Semua yang perlu Anda ketahui tentang persiapan sampel HPLC

Persiapan sampel adalah langkah penting dalam analisis HPLC karena sejumlah alasan.

Meminimalkan gangguan:Sampel sering mengandung kotoran dan komponen matriks yang dapat mengganggu deteksi analit target. Teknik persiapan sampel yang efektif dapat membantu menghilangkan zat -zat yang tidak diinginkan ini dan meningkatkan akurasi analitik.

Tingkatkan pemulihan analit:Persiapan yang tepat meningkatkan pemulihan analit dan memastikan bahwa hasilnya mencerminkan konsentrasi aktual dari sampel asli. Ini sangat penting untuk analisis jejak di mana analit hadir pada konsentrasi rendah.

Bentuk puncak yang ditingkatkan:Sampel yang disiapkan dengan benar membantu membentuk puncak simetris dan terdefinisi dengan baik dalam kromatogram. Ini penting untuk kuantifikasi yang akurat. Persiapan sampel yang tidak tepat dapat menghasilkan tailing dan perluasan puncak, yang memperumit interpretasi data.

Lindungi sistem HPLC Anda:Kontaminan dalam sampel Anda dapat merusak kolom dan komponen lain dalam sistem HPLC Anda, yang mengarah pada peningkatan biaya perawatan dan waktu henti. Persiapan sampel yang tepat mengurangi risiko penyumbatan sistem dan keausan.

Langkah pertama dalam persiapan sampel adalah mengumpulkan sampel Anda dengan benar. Ini termasuk:

Gunakan wadah bersih:Selalu gunakan wadah bersih dan inert untuk menghindari kontaminasi. Direkomendasikan wadah plastik kaca atau berkualitas tinggi.

Hindari kontaminasi:Gunakan sarung tangan dan alat bersih untuk mencegah kontaminasi dari sebum dan sumber lainnya.

Pelabelan yang tepat:Label sampel dengan jelas untuk menghindari campuran dan memastikan keterlacakan.

Sampel homogenisasi memastikan homogenitas, yang penting untuk hasil yang dapat direproduksi. Teknik homogenisasi meliputi:

Homogenisasi mekanis: Mencampur sampel padat atau semi-padat menggunakan pengaduk atau homogenizer.

Homogenisasi ultrasonik:Aplikasi USG untuk membubarkan partikel dalam sampel cair.

Bergantung pada konsentrasi analit yang diharapkan, sampel mungkin perlu diencerkan atau terkonsentrasi. Ini dapat dicapai dengan:

Pengenceran:Encerkan sampel ke konsentrasi yang diinginkan menggunakan pelarut yang sama dengan fase gerak.

Konsentrasi:Analisis dapat terkonsentrasi menggunakan teknik seperti penguapan atau ekstraksi fase padat (SPE).

Filtrasi sangat penting untuk menghilangkan materi partikulat yang dapat menyumbat kolom HPLC. Metode penyaringan umum termasuk ：

Filtrasi membran:MenggunakanFilter 0,2μm atau 0,45μmuntuk menghilangkan partikel. Biasanya filter poliethersulfone (PES) atau nilon digunakan.

Prefiltrasi:Untuk sampel dengan kandungan partikel tinggi, prefiltrasi melalui filter ukuran pori yang lebih besar dapat mencegah penyumbatan.


50 pertanyaan yang sering diajukan tentang filter jarum suntik, pastikan untuk memeriksa artikel informatif ini: Topik "Filter Syringe" 50 Pertanyaan yang Sering Diajukan

Pertimbangkan untuk menstabilkan sampel Anda untuk mencegah degradasi analit.

Penyesuaian pH:Menyesuaikan pH dapat membantu menstabilkan analit tertentu. Misalnya, senyawa asam mungkin memerlukan pengasaman untuk mencegah degradasi.

Additives:Menambahkan penstabil atau pengawet dapat membantu mempertahankan integritas sampel selama penyimpanan dan analisis.

Penting untuk memilih pelarut yang benar untuk melarutkan sampel Anda dan memastikan kompatibilitas dengan sistem HPLC Anda. Pertimbangkan yang berikut:

Polaritas pelarut:Untuk mencapai pembubaran total, pelarut harus sesuai dengan polaritas analit.

Kompatibilitas Fase Seluler: Gunakan pelarut yang kompatibel dengan fase seluler untuk meminimalkan gangguan potensial.

7. Persiapan Standar

Persiapan standar kalibrasi sangat penting untuk mengukur analit dalam sampel. Ini termasuk:

Persiapan Kurva Kalibrasi:Siapkan serangkaian konsentrasi analit yang diketahui untuk menetapkan kurva kalibrasi untuk kuantifikasi.

Gunakan pelarut yang sama:Untuk mempertahankan konsistensi, selalu persiapkan standar Anda menggunakan pelarut dan kondisi yang sama seperti sampel Anda.

Ikuti Prosedur Operasi Standar (SOPS):Menetapkan dan mematuhi SOP untuk persiapan sampel untuk memastikan konsistensi dan reproduktifitas.

Gunakan reagen dan pelarut berkualitas tinggi:Selalu gunakan pelarut tingkat HPLC dan reagen dengan kemurnian tinggi untuk meminimalkan kontaminasi.

Jaga agar ruang kerja Anda bersih:Jaga agar area persiapan sampel Anda bersih dan terorganisir untuk mengurangi risiko kontaminasi.

Dokumentasikan semuanya:Simpan catatan terperinci tentang prosedur persiapan sampel Anda, termasuk penyimpangan apa pun dari protokol standar.

Validasi Metode:Validasi metode persiapan sampel secara teratur untuk memastikan mereka memberikan hasil yang andal dan dapat direproduksi.

Bentuk puncak yang buruk:Jika puncaknya luas atau tailing, ini dapat menunjukkan pembubaran yang tidak lengkap atau adanya partikulat. Pastikan sampel Anda dicampur dan disaring secara menyeluruh.

Puncak Hantu:Puncak hantu dapat disebabkan oleh kotoran dalam pelarut atau sampel, menggunakan pelarut dengan kemurnian tinggi dan memastikan bahwa semua barang pecah belah dan peralatan bersih.

Sensitivitas Rendah:Jika sensitivitas rendah, pertimbangkan mengoptimalkan metode ekstraksi Anda atau meningkatkan konsentrasi analit Anda.

Kolom Mengumbing:Sering menyumbat dapat menunjukkan bahwa sampel Anda mengandung terlalu banyak partikel atau tidak disaring secara memadai. Evaluasi ulang proses penyaringan Anda dan pertimbangkan pra-filtrasi.

Hasil yang tidak konsisten:Variasi dalam hasil dapat berasal dari persiapan sampel yang tidak konsisten. Standarisasi semua prosedur dan pastikan bahwa personel yang terlibat dalam persiapan sampel dilatih dengan benar.

Ketika tuntutan analitik meningkat, laboratorium mengadopsi teknik persiapan sampel yang lebih maju untuk meningkatkan efisiensi dan akurasi:

SPE adalah teknik yang banyak digunakan yang memungkinkan ekstraksi selektif analit dari matriks yang kompleks. Ini melibatkan melewati sampel cair melalui bahan adsorben padat yang mempertahankan analit target sambil memungkinkan kotoran untuk melewati.

LLE adalah teknik yang memisahkan analit berdasarkan kelarutannya dalam dua cairan yang tidak bercampur. Metode ini efektif dalam memisahkan senyawa dengan polaritas yang berbeda dan sering digunakan dalam analisis lingkungan dan farmasi.

Quechers adalah metode yang populer untuk menyiapkan sampel makanan dan lingkungan yang menggabungkan langkah-langkah ekstraksi dan pembersihan menjadi satu proses, menjadikannya efisien dan hemat biaya.

Throughput dan reproduksibilitas dapat secara signifikan ditingkatkan dengan sistem persiapan sampel otomatis, yang dapat melakukan tugas -tugas seperti pengenceran, penyaringan, dan SPE dengan intervensi manusia yang minim, sehingga mengurangi risiko kesalahan.


Ingin tahu lebih banyak tentang persiapan sampel HPLC, silakan periksa artikel ini: Solusi persiapan sampel HPLC untuk hasil terbaik

Persiapan sampel HPLC adalah langkah penting yang secara signifikan dapat memengaruhi akurasi dan keandalan hasil analitik. Dengan mengikuti praktik terbaik, menggunakan teknik yang tepat, dan mengatasi masalah umum, laboratorium dapat mengoptimalkan proses persiapan sampel dengan mengadopsi teknik dan teknologi canggih seiring dengan meningkatnya kebutuhan analitik. Otomasi akan lebih meningkatkan efisiensi dan efektivitas analisis HPLC. Persiapan sampel yang tepat tidak hanya meningkatkan kualitas hasil, tetapi juga melindungi sistem HPLC, memastikan keandalan dan kinerja jangka panjang.