A HPLC mobilfázisának megfelelő puffer kiválasztása kritikus fontosságú az optimális elválasztás és elemzés elérése érdekében minták- A pufferek elősegítik a stabil pH fenntartását, amely elengedhetetlen az analitok ionizációs állapotának szabályozásához, ezáltal befolyásolva a retenciós idejüket és a csúcs alakját. Az alábbiakban egy részletes áttekintést találunk arról, hogyan lehet kiválasztani a HPLC alkalmazás legjobb pufferjét.

Tudsz a HPLC minta előkészítéséről? Kattintson erre a cikkre, ha többet megtudhat: "Minden, amit tudnod kell a HPLC minta előkészítéséről"

A puffer kiválasztásának fontossága

A puffer olyan megoldás, amelynek pH -ja nem változik, ha kis mennyiségű sav vagy bázis hozzáadása után. Összetételük alapján a puffereket savasnak vagy bázisnak lehet besorolni. A puffer hatékonyságát a PKA határozza meg, amelynek ideális esetben a kívánt mobil fázis pH -jának ± 1 pH -egységén belül kell lennie az optimális pufferkapacitás érdekében.

A figyelembe veendő kulcsfontosságú tényezők

1.PH tartomány: A mobil fázis pH -jának legalább 2 pH -egységnek kell lennie az analit PKA -tól. Ez elősegíti a savas vagy alapvető analitok ionizációjának elnyomását, maximalizálva azok retencióját az oszlopon. Például, ha az analit egy gyenge sav, 4,5 PKA-val, akkor a 2,0 pH-val pH-val való mobil fázis használata nem ionizált állapotban tartja, fokozva a visszatartást.

2.Buffer típus: A HPLC -ben használt közönséges pufferek a következőket tartalmazzák:

Foszfátpufferek: Hatékony a 2,0–8,0 pH -tartományban, a foszfátpuffereket széles körben használják stabilitásuk és kompatibilitásuk miatt, sok analittel. Különösen alkalmasak az LC-UV alkalmazásokra.

Acetát-pufferek: Ezek az LC-UV vizsgálatokban is népszerűek, és hasonló pH-tartományokban használhatók, mint a foszfátpufferek.

Illlatív pufferek: Az LC-MS alkalmazásokhoz olyan illékony pufferek, mint a formiát, acetát és az ammónium-hidrogén-karbonát előnyben részesülnek, mert a tömegspektrometriás folyamat során könnyen eltávolíthatók.

3.Buffer koncentráció: A pufferek tipikus kiindulási koncentrációja a HPLC-ben 25-50 mm. A magasabb koncentrációk javíthatják a csúcs alakját és hatékonyságát, de csapadékhoz is vezethetnek, ha szerves oldószerekkel keverik. A szövődmények elkerülése érdekében tanácsos a pufferkoncentrációt 25 mm alatt tartani.

4. Kémiai tisztaság: Mindig használjon nagy tisztaságú kromatográfiás minőségű puffereket a szennyeződés megelőzésére és a megbízható eredmények biztosítására. A szennyeződések váratlan interakciókhoz és variabilitáshoz vezethetnek a retenciós időkben.

Hőmérsékleti hatások: A hőmérséklet befolyásolhatja a puffer oldatok pH -ját. Fontos, hogy a puffereket következetes hőmérsékleten készítsük és tároljuk a hatékonyságuk fenntartása érdekében.

Szeretné tudni 50 választ a HPLC üvegekről, kérjük, ellenőrizze ezt a cikket: 50 leggyakrabban feltett kérdéseket a HPLC üvegekről

Gyakorlati tippek a puffer előkészítéséhez

Előkészítési módszer: A pufferek előállíthatók savas és bázikus komponensek ekvimoláris mennyiségének keverésével, vagy egy bázikus oldat savval történő titrálásával. Kerülje a pH beállítását a szerves oldószerek hozzáadása után, mivel ez következetes eredményekhez vezethet.

Friss megoldások: Készítsen rendszeresen friss puffer -oldatokat a mikrobiális növekedés minimalizálása és az alkatrészek lebomlása érdekében, amelyek befolyásolhatják a kromatográfiás teljesítményt.

A korrózió elkerülése: Bizonyos pufferek, például a citrát, korrodálhatják a HPLC rendszerek rozsdamentes acél alkatrészeit. Az ilyen pufferek használata után biztosítsa a rendszer alapos öblítését a sérülések elkerülése érdekében.

Következtetés

A HPLC mobilfázisának megfelelő puffer kiválasztása kritikus jelentőségű a megbízható és reprodukálható eredmények eléréséhez. Vegye figyelembe a pH -t, a puffer típusát, a koncentrációt és a tisztaságot, amikor kiválasztja. Ezen iránymutatások betartásával optimalizálhatja a HPLC módszerét a minták hatékony elkülönítéséhez és elemzéséhez.

Szeretné tudni a HPLC via -ek árát, kérjük, ellenőrizze ezt a cikket: HPLC VIALS ára: 50 leggyakrabban feltett kérdéseket

Előző:

Hogyan lehet megfelelően használni a COD kémcsöveket a vízminőség -teszteléshez?

Következő:

Hogyan lehet elkerülni az áttörést a fecskendőszűrőkben