Einige Proben können nach der Vorbehandlung immer noch nicht direkt injiziert werden. Eine Derivatisierung ist erforderlich, um Verbindungen ohne UV-Absorption oder Fluoreszenz durch UV- oder Fluoreszenzdetektoren nachweisbar zu machen.

Verbessert die Empfindlichkeit
Verbessert die Trennung (Qualitätsänderung)

Mögliche Probleme sind Probenverlust, Kontamination, unvollständige Reaktionen oder mehrere Nebenprodukte, die die Genauigkeit beeinträchtigen oder zu Fehlern führen können.

Probenfiltration

LC-Proben müssen gleichmäßig und partikelfrei sein; Partikel können den Injektor beschädigen oder die Säule blockieren. Zu den Schritten gehören:

Schütteln Sie die Probe vor der Injektion und prüfen Sie sie auf Partikel, Trübungen oder Emulsionen
Wenn Partikel beobachtet werden, filtern Sie die Probe mit einer Membran, die Partikel ≥0,15 μm zurückhalten kann

Mögliche Probleme: Probenverunreinigung, Adsorption, die die Komponentenkonzentration verringert, und Lösungsmittelverdunstung, die zu Fehlern führt.

Extraktionsmethoden

Durch die Extraktion werden Analyten von Co-Lösungsmitteln getrennt oder störende Substanzen (z. B. Proteine) entfernt. Organische Lösungsmittel sollten wenig toxisch, flüchtig und wenig Verunreinigungen enthalten und die Probe gut lösen.

Gängige Lösungsmittel: Diethylether, Ethylacetat, Dichlormethan, Chloroform, Benzol oder Mischungen.

Nach der Extraktion können Proben direkt injiziert oder konzentriert werden, um die Konzentration und Empfindlichkeit des Analyten zu erhöhen.

Extraktion wasserlöslicher Proben

Saure Komponenten und Salze: Verunreinigungen mit organischem Lösungsmittel extrahieren, auf sauer einstellen, dann extrahieren oder injizieren; oder unter N₂ trocknen und vor der Injektion in einem geeigneten Lösungsmittel auflösen.
Basische Komponenten und Salze: Verunreinigungen mit organischem Lösungsmittel extrahieren, basisch einstellen, dann extrahieren oder injizieren; oder unter N₂ trocknen und vor der Injektion in einem geeigneten Lösungsmittel auflösen.
Neutrale Komponenten: Verunreinigungen mit organischem Lösungsmittel extrahieren, dann direkt durch Umkehrphasenchromatographie analysieren.

Extraktion fettlöslicher Proben

Mit organischem Lösungsmittel extrahieren oder direkt injizieren; oder unter N₂ trocknen und vor der Injektion in einem geeigneten Lösungsmittel auflösen.

Kontaminationsquellen

Mögliche Kontaminationsquellen in der Analyse:

Kontaminationstyp	Quelle	Präventionsmaßnahmen
Umweltfreundlich	Schädliche Gase, Staub, Aerosole	Halten Sie den Instrumentenraum isoliert und sauber. Klimaanlage installieren; Kontrollfeuchtigkeit <70 %; verhindern Feuchtigkeit, Korrosion und Vibrationen
Container	Laborgeräte aus Glas, Keramik, Quarz, Kunststoff	Wählen Sie für jeden Probentyp geeignete Behälter aus. gründlich reinigen
Reagenzien	Reagenzien, die nicht für die Chromatographie geeignet sind	Verwenden Sie Reagenzien in Chromatographiequalität, hoher Reinheit oder Analysequalität

Vorbereitung der Standardlösung

Bereiten Sie zuerst die interne Standardlösung vor; Verwenden Sie in Standards und Proben dieselbe Charge, um Fehler zu reduzieren
Die Substanzen müssen chromatographisch geeignet und stabil sein
Lagern Sie Standardlösungen in braunen Flaschen bei niedriger Temperatur
Für Vitamine braune Messkolben verwenden oder vor Licht schützen

Häufige Probleme bei der Probenvorbehandlung und Lösungen

Problem	Ursache	Lösung
Nicht zusammenhängende Peaks im Chromatogramm	Filterverschmutzung	Filter in Probenlösungsmittel einweichen und Testinjektion durchführen Filtertyp ändern Verwenden Sie alternative Reinigungstechniken
Geringe Spitzenreaktion (insbesondere bei Proben mit niedriger Konzentration)	Adsorption an der Filteroberfläche	Filtertyp ändern Verarbeiten Sie alle Proben unter den gleichen Bedingungen Verwenden Sie alternative Reinigungstechniken
Geringe Erholung	Unvollständige Extraktion	Extraktionszeit verlängern, heißes Lösungsmittel verwenden Reinigungsmethode anpassen
Verbreiterte Peaks, verkürzte Säulenlebensdauer	Probeninterferenz und Kontamination	Reinigungsmethode verbessern
Schlechte Präzision	Unvollständige Genesung	Derivatisierung, Trennung, Extraktion oder andere Bedingungen optimieren oder ersetzen Nutzen Sie die automatisierte Handhabung, um die Präzision zu verbessern

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Extrem hohe\/Auswirkungen niedriger Temperatur und Lichteinwirkung auf die Probenstabilität: Theorie und Methodik

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