کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) یک روش تحلیلی گسترده است که نقش مهمی در چندین زمینه از جمله داروهای دارویی ، علوم محیطی و ایمنی مواد غذایی دارد. با این حال ، موفقیت تجزیه و تحلیل HPLC تا حد زیادی به کیفیت آماده سازی نمونه بستگی دارد. آماده سازی نمونه مناسب ، اندازه گیری دقیق آنالیت های هدف را تضمین می کند و تداخل ها را به حداقل می رساند. این راهنمای جامع همه چیزهایی را که باید در مورد تهیه نمونه HPLC بدانید ، از جمله اهمیت ، تکنیک ها ، بهترین شیوه ها و نکات عیب یابی را در بر می گیرد.
می خواهید در مورد کاربردهای ویال های کروماتوگرافی اطلاعات بیشتری کسب کنید ، لطفاً این مقاله را بررسی کنید: 15 کاربرد ویال کروماتوگرافی در زمینه های مختلف
اهمیت تهیه نمونه در HPLC
تهیه نمونه به دلایل مختلف یک گام مهم در تجزیه و تحلیل HPLC است.
تداخل ها را به حداقل برسانید:نمونه ها اغلب حاوی ناخالصی ها و اجزای ماتریس هستند که می توانند در تشخیص آنالیت های هدف تداخل داشته باشند. تکنیک های آماده سازی نمونه موثر می تواند به حذف این مواد ناخواسته و بهبود دقت تحلیلی کمک کند.
بهبود بازیابی آنالیت:آماده سازی مناسب باعث بهبودی آنالیت می شود و تضمین می کند که نتایج منعکس کننده غلظت واقعی نمونه اصلی است. این امر به ویژه برای تجزیه و تحلیل ردیابی که در آن آنالیت ها در غلظت های پایین وجود دارند ، بسیار مهم است.
شکل اوج پیشرفته:نمونه های درست تهیه شده به شکل قله های متقارن و به خوبی تعریف شده در کروماتوگرام کمک می کنند. این برای اندازه گیری دقیق ضروری است. آماده سازی نمونه نادرست می تواند منجر به خیاطی و گسترش اوج شود ، که باعث تفسیر داده ها می شود.
از سیستم HPLC خود محافظت کنید:آلاینده های موجود در نمونه شما می توانند به ستون ها و سایر اجزای موجود در سیستم HPLC شما آسیب برساند و منجر به افزایش هزینه های نگهداری و خرابی شود. آماده سازی نمونه مناسب خطر گرفتگی سیستم و سایش را کاهش می دهد.
مراحل مهم در تهیه نمونه HPLC
1. مجموعه نمونه
اولین قدم در تهیه نمونه ، جمع آوری صحیح نمونه شماست. این شامل:
از ظروف تمیز استفاده کنید:همیشه از ظروف تمیز و بی اثر برای جلوگیری از آلودگی استفاده کنید. ظروف پلاستیکی شیشه ای یا با کیفیت بالا توصیه می شود.
از آلودگی خودداری کنید:برای جلوگیری از آلودگی از سبوم و منابع دیگر از دستکش و ابزارهای تمیز استفاده کنید.
برچسب زدن مناسب:برای جلوگیری از مخلوط کردن و اطمینان از ردیابی ، نمونه ها را به طور واضح برچسب گذاری کنید.
2. نمونه همگن
همگن سازی نمونه همگن را تضمین می کند ، که برای نتایج قابل تکرار مهم است. تکنیک های همگن سازی عبارتند از:
همگن سازی مکانیکی: مخلوط کردن نمونه های جامد یا نیمه جامد با استفاده از همزن یا هموژنیزر.
همگن سازی اولتراسونیک:استفاده از سونوگرافی برای پراکندگی ذرات در یک نمونه مایع.
3 رقیق یا غلظت
بسته به غلظت مورد انتظار آنالیت ها ، ممکن است نمونه ها رقیق یا متمرکز شوند. این می تواند توسط:
رقت:با استفاده از همان حلال فاز متحرک ، نمونه را به غلظت مورد نظر رقیق کنید.
غلظت:آنالیت ها را می توان با استفاده از تکنیک هایی مانند تبخیر یا استخراج فاز جامد (SPE) متمرکز کرد.
فیلتر
تصفیه برای از بین بردن ذرات که می تواند ستون های HPLC را مسدود کند ، ضروری است. روشهای فیلتر رایج شامل
تصفیه غشای:استفاده کردنفیلترهای 0.2 میکرومتر یا 0.45 میکرومتربرای از بین بردن ذرات به طور معمول از فیلترهای پلی اترسولفون (PES) یا نایلون استفاده می شود.
مقدمات:برای نمونه هایی با محتوای ذرات بالا ، پیش فیلتراسیون از طریق یک فیلتر اندازه منافذ بزرگتر می تواند از گرفتگی جلوگیری کند.
50 سؤال مکرر در مورد فیلترهای سرنگ ، حتماً این مقاله آموزنده را بررسی کنید: موضوع "فیلتر سرنگ" 50 سؤال که اغلب از آنها پرسیده می شود
5. ثبات نمونه
برای جلوگیری از تخریب آنالیت ، نمونه خود را تثبیت کنید.
تنظیم pH:تنظیم pH می تواند به تثبیت آنالیت های خاص کمک کند. به عنوان مثال ، ترکیبات اسیدی برای جلوگیری از تخریب ممکن است به اسیدی شدن نیاز داشته باشند.
مواد افزودنی:افزودن تثبیت کننده یا مواد نگهدارنده می تواند به حفظ یکپارچگی نمونه در حین ذخیره و تجزیه و تحلیل کمک کند.
6. انتخاب حلال
انتخاب حلال صحیح برای حل نمونه خود و اطمینان از سازگاری با سیستم HPLC مهم است. موارد زیر را در نظر بگیرید:
قطبیت حلال:برای دستیابی به انحلال کامل ، حلال باید با قطبیت آنالیت مطابقت داشته باشد.
سازگاری فاز متحرک: از حلال استفاده کنید که با فاز تلفن همراه سازگار باشد تا تداخل های احتمالی را به حداقل برساند.
7. تهیه استانداردها
تهیه استانداردهای کالیبراسیون برای تعیین کمیت آنالیت در یک نمونه ضروری است. این شامل:
تهیه منحنی کالیبراسیون:یک سری غلظت شناخته شده آنالیت را برای ایجاد منحنی کالیبراسیون برای تعیین کمیت تهیه کنید.
از همان حلال استفاده کنید:برای حفظ قوام ، همیشه استانداردهای خود را با استفاده از همان حلال و شرایط نمونه خود آماده کنید.
بهترین روشها برای تهیه نمونه HPLC
مراحل عملیاتی استاندارد (SOPS) را دنبال کنید:برای اطمینان از قوام و تکرارپذیری ، SOPS را برای تهیه نمونه ایجاد و رعایت کنید.
از معرفها و حلالها با کیفیت بالا استفاده کنید:همیشه از حلالهای درجه HPLC و معرفهای با خلوص بالا برای به حداقل رساندن آلودگی استفاده کنید.
فضای کاری خود را تمیز نگه دارید:برای کاهش خطر آلودگی ، منطقه آماده سازی نمونه خود را تمیز و سازمان یافته نگه دارید.
همه چیز را مستند کنید:سوابق مفصلی از روشهای آماده سازی نمونه خود ، از جمله هرگونه انحراف از پروتکل های استاندارد را نگه دارید.
اعتبار سنجی روش ها:برای اطمینان از ارائه نتایج قابل اعتماد و قابل تکرار ، به طور مرتب روشهای آماده سازی نمونه را تأیید کنید.
عیب یابی مشکلات آماده سازی نمونه مشترک
شکل قله ضعیف:اگر قله ها گسترده یا خیاطی باشند ، این ممکن است نشان دهنده انحلال ناقص یا وجود ذرات باشد. اطمینان حاصل کنید که نمونه شما کاملاً مخلوط و فیلتر شده است.
قله های شبح:قله های شبح ممکن است در اثر ناخالصی های موجود در حلال یا نمونه ایجاد شود ، از حلالهای با خلوص بالا استفاده کرده و اطمینان حاصل کنید که تمام ظروف و تجهیزات شیشه ای تمیز هستند.
حساسیت کم:اگر حساسیت کم است ، بهینه سازی روش استخراج یا افزایش غلظت آنالیت خود را در نظر بگیرید.
گرفتگی ستون:گرفتگی مکرر ممکن است نشان دهد که نمونه شما حاوی ذرات بیش از حد است یا به اندازه کافی فیلتر نمی شود. روند تصفیه خود را دوباره ارزیابی کرده و پیش فیلتراسیون را در نظر بگیرید.
نتایج متناقض:تغییر در نتایج می تواند ناشی از تهیه نمونه متناقض باشد. کلیه مراحل را استاندارد کنید و اطمینان حاصل کنید که پرسنل درگیر در تهیه نمونه به درستی آموزش دیده اند.
تکنیک های آماده سازی نمونه پیشرفته
با افزایش تقاضای تحلیلی ، آزمایشگاه ها تکنیک های پیشرفته تری برای آماده سازی نمونه را برای بهبود کارآیی و دقت اتخاذ می کنند:
1. استخراج فاز جامد (SPE)
SPE یک تکنیک گسترده است که امکان استخراج انتخابی آنالیت ها از ماتریس های پیچیده را فراهم می کند. این شامل عبور یک نمونه مایع از طریق یک ماده جاذب جامد است که آنالیت هدف را حفظ می کند در حالی که اجازه می دهد ناخالصی ها از آن عبور کنند.
2. استخراج مایع مایع (LLE)
LLE تکنیکی است که آنالیت ها را بر اساس حلالیت آنها در دو مایعات غیرقابل نفوذ از هم جدا می کند. این روش در جدا کردن ترکیبات با قطب های مختلف مؤثر است و اغلب در تجزیه و تحلیل محیطی و دارویی مورد استفاده قرار می گیرد.
3. Quechers (سریع ، ساده ، ارزان ، مؤثر ، ناهموار و ایمن)
Quechers یک روش محبوب برای تهیه نمونه های مواد غذایی و محیطی است که مراحل استخراج و پاکسازی را در یک فرآیند ترکیب می کند و آن را کارآمد و مقرون به صرفه می کند.
4. اتوماسیون
توان و تکرارپذیری می تواند توسط سیستم های آماده سازی نمونه خودکار به طور قابل توجهی بهبود یابد ، که می تواند کارهایی مانند رقیق ، تصفیه و SPE را با حداقل مداخله انسان انجام دهد و از این طریق خطر خطاها را کاهش می دهد.
می خواهید در مورد تهیه نمونه HPLC اطلاعات بیشتری کسب کنید ، لطفاً این مقاله را بررسی کنید: راه حل های آماده سازی نمونه HPLC برای بهترین نتیجه
پایان
آماده سازی نمونه HPLC یک گام مهم است که می تواند به میزان قابل توجهی بر صحت و قابلیت اطمینان نتایج تحلیلی تأثیر بگذارد. با پیروی از بهترین شیوه ها ، استفاده از تکنیک های مناسب و پرداختن به مشکلات متداول ، آزمایشگاه ها می توانند با اتخاذ تکنیک ها و فناوری های پیشرفته به عنوان نیازهای تحلیلی ، فرایند تهیه نمونه را بهینه کنند. اتوماسیون باعث بهبود کارایی و اثربخشی تجزیه و تحلیل HPLC می شود. آماده سازی نمونه مناسب نه تنها کیفیت نتایج را بهبود می بخشد بلکه از سیستم HPLC نیز محافظت می کند و از قابلیت اطمینان و عملکرد طولانی مدت اطمینان می دهد.
انگلیسی
چینی
