Cromatografia lichidă de înaltă performanță (HPLC) este o tehnică analitică cheie folosită în laboratoare în domenii la fel de diverse precum farmaceutice, științele mediului și siguranța alimentelor. În lumea HPLC, există două categorii principale: HPLC analitic și HPLC preparativ. În timp ce ambele tehnici folosesc principii similare pentru a separa compuși, acestea sunt utilizate în scopuri diferite și au parametri de operare diferiți. Acest blog va explora diferențele dintre HPLC analitice și cele pregătitoare, inclusiv scopul, scala de funcționare, echipamente și aplicații.
Doriți să cunoașteți informații complete despre flacoanele HPLC, vă rugăm să verificați acest articol: Enciclopedia flacoanelor HPLC
Înțelegerea HPLC analitică
Definiție și scop
HPLC analitic se concentrează în principal pe separarea și identificarea compușilor dintr -un eșantion. Scopul principal este obținerea de informații calitative și cantitative despre componentele prezente într -un amestec. HPLC analitic este adesea utilizat pentru:
Analiza calitativă: identificarea componentelor unui eșantion.
Analiza cantitativă: determinarea concentrației unui compus specific într -un eșantion.
Scara de funcționare
HPLC analitic funcționează pe o scară mai mică, implicând de obicei injecții de probe de microlitru. Volumele utilizate sunt, în general, în intervalul de 1 până la 100 ul, permițând analizarea mai multor probe într -o singură rulare. Această scară mică este ideală pentru testarea de rutină și controlul calității.
Dimensiunea coloanei și dimensiunea particulelor
Coloanele utilizate în HPLC analitic au de obicei un diametru mic, de obicei în jur de 4,6 mm și sunt ambalate cu particule mici de fază staționară (3-5 μm). Această configurație permite o separare a compusului de înaltă rezoluție și eficientă, potrivită pentru o analiză detaliată.
Metode de detectare
HPLC analitic folosește o varietate de metode de detectare, inclusiv spectrometrie de masă vizibile UV, fluorescență și de masă. Alegerea detectorului depinde de natura analitului și de cerințele specifice ale analizei. Detectoarele nedistructive sunt adesea utilizate pentru a se asigura că eșantionul poate fi analizat fără pierderi semnificative.
Doriți să cunoașteți 50 de răspunsuri despre flacoanele HPLC, vă rugăm să verificați acest articol: 50 de întrebări cele mai frecvente pe flacoane HPLC
Înțelegerea HPLC pregătitoare
Definiție și scop
HPLC preparat, pe de altă parte, își propune să separe și să purifice compuși specifici de un amestec. Obiectivul principal este de a izola cantități suficiente din compusul țintă pentru analize sau utilizare suplimentară. Preparativ
HPLC este utilizat în mod obișnuit pentru următoarele aplicații:
Izolarea compusă: Extracția și purificarea compușilor specifici pentru cercetare sau aplicații industriale.
Pregătirea eșantionului: Pregătirea eșantioanelor pentru analiza sau formularea ulterioară.
Scara operațiunilor
HPLC preparativ este efectuat pe o scară mai mare decât HPLC analitic. Volumele de eșantion pot varia de la câțiva mililitri la mai mulți litri, în funcție de randamentul preconizat al compusului țintă. Această scară mai mare permite colectarea unor cantități suficiente de material purificat pentru o utilizare ulterioară.
Dimensiunea coloanei și dimensiunea particulelor
Coloanele utilizate pentru HPLC pregătitoare sunt semnificativ mai mari, de obicei variind de la 20 mm la 100 mm sau mai mare în diametru. Coloanele sunt ambalate cu particule de fază staționară mai mare (de obicei 10-20 µm) pentru a crește debitele și pentru a găzdui volume mai mari de eșantion. Acest design ajută la reducerea presiunii din spate și la obținerea unei separații eficiente a compușilor.
Metode de detectare
În HPLC preparativ, metodele de detectare pot diferi de cele utilizate în HPLC analitic. În timp ce detectoarele nedistructive sunt încă frecvente, sistemele pregătitoare folosesc adesea detectoare care sunt capabile să colecteze fracții pe baza unui profil de eluție. Aceasta permite izolarea compușilor specifici pe măsură ce se eluează din coloană.
Doriți să aflați mai multe despre aplicarea flacoanelor de cromatografie, vă rugăm să verificați acest articol:Cinci metode de curățare pentru flacoane HPLC
Diferențele cheie între HPLC analitic și pregătit
|
Caracteristică
|
HPLC analitic
|
HPLC preparativ
|
|
Scop
|
Analiză calitativă și cantitativă
|
Izolarea și purificarea compușilor
|
|
Scara de funcționare
|
La scară mică (µl volume)
|
La scară largă (ml până la volume)
|
|
Dimensiuni ale coloanei
|
Diametru mai mic (4,6 mm)
|
Diametru mai mare (20-100 mm)
|
|
Dimensiunea particulelor
|
Particule mai mici (3-5 um)
|
Particule mai mari (10-20 µm)
|
|
Debit
|
Debituri mai mici (0,1-5 ml \ / min)
|
Debituri mai mari (10-200 ml \ / min)
|
|
Metode de detectare
|
Detectoare nedistructive (UV, MS)
|
Colectarea fracției bazată pe profilul de eluție
|
Alegerea între HPLC analitic și pregătit
Atunci când alegeți între HPLC analitic și pregătit, luați în considerare următorii factori:
Scopul analizei: Determinați dacă obiectivul principal este de a analiza calitativ și cantitativ compușii sau de a izola compuși specifici pentru o utilizare ulterioară.
Cantitatea de eșantion: evaluați cantitatea de eșantion disponibilă. Dacă este disponibilă o cantitate mică de eșantion, HPLC analitic poate fi mai adecvat. În schimb, dacă este necesară o cantitate mare de eșantion, HPLC pregătitoare este o alegere mai bună.
Puritate și randament necesar: Luați în considerare puritatea și randamentul necesar al compusului țintă. HPLC preparativ își propune să maximizeze recuperarea unui compus specific, în timp ce HPLC analitic se concentrează pe furnizarea de informații detaliate despre compoziția eșantionului.
Resurse și echipamente: evaluați resursele disponibile, inclusiv echipamentele și bugetul. Sistemele HPLC pregătitoare tind să fie mai scumpe și necesită mai multe investiții în echipamente și costuri de operare.
Vrei să stăpânești pregătirea eșantionului HPLC? Vezi acest articol:Soluții de pregătire a eșantionului HPLC pentru cele mai bune rezultate.
Concluzie
Atât HPLC -ul analitic, cât și cea pregătitoare sunt tehnici valoroase în domeniul cromatografiei și fiecare are utilizări diferite în funcție de nevoile cercetătorilor și industriei. În timp ce HPLC analitic este ideal pentru analiza și cuantificarea detaliată a compușilor, HPLC preparativ este esențial pentru izolarea și purificarea compușilor specifici pentru aplicații suplimentare. Înțelegerea diferențelor dintre aceste două tehnici va ajuta cercetătorii să ia decizii în cunoștință de cauză, să își optimizeze fluxurile de lucru și să obțină rezultate exacte și fiabile în analizele lor. Pe măsură ce tehnologia HPLC continuă să avanseze, atât metodele analitice, cât și cele pregătitoare vor rămâne o parte integrantă a cercetării științifice de succes de tot felul.
Engleză
chinez
