Elekti la ĝustan bufron por via HPLC -movebla fazo estas kritika por atingi optimuman apartigon kaj analizon de via Specimenoj. Buffers helpas konservi stabilan pH, kiu estas esenca por kontroli la jonigan staton de viaj analitoj, tiel influante ilian retenan tempon kaj pintan formon. Malsupre estas detala superrigardo pri kiel elekti la plej bonan bufron por via HPLC -aplikaĵo.

Ĉu vi scias pri HPLC -ekzempla preparo? Alklaku ĉi tiun artikolon por lerni pli: "Ĉio, kion vi bezonas scii pri HPLC -Specimenpreparo"

Graveco de bufra elekto

Bufro estas solvo, kies pH ne ŝanĝiĝas post aldono de malgranda kvanto da acido aŭ bazo. Surbaze de ilia konsisto, bufroj povas esti klasifikitaj kiel acidaj aŭ bazaj. La efikeco de bufro estas determinita de ĝia PKA, kiu ideale devas esti ene de ± 1 pH -unuo de la dezirata movebla fazo -pH por optimuma bufra kapablo.

Ŝlosilaj faktoroj por konsideri

1.ph Range: La pH de la movebla fazo devas esti almenaŭ 2 pH -unuoj for de la PKA de la analito. Ĉi tio helpas subpremi jonigon de acidaj aŭ bazaj analiziloj, maksimumigante ilian retenadon sur la kolumno. Ekzemple, se la analito estas malforta acido kun PKA de 4,5, uzante moveblan fazon kun pH ĉirkaŭ 2.0 konservus ĝin en ne-ionigita stato, plibonigante retenadon.

2.Buffer -Tipo: Oftaj bufroj uzataj en HPLC inkluzivas:

Fosfataj bufroj: Efika en la pH -gamo de 2,0 ĝis 8,0, fosfataj bufroj estas vaste uzataj pro sia stabileco kaj kongruo kun multaj analizoj. Ili aparte taŭgas por LC-UV-aplikoj.

Acetataj bufroj: Ĉi tiuj estas ankaŭ popularaj por LC-UV-provoj kaj uzeblas en similaj pH-gamoj kiel fosfataj bufroj.

Volatilaj bufroj: Por LC-MS-aplikoj, volatilaj bufroj kiel formato, acetato kaj amonia bicarbonato estas preferataj ĉar ili povas esti facile forigitaj dum la masa spektrometrio.

3.Buffer-koncentriĝo: Tipa komenca koncentriĝo por bufroj en HPLC estas inter 25-50 mM. Pli altaj koncentriĝoj povas plibonigi pintan formon kaj efikecon, sed ankaŭ povas konduki al precipitaĵo kiam miksite kun organikaj solviloj. Estas konvene konservi la bufran koncentriĝon sub 25 mM por eviti komplikaĵojn.

4.Kemia pureco: Ĉiam uzu alt-purecajn kromatografiajn gradajn bufrojn por malebligi poluadon kaj certigi fidindajn rezultojn. Malpuraĵoj povas konduki al neatenditaj interagoj kaj varieco en retenaj tempoj.

Temperaturaj efikoj: La temperaturo povas influi la pH de bufraj solvoj. Gravas prepari kaj stoki bufrojn je konsekvenca temperaturo por konservi sian efikecon.

Volas scii 50 respondojn pri HPLC -flapoj, bonvolu kontroli ĉi tiun artikolon: 50 plej ofte demandoj pri HPLC -flapoj

Praktikaj konsiletoj por bufra preparado

Prepara Metodo: Buffers povas esti preparitaj miksante ekvimolarajn kvantojn de iliaj acidaj kaj bazaj komponentoj aŭ per titolado de baza solvo kun acido. Evitu ĝustigi la pH post aldono de organikaj solviloj, ĉar ĉi tio povas konduki al malkonsekvencaj rezultoj.

Freŝaj solvoj: Preparu freŝajn bufrajn solvojn regule por minimumigi mikrobian kreskon kaj degeneron de komponentoj, kiuj povas influi kromatografian agadon.

Eviti korodon: Iuj bufroj, kiel citrato, povas korodigi neoksideblajn ŝtalajn komponentojn de HPLC -sistemoj. Certigu ĝisfundan fluadon de la sistemo post uzado de tiaj bufroj por malebligi damaĝon.

Konkludo

Elekti la ĝustan bufron por via HPLC -movebla fazo estas kritika por atingi fidindajn kaj reprodukteblajn rezultojn. Pripensu pH, bufran tipon, koncentriĝon kaj purecon kiam elektas. Sekvante ĉi tiujn gvidliniojn, vi povas optimumigi vian HPLC -metodon por efike disigi kaj analizi viajn specimenojn.

Volas scii la prezon de HPLC -flapoj, bonvolu kontroli ĉi tiun artikolon: HPLC -Flataj Prezoj: 50 Plej Oftaj Demandoj

Antaŭa:

Kiel taŭge uzi COD -testajn tubojn por testado de akvokvalito?

Sekva:

Kiel eviti filtrilon en siringaj filtriloj