'n rhyngweithio'n gryfach â'r cyfnod llonydd yn elute yn arafach, tra bod cyfansoddion sy'n rhyngweithio'n llai cryf yn elute yn gyflymach. Yna canfyddir y cyfansoddion sydd wedi'u gwahanu gan ddefnyddio amrywiaeth o synwyryddion, megis UV-VIs, fflwroleuedd, neu synwyryddion mynegai plygiannol.

Am wybod mwy am gymwysiadau ffiolau cromatograffeg, gwiriwch yr erthygl hon:15 Cymhwyso ffiolau cromatograffeg mewn gwahanol feysydd

Lcms

Mae LCMS yn cyfuno galluoedd gwahanu HPLC â galluoedd dadansoddi torfol sbectrometreg màs. Yn LCMS, mae samplau yn cael eu gwahanu gyntaf gan ddefnyddio HPLC, yn yr un modd ag yn HPLC confensiynol. Fodd bynnag, yn lle cael eu canfod gan synhwyrydd confensiynol, mae'r cyfansoddion echdynnu yn cael eu cyflwyno i sbectromedr màs. Mae'r sbectromedr màs yn ïoneiddio'r cyfansoddion ac yn mesur eu cymhareb màs-i-wefr, gan ddarparu gwybodaeth fanwl am bwysau a strwythur moleciwlaidd y dadansoddwr. Mae'r cyfuniad hwn o wahanu a sbectrometreg màs yn darparu mwy o sensitifrwydd a phenodoldeb na HPLC yn unig.

Mecanwaith Gwahanu

HPLC:Mae HPLC yn defnyddio gwasgedd uchel i wthio cyfnod symudol hylif trwy golofn wedi'i bacio sy'n cynnwys cyfnod llonydd. Mae cyfansoddion yn cael eu gwahanu ar sail eu rhyngweithiadau gwahaniaethol â'r cyfnod llonydd, gan arwain at wahaniadau manwl gywir ac effeithlon.

LCMS:Mae LCMS yn cyfuno galluoedd gwahanu corfforol HPLC â galluoedd sbectrometreg màs sbectrometreg màs (MS). Mae'r gydran cromatograffeg hylif yn gwahanu'r cyfansoddion, tra bod y sbectromedr màs yn mesur cymhareb màs-i-wefr y rhywogaeth ïoneiddiedig.

Sensitifrwydd a detholusrwydd

HPLC:Mae gan HPLC sensitifrwydd a detholusrwydd da, yn enwedig o'u cyfuno â synwyryddion datblygedig fel UV-VIS, fflwroleuedd, neu synwyryddion arae deuod. Fodd bynnag, efallai na fydd HPLC yn unig yn darparu penodoldeb digonol ar gyfer samplau cymhleth.

LCMS:Mae gan LCMS sensitifrwydd a detholusrwydd uwch o'i gymharu â HPLC. Gall sbectromedrau màs nodi a meintioli cyfansoddion yn gywir yn seiliedig ar eu cymarebau màs-i-wefr unigryw, hyd yn oed mewn matricsau cymhleth. Mae hyn yn gwneud LCMs yn arbennig o ddefnyddiol ar gyfer dadansoddi cyfansoddion olrhain a chadarnhau hunaniaeth sylweddau anhysbys.

Paratoi sampl

HPLC:Mae paratoi sampl ar gyfer HPLC fel arfer yn cynnwys gwanhau, hidlo, neu dechnegau echdynnu syml. Nid oes angen anweddu samplau, felly mae HPLC yn addas ar gyfer ystod eang o gyfansoddion, gan gynnwys sylweddau pegynol ac anweddol.

LCMS:Mae paratoi sampl ar gyfer LCMs yn debyg i'r un ar gyfer HPLC, ond efallai y bydd angen camau ychwanegol i sicrhau cydnawsedd â'r sbectromedr màs. Er enghraifft, efallai y bydd angen byfferau neu ychwanegion cyfnewidiol i wella ïoneiddio ac atal atal ïon.

Ngheisiadau

HPLC:Defnyddir HPLC yn helaeth ar gyfer dadansoddi fferyllol, bwydydd a samplau amgylcheddol. Mae'n arbennig o effeithiol ar gyfer gwahanu a meintioli cyfansoddion mewn cymysgeddau cymhleth, megis amhureddau cyffuriau, ychwanegion bwyd, a gweddillion plaladdwyr.

LCMS:Mae gan LCMS ystod eang o gymwysiadau, gan gynnwys:

Dadansoddiad Fferyllol: Fe'i defnyddir wrth ddarganfod cyffuriau, datblygu a rheoli ansawdd.

Proteomeg a Metaboledd: Fe'i defnyddir i nodi a meintioli proteinau a metabolion mewn samplau biolegol.

Dadansoddiad Amgylcheddol: Fe'i defnyddir i ganfod halogion olrhain mewn samplau dŵr, pridd ac aer.

Rhyfedd am rôl ffiolau HPLC ardystiedig wrth sicrhau dadansoddiad sampl cywir? Darllenwch yr erthygl hon: Pwysigrwydd ffiolau HPLC ardystiedig ar gyfer dadansoddi sampl yn gywir

Nghasgliad

Mae HPLC a LCMs ill dau yn dechnegau dadansoddol pwerus gyda'u cryfderau a'u cyfyngiadau eu hunain. Mae'r dewis rhwng y ddau yn dibynnu ar ofynion penodol y dadansoddiad, megis sensitifrwydd, detholusrwydd, cymhlethdod sampl, a'r adnoddau sydd ar gael.

Mae HPLC yn ddewis da ar gyfer dadansoddiad arferol o gyfansoddion hysbys mewn matricsau cymharol syml, lle mae cost a rhwyddineb eu defnyddio yn ffactorau pwysig. LCMS, ar y llaw arall, yw'r dechneg a ffefrir ar gyfer dadansoddi samplau cymhleth, nodi cyfansoddion anhysbys, a chyflawni canfod lefel uwch-olrhain.

Wrth i dechnoleg barhau i symud ymlaen, bydd integreiddio HPLC a LCMs yn chwarae rhan gynyddol bwysig wrth ddiwallu anghenion esblygol cemeg ddadansoddol a sicrhau canlyniadau o ansawdd uchel ar draws cymwysiadau amrywiol.

Blaenorol:

Y canllaw eithaf i hidlwyr chwistrell 0.45 micron i chi

Nesaf:

Popeth y mae angen i chi ei wybod am baratoi sampl GC headspace