Znate li za papirnatu kromatografiju?

Papirna kromatografija je široko korištena analitička tehnika koja razdvaja i identificira smjese tvari na temelju njihovih različitih afiniteta za stacionarnu fazu (papir) i mobilne faze (otapalo). Posebno je koristan u kemiji i biokemiji za analizu malih količina tvari poput pigmenata, aminokiselina i drugih organskih spojeva.

Što je papirnata kromatografija?

Papirna kromatografija je vrsta tekuće kromatografije u kojoj je stacionarna faza list filterskog papira, a mobilna faza je otapalo koje teče kroz filtrirani papir. Tehnika se oslanja na diferencijalno podjelu spojeva između stacionarne faze (filter papir) i mobilne faze (otapalo). Dok otapalo pomiče filtrirani papir kapilarnim djelovanjem, on nosi komponente smjese različitim brzinama na temelju njihovog afiniteta prema dvije faze.

Osnovni principi iza papirnate kromatografije mogu se razumjeti kroz dva glavna koncepta: particijska kromatografija i adsorpcijska kromatografija.

Particijska kromatografija: U ovoj se vrsti tvari raspoređuju između dvije tekuće faze. Stacionarna faza sastoji se od vode u porama filtriranog papira, dok je mobilna faza otapalo koje se kreće kroz ove pore. Razdvajanje se događa zato što različiti spojevi imaju različite afinitete za stacionarne i mobilne faze.

Adsorpcijska kromatografija: Ovdje čvrsta površina rada djeluje kao stacionarna faza, a tekuće otapalo djeluje kao mobilna faza. Komponente u smjesi odvojene su na temelju njihove adsorpcije do čvrste površine i njihove topljivosti u tekućoj fazi.

Komponente

Stacionarna faza: kromatografski rad, obično izrađen od celuloze. Omogućuje površinu komponentama da se pridržavaju.

Mobilna faza: otapalo ili mješavina otapala koja se kreće na papiru kapilarnim djelovanjem. Izbor otapala može značajno utjecati na proces razdvajanja.

Uzorak: Smjesa koja se može analizirati, obično uočena na određenom polazištu na papiru.

Želite znati više o HPLC Pripremi uzoraka, provjerite ovaj članak: HPLC rješenja za pripremu uzoraka za najbolje rezultate

Paper kromatografski postupak

Priprema: Odaberite visokokvalitetni filtrirani papir s određenom poroznošću kako biste osigurali učinkovito odvajanje. Nanesite mali dio smjese uzorka na početnu vrijednost rada kromatografije.

Priprema uzorka: Otopite smjesu uzorka u odgovarajućem otapalu kao dio mobilne faze.

Spot: Upotrijebite kapilarni ili mikropipet da biste ispustili malu količinu otopine uzorka na osnovnoj liniji na filtriranom papiru.

Razvoj: Umočite donji rub testnog papira u razvijanje otapala (mobilna faza). Kako se događa kapilarno djelovanje, otapalo se uzdiže kroz ispitni papir, noseći komponente uzorka sa sobom.

Odvajanje: Kako se otapalo kreće, različite će se komponente uzorka kretati različitim brzinama zbog svoje interakcije s stacionarnom fazom i različitom topljivošću u mobilnoj fazi.

Vizualizacija: Nakon što se prednji dio otapala pomaknuo dovoljna udaljenost, papir se uklanja iz otapala i ostavi da se osuši. Komponente se mogu vizualizirati pomoću UV svjetla, kemijskih reagensa ili promatranjem promjena u boji.

Analiza: Udaljenost koju je svaka komponenta propuštena u odnosu na frontu otapala mjeri se za izračunavanje vrijednosti RF (faktor zadržavanja) za identifikaciju.

Primjene papirne kromatografije

Papirna kromatografija ima širok raspon primjena u različitim poljima:

Biokemija: Analiza aminokiselina, šećera i drugih biomolekula.

Farmaceutski proizvodi: Identifikacija aktivnih sastojaka i nečistoća u formulacijama lijekova. Koristi se za identificiranje aktivnih spojeva i nečistoća u formulacijama lijekova tijekom razvoja i kontrole kvalitete.

Znanost o okolišu: Papirna kromatografija koristi se za otkrivanje onečišćenja u uzorcima vode i analizu onečišćenja u ekstraktima tla.

Prehrambena industrija: Tehnika pomaže u analizi aditiva, onečišćenja i obojenja u hrani kako bi se osigurala poštivanje sigurnosnih propisa.

Prednosti papirne kromatografije

Efektivnost troškova: Zahtijeva minimalnu opremu i materijale u usporedbi s drugim kromatografskim tehnikama kao što je HPLC (tekuća kromatografija visokih performansi). Jednostavnost: Proces je vrlo jednostavan i može se izvesti s osnovnim laboratorijskim alatima, tako da se može koristiti u obrazovne svrhe.

Za analizu potrebna je samo mala količina volumena uzorka: Za analizu je potrebna samo mala količina uzorka, što ga čini idealnim za dragocjene ili ograničene uzorke.

Svestranost: Može odvojiti širok raspon tvari na temelju kemijskih svojstava, uključujući polarne i nepolarne spojeve

Ograničenja papirnate kromatografije

Unatoč svojim prednostima, papirna kromatografija ima određena ograničenja:

Ograničeni kapacitet: općenito pogodno za male količine uzorka.

Rezolucija: Rezolucija možda nije tako visoka kao ona postignuta naprednijim tehnikama poput HPLC ili plinske kromatografije (GC).

Vrijeme: zbog sporije stope migracije, postupak može potrajati duže u usporedbi s drugim kromatografskim metodama.

Ograničena kvantitativna analiza: Iako se kvalitativni rezultati mogu lako dobiti, za kvantificiranje koncentracija mogu biti potrebne dodatne metode kalibracije.

Papirna kromatografija ostaje vrijedna tehnika razdvajanja i analize smjesa u različitim znanstvenim poljima. Njegova jednostavnost, isplativost i sposobnost davanja intuitivnih rezultata čine ga ključnim alatom za kemičare i istraživače. Unatoč svojim ograničenjima u usporedbi s naprednijim kromatografskim tehnikama, još uvijek se široko koristi u obrazovne svrhe i preliminarne analize u laboratorijima.

Želite znati 50 odgovora o HPLC bočicama, provjerite ovaj članak: 50 najčešće postavljana pitanja o HPLC bočicama