Alegerea celui mai bun tampon pentru faza mobilă HPLC: un ghid
Ştiri
Categorii
COMPLETĂ

Care tampon este cel mai bun pentru faza dvs. mobilă HPLC?

9 septembrie 2024
Selectarea tamponului potrivit pentru faza mobilă HPLC este esențială pentru realizarea unei separații și analiza optimă a dvs. probe. Tampoarele ajută la menținerea unui pH stabil, care este esențial pentru controlul stării de ionizare a analitelor dvs., afectând astfel timpul de retenție și forma de vârf. Mai jos este o imagine de ansamblu detaliată a modului de selectare a celui mai bun tampon pentru aplicația dvs. HPLC.

Știți despre pregătirea eșantionului HPLC? Faceți clic pe acest articol pentru a afla mai multe: „Tot ce trebuie să știți despre pregătirea eșantionului HPLC”


Importanța selecției tamponului

Un tampon este o soluție a cărei pH nu se schimbă după adăugarea unei cantități mici de acid sau bază. Pe baza compoziției lor, tampoanele pot fi clasificate ca acid sau de bază. Eficacitatea unui tampon este determinată de PKA, care, în mod ideal, ar trebui să se afle într -o unitate de ± 1 pH a pH -ului dorit al fazei mobile pentru o capacitate de tamponare optimă.

Factori cheie de luat în considerare

1.PH Interval: PH -ul fazei mobile ar trebui să fie la cel puțin 2 unități de pH distanță de PKA a analitului. Acest lucru ajută la suprimarea ionizării analitelor acide sau de bază, maximizând retenția lor pe coloană. De exemplu, dacă analitul este un acid slab cu un PKA de 4,5, utilizarea unei faze mobile cu un pH în jur de 2,0 l-ar păstra într-o stare neionizată, sporind retenția.

2. Tipul bufferului: tampoanele obișnuite utilizate în HPLC includ:

Tampoane de fosfat: eficiente în intervalul de pH de la 2,0 până la 8,0, tampoanele fosfat sunt utilizate pe scară largă datorită stabilității și compatibilității lor cu mulți analite. Sunt deosebit de potrivite pentru aplicațiile LC-UV.


Tampoane de acetat: Acestea sunt populare și pentru testele LC-UV și pot fi utilizate în intervale similare de pH ca tampoane de fosfat.

Tampoarele volatile: Pentru aplicațiile LC-MS, sunt preferate tampoane volatile precum format, acetat și bicarbonat de amoniu, deoarece pot fi îndepărtate cu ușurință în timpul procesului de spectrometrie de masă.

3. Concentrația bufferului: O concentrație de pornire tipică pentru tampoane în HPLC este cuprinsă între 25-50 mM. Concentrații mai mari pot îmbunătăți forma de vârf și eficiența, dar pot duce, de asemenea, la precipitații atunci când sunt amestecate cu solvenți organici. Este recomandabil să mențineți concentrația tampon sub 25 mM pentru a evita complicațiile.

4. Puritate chimică: Utilizați întotdeauna tampoane de calitate cromatografică de înaltă puritate pentru a preveni contaminarea și pentru a asigura rezultate fiabile. Impuritățile pot duce la interacțiuni neașteptate și variabilitate în timpii de retenție.

Efecte de temperatură: temperatura poate influența pH -ul soluțiilor tampon. Este important să pregătiți și să stocați tampoane la o temperatură constantă pentru a le menține eficacitatea.

Doriți să cunoașteți 50 de răspunsuri despre flacoanele HPLC, vă rugăm să verificați acest articol:
50 de întrebări cele mai frecvente pe flacoane HPLC

Sfaturi practice pentru pregătirea tamponului

Metoda de preparare: tampoanele pot fi preparate amestecând cantități echimolare ale componentelor lor acide și de bază sau prin titrarea unei soluții de bază cu acid. Evitați ajustarea pH -ului după adăugarea de solvenți organici, deoarece acest lucru poate duce la rezultate inconsistente.

Soluții proaspete: Pregătiți în mod regulat soluții tampon proaspete pentru a minimiza creșterea microbiană și degradarea componentelor, ceea ce poate afecta performanța cromatografică.

Evitarea coroziunii: anumite tampoane, cum ar fi citratul, pot coroda componentele din oțel inoxidabil ale sistemelor HPLC. Asigurați -vă spălarea completă a sistemului după utilizarea unor astfel de tampoane pentru a preveni deteriorarea.

Concluzie

Selectarea tamponului potrivit pentru faza mobilă HPLC este esențială pentru obținerea unor rezultate fiabile și reproductibile. Luați în considerare pH -ul, tipul tampon, concentrația și puritatea atunci când selectați. Urmând aceste orientări, puteți optimiza metoda HPLC pentru a separa eficient și a analiza probele.

Doriți să cunoașteți prețul flacoanelor HPLC, vă rugăm să verificați acest articol: Prețul flacoanelor HPLC: 50 de întrebări cele mai frecvente
Anchetă