De beste buffer kiezen voor uw HPLC -mobiele fase: een gids
Nieuws
categorieën
Onderzoek

Welke buffer is het beste voor uw mobiele HPLC -fase?

9 september 2024
Het selecteren van de juiste buffer voor uw HPLC -mobiele fase is van cruciaal belang om optimale scheiding en analyse van uw monsters. Buffers helpen bij het handhaven van een stabiele pH, wat essentieel is voor het beheersen van de ionisatietoestand van uw analyten, waardoor hun retentietijd en piekvorm beïnvloeden. Hieronder is een gedetailleerd overzicht van hoe u de beste buffer voor uw HPLC -toepassing kunt selecteren.

Kent u HPLC -monsterbereiding? Klik op dit artikel voor meer informatie: "Alles wat u moet weten over HPLC -monsterbereiding"


Belang van bufferselectie

Een buffer is een oplossing waarvan de pH niet verandert na het toevoegen van een kleine hoeveelheid zuur of basis. Op basis van hun samenstelling kunnen buffers worden geclassificeerd als zuur of basic. De effectiviteit van een buffer wordt bepaald door zijn PKA, die idealiter binnen ± 1 pH -eenheid van de gewenste pH van de mobiele fase moet zijn voor een optimale buffercapaciteit.

Belangrijke factoren om te overwegen

1.PH -bereik: de pH van de mobiele fase moet ten minste 2 pH -eenheden verwijderd zijn van de PKA van de analyt. Dit helpt om ionisatie van zure of basisanalyten te onderdrukken, waardoor hun retentie op de kolom wordt gemaximaliseerd. Als de analyt bijvoorbeeld een zwak zuur is met een PKA van 4,5, zou het gebruik van een mobiele fase met een pH rond 2,0 deze in een niet-geïoniseerde toestand houden, waardoor het retentie wordt verbeterd.

2. Buffer Type: Common Buffers gebruikt in HPLC omvat:

Fosfaatbuffers: effectief in het pH -bereik van 2,0 tot 8,0, fosfaatbuffers worden veel gebruikt vanwege hun stabiliteit en compatibiliteit met veel analyten. Ze zijn met name geschikt voor LC-UV-toepassingen.


Acetaatbuffers: deze zijn ook populair voor LC-UV-testen en kunnen worden gebruikt in vergelijkbare pH-bereiken als fosfaatbuffers.

Vluchtige buffers: voor LC-MS-toepassingen hebben vluchtige buffers zoals formaat, acetaat en ammoniumbicarbonaat de voorkeur omdat ze gemakkelijk kunnen worden verwijderd tijdens het massaspectrometrieproces.

3. Buffer-concentratie: een typische startconcentratie voor buffers in HPLC ligt tussen 25-50 mM. Hogere concentraties kunnen de piekvorm en efficiëntie verbeteren, maar kunnen ook leiden tot neerslag wanneer gemengd met organische oplosmiddelen. Het is raadzaam om de bufferconcentratie onder 25 mm te behouden om complicaties te voorkomen.

4. Chemische zuiverheid: gebruik altijd buffers met een hoog zuivere chromatografische kwaliteit om verontreiniging te voorkomen en betrouwbare resultaten te garanderen. Onzuiverheden kunnen leiden tot onverwachte interacties en variabiliteit in retentietijden.

Temperatuureffecten: de temperatuur kan de pH van bufferoplossingen beïnvloeden. Het is belangrijk om buffers op een consistente temperatuur voor te bereiden en op te slaan om hun effectiviteit te behouden.

Wil je 50 antwoorden over HPLC -flesjes weten, kijk dan op dit artikel:
50 meest gestelde vragen over HPLC -flesjes

Praktische tips voor bufferbereiding

Bereidingsmethode: buffers kunnen worden bereid door equimolaire hoeveelheden van hun zure en basiscomponenten te mengen of door een basisoplossing met zuur te titreren. Vermijd het aanpassen van de pH na het toevoegen van organische oplosmiddelen, omdat dit kan leiden tot inconsistente resultaten.

Verse oplossingen: Bereid regelmatig verse bufferoplossingen voor om de microbiële groei en afbraak van componenten te minimaliseren, die de chromatografische prestaties kunnen beïnvloeden.

Corrosie vermijden: bepaalde buffers, zoals citraat, kunnen roestvrijstalen componenten van HPLC -systemen corroderen. Zorg ervoor dat het systeem een ​​grondige doorspoelen na het gebruik van dergelijke buffers om schade te voorkomen.

Conclusie

Het selecteren van de rechterbuffer voor uw mobiele HPLC -fase is van cruciaal belang om betrouwbare en reproduceerbare resultaten te bereiken. Beschouw pH, buffertype, concentratie en zuiverheid bij het selecteren. Door deze richtlijnen te volgen, kunt u uw HPLC -methode optimaliseren om uw monsters effectief te scheiden en te analyseren.

Wil je de prijs van HPLC -flesjes weten, kijk dan op dit artikel: HPLC flacons Prijs: 50 meest gestelde vragen
Navraag