Všetko, čo potrebujete vedieť o príprave vzorky HPLC

Príprava vzorky je kritickým krokom v HPLC analýze z mnohých dôvodov.

Minimalizovať rušenia:Vzorky často obsahujú nečistoty a zložky matrice, ktoré môžu interferovať s detekciou cieľových analytov. Efektívne techniky prípravy vzoriek môžu pomôcť odstrániť tieto nežiaduce látky a zlepšiť analytickú presnosť.

Zlepšenie regenerácie analytu:Správna príprava zlepšuje výťažnosť analytu a zabezpečuje, aby výsledky odrážali skutočnú koncentráciu pôvodnej vzorky. Toto je obzvlášť dôležité pre stopovú analýzu, kde sú analyty prítomné v nízkych koncentráciách.

Vylepšený vrcholový tvar:Správne pripravené vzorky pomáhajú vytvárať symetrické a dobre definované píky v chromatograme. To je nevyhnutné pre presnú kvantifikáciu. Nesprávna príprava vzorky môže viesť k zúženiu a rozšíreniu píkov, čo komplikuje interpretáciu údajov.

Chráňte svoj HPLC systém:Kontaminanty vo vzorke môžu poškodiť kolóny a ďalšie komponenty vo vašom systéme HPLC, čo vedie k zvýšeným nákladom na údržbu a prestojom. Správna príprava vzorky znižuje riziko upchatia a opotrebovania systému.

Prvým krokom pri príprave vzorky je správny odber vzorky. To zahŕňa:

Používajte čisté nádoby:Vždy používajte čisté, inertné nádoby, aby ste zabránili kontaminácii. Odporúčajú sa sklenené alebo vysokokvalitné plastové nádoby.

Vyhnite sa kontaminácii:Používajte rukavice a čisté nástroje, aby ste zabránili kontaminácii kožným mazom a inými zdrojmi.

Správne označenie:Vzorky jasne označte, aby ste sa vyhli zámene a zabezpečili vysledovateľnosť.

Homogenizácia vzorky zabezpečuje homogenitu, ktorá je dôležitá pre reprodukovateľné výsledky. Techniky homogenizácie zahŕňajú:

Mechanická homogenizácia: Miešanie tuhých alebo polotuhých vzoriek pomocou miešadla alebo homogenizátora.

Ultrazvuková homogenizácia:Aplikácia ultrazvuku na rozptýlenie častíc v kvapalnej vzorke.

V závislosti od očakávanej koncentrácie analytov môže byť potrebné vzorky zriediť alebo zahustiť. Dá sa to dosiahnuť:

Riedenie:Vzorku zrieďte na požadovanú koncentráciu použitím rovnakého rozpúšťadla ako mobilná fáza.

koncentrácia:Analyty sa môžu koncentrovať pomocou techník, ako je odparovanie alebo extrakcia tuhou fázou (SPE).

Filtrácia je nevyhnutná na odstránenie pevných častíc, ktoré môžu upchať HPLC kolóny. Bežné metódy filtrovania zahŕňajú:

Membránová filtrácia:Použite0,2 µm alebo 0,45 µm filtrena odstránenie častíc. Typicky sa používajú polyétersulfónové (PES) alebo nylonové filtre.

Predfiltrácia:Pri vzorkách s vysokým obsahom častíc môže predfiltrácia cez filter s väčšou veľkosťou pórov zabrániť upchávaniu.


50 často kladených otázok o filtroch striekačiek, nezabudnite si prečítať tento informatívny článok: Téma "filter injekčnej striekačky" 50 často kladených otázok

Zvážte stabilizáciu vzorky, aby ste zabránili degradácii analytu.

Úprava pH:Úprava pH môže pomôcť stabilizovať určité analyty. Napríklad kyslé zlúčeniny môžu vyžadovať okyslenie, aby sa zabránilo degradácii.

Prísady:Pridanie stabilizátorov alebo konzervačných látok môže pomôcť zachovať integritu vzorky počas skladovania a analýzy.

Je dôležité vybrať správne rozpúšťadlo na rozpustenie vzorky a zabezpečiť kompatibilitu s vaším systémom HPLC. Zvážte nasledovné:

Polarita rozpúšťadla:Aby sa dosiahlo úplné rozpustenie, rozpúšťadlo musí zodpovedať polarite analytu.

Kompatibilita s mobilnou fázou: Použite rozpúšťadlo, ktoré je kompatibilné s mobilnou fázou, aby sa minimalizovalo potenciálne rušenie.

7. Príprava noriem

Príprava kalibračných štandardov je nevyhnutná na kvantifikáciu analytu vo vzorke. To zahŕňa:

Príprava kalibračnej krivky:Pripravte sériu známych koncentrácií analytu na vytvorenie kalibračnej krivky na kvantifikáciu.

Použite rovnaké rozpúšťadlo:Aby ste zachovali konzistenciu, vždy pripravte svoje štandardy s použitím rovnakého rozpúšťadla a podmienok ako vaše vzorky.

Postupujte podľa štandardných operačných postupov (SOP):Stanovte a dodržiavajte SOP na prípravu vzoriek, aby ste zabezpečili konzistentnosť a reprodukovateľnosť.

Používajte vysokokvalitné činidlá a rozpúšťadlá:Na minimalizáciu kontaminácie vždy používajte rozpúšťadlá a vysoko čisté reagencie HPLC.

Udržujte svoj pracovný priestor čistý:Udržujte priestor na prípravu vzoriek čistý a usporiadaný, aby ste znížili riziko kontaminácie.

Všetko zdokumentujte:Uchovávajte podrobné záznamy o postupoch prípravy vzoriek vrátane akýchkoľvek odchýlok od štandardných protokolov.

Overiť metódy:Metódy prípravy vzoriek pravidelne overujte, aby ste sa uistili, že poskytujú spoľahlivé a reprodukovateľné výsledky.

Zlý tvar vrcholu:Ak sú píky široké alebo chvostové, môže to znamenať neúplné rozpustenie alebo prítomnosť častíc. Uistite sa, že vaša vzorka je dôkladne premiešaná a prefiltrovaná.

Vrcholy duchov:Duchovné vrcholy môžu byť spôsobené nečistotami v rozpúšťadle alebo vzorke, použite vysokočisté rozpúšťadlá a zabezpečte, aby boli všetky sklenené nádoby a zariadenia čisté.

Nízka citlivosť:Ak je citlivosť nízka, zvážte optimalizáciu metódy extrakcie alebo zvýšenie koncentrácie analytu.

Zanesenie stĺpca:Časté upchávanie môže naznačovať, že vaša vzorka obsahuje príliš veľa častíc alebo nie je dostatočne filtrovaná. Prehodnoťte svoj proces filtrácie a zvážte predfiltráciu.

Nekonzistentné výsledky:Rozdiely vo výsledkoch môžu prameniť z nekonzistentnej prípravy vzorky. Štandardizujte všetky postupy a zabezpečte, aby bol personál zapojený do prípravy vzoriek riadne vyškolený.

So zvyšujúcimi sa analytickými požiadavkami laboratóriá prijímajú pokročilejšie techniky prípravy vzoriek na zlepšenie účinnosti a presnosti:

SPE je široko používaná technika, ktorá umožňuje selektívnu extrakciu analytov z komplexných matríc. Zahŕňa prechod kvapalnej vzorky cez pevný adsorbčný materiál, ktorý zadržiava cieľový analyt a zároveň umožňuje, aby nečistoty prešli.

LLE je technika, ktorá oddeľuje analyty na základe ich rozpustnosti v dvoch nemiešateľných kvapalinách. Táto metóda je účinná pri separácii zlúčenín s rôznymi polaritami a často sa používa v environmentálnych a farmaceutických analýzach.

QuEChERS je populárna metóda na prípravu vzoriek potravín a životného prostredia, ktorá spája kroky extrakcie a čistenia do jedného procesu, vďaka čomu je efektívna a nákladovo efektívna.

Priepustnosť a reprodukovateľnosť možno výrazne zlepšiť automatickými systémami na prípravu vzoriek, ktoré dokážu vykonávať úlohy ako riedenie, filtrácia a SPE s minimálnym zásahom človeka, čím sa znižuje riziko chýb.


Ak sa chcete dozvedieť viac o príprave vzorky HPLC, pozrite si tento článok: Roztoky na prípravu vzoriek HPLC pre najlepšie výsledky

Príprava vzorky HPLC je kritickým krokom, ktorý môže významne ovplyvniť presnosť a spoľahlivosť analytických výsledkov. Dodržiavaním osvedčených postupov, používaním vhodných techník a riešením bežných problémov môžu laboratóriá optimalizovať proces prípravy vzoriek prijatím pokročilých techník a technológií podľa toho, ako sa analytické potreby vyvíjajú. Automatizácia ďalej zlepší účinnosť a účinnosť analýz HPLC. Správna príprava vzorky nielen zlepšuje kvalitu výsledkov, ale tiež chráni systém HPLC, čím zabezpečuje dlhodobú spoľahlivosť a výkon.