Geriausio HPLC mobiliosios fazės pasirinkimas: vadovas: vadovas
Naujienos
Kategorijos
Informacija

Kuris buferis yra geriausias jūsų HPLC mobiliajai fazei?

2024 m. Rugsėjo 9 d
Norint pasiekti optimalų savo HPLC mobiliosios fazės tinkamą buferio pasirinkimą, norint pasiekti optimalų atskyrimą ir analizę pavyzdžiai. Buferiai padeda išlaikyti stabilų pH, kuris yra būtinas norint kontroliuoti jūsų analizės jonizacijos būseną, taip paveikiant jų sulaikymo laiką ir didžiausią formą. Žemiau pateikiama išsami apžvalga, kaip pasirinkti geriausią jūsų HPLC programos buferį.

Ar žinote apie HPLC mėginių paruošimą? Spustelėkite šį straipsnį, kad sužinotumėte daugiau: „Viskas, ką reikia žinoti apie HPLC mėginių paruošimą“


Buferio pasirinkimo svarba

Buferis yra tirpalas, kurio pH nesikeičia pridėjus nedidelį kiekį rūgšties ar bazės. Remiantis jų sudėtimi, buferius galima klasifikuoti kaip rūgštines arba bazines. Buferio veiksmingumą lemia jo PKA, kuris idealiu atveju turėtų būti ± 1 pH vienetu, kuris yra norimo mobiliojo fazės pH, kad būtų optimali buferio pajėgumas.

Pagrindiniai veiksniai, į kuriuos reikia atsižvelgti

1.PH Diapazonas: Mobiliosios fazės pH turėtų būti bent 2 pH vienetai nuo analitės PKA. Tai padeda slopinti rūgščių ar pagrindinių analizių jonizaciją, maksimaliai padidinti jų sulaikymą kolonoje. Pvz., Jei analitė yra silpna rūgštis, kurios PKA yra 4,5, naudojant mobilią fazę, kurios pH yra apie 2,0, būtų išlaikyta jos neonizuotoje būsenoje, padidindamas sulaikymą.

2.BUFFER TIPO: Įprasti buferiai, naudojami HPLC, apima:

Fosfato buferiai: veiksmingi pH diapazone nuo 2,0 iki 8,0, fosfato buferiai yra plačiai naudojami dėl jų stabilumo ir suderinamumo su daugeliu analizių. Jie ypač tinka LC-UV programoms.


Acetato buferiai: Jie taip pat populiarūs LC-UV tyrimams ir gali būti naudojami panašiuose pH diapazonuose kaip fosfato buferiai.

Lakieji buferiai: LC-MS pritaikymui teikiama pirmenybė nepastovūs buferiai, tokie kaip formatas, acetatas ir amonio bikarbonatas, nes juos galima lengvai pašalinti masės spektrometrijos proceso metu.

3.Buferio koncentracija: tipiška pradinė buferių koncentracija HPLC yra nuo 25 iki 50 mm. Didesnė koncentracija gali pagerinti didžiausią formą ir efektyvumą, tačiau taip pat gali sukelti kritulius, sumaišius su organiniais tirpikliais. Norint išvengti komplikacijų, patartina išlaikyti buferio koncentraciją žemiau 25 mm.

4.Chemical Grynumas: Visada naudokite aukšto grynumo chromatografinio lygio buferius, kad išvengtumėte užteršimo ir užtikrintumėte patikimus rezultatus. Priemaišos gali sukelti netikėtą sąveiką ir susilaikymo laiko kintamumą.

Temperatūros poveikis: Temperatūra gali turėti įtakos buferinių tirpalų pH. Svarbu paruošti ir laikyti buferius pastovioje temperatūroje, kad būtų išlaikytas jų efektyvumas.

Norite sužinoti 50 atsakymų apie HPLC buteliukus, patikrinkite šį straipsnį:
50 dažniausiai užduodami klausimai apie „HPLC buteliukus“

Praktiniai buferio paruošimo patarimai

Paruošimo metodas: Buferius galima paruošti sumaišius ekvivalentinius kiekius jų rūgščių ir pagrindinių komponentų arba titruojant pagrindinį tirpalą rūgštimi. Venkite koreguoti pH pridėjus organinių tirpiklių, nes tai gali sukelti nenuoseklių rezultatų.

Švieži sprendimai: Reguliariai paruoškite šviežius buferinius sprendimus, kad būtų sumažintas komponentų mikrobų augimas ir skilimas, o tai gali paveikti chromatografinę veikimą.

Vengimas korozijos: kai kurie buferiai, tokie kaip citratas, gali korozuoti HPLC sistemų nerūdijančio plieno komponentus. Norėdami išvengti žalos, užtikrinkite kruopštų sistemos praplovimą.

Išvada

Norint pasiekti patikimus ir atkuriamus rezultatus, labai svarbu pasirinkti tinkamą HPLC mobiliosios fazės buferį. Pasirinkdami apsvarstykite pH, buferio tipą, koncentraciją ir grynumą. Vykdydami šias gaires, galite optimizuoti savo HPLC metodą, kad galėtumėte efektyviai atskirti ir analizuoti savo pavyzdžius.

Norite sužinoti HPLC buteliukų kainą, patikrinkite šį straipsnį: HPLC buteliukų kaina: 50 dažniausiai užduodamų klausimų
Užklausa