Vse, kar morate vedeti o pripravi vzorca HPLC

Priprava vzorca je kritičen korak v analizi HPLC iz več razlogov.

Zmanjšati motenje:Vzorci pogosto vsebujejo nečistoče in matrične komponente, ki lahko ovirajo odkrivanje ciljnih analitov. Učinkovite tehnike priprave vzorcev lahko pomagajo odstraniti te neželene snovi in ​​izboljšati analitično natančnost.

Izboljšajte obnovitev analita:Pravilna priprava izboljša okrevanje analita in zagotavlja, da rezultati odražajo dejansko koncentracijo prvotnega vzorca. To je še posebej pomembno za analizo v sledovih, kjer so analiti prisotni pri nizkih koncentracijah.

Izboljšana oblika vrha:Pravilno pripravljeni vzorci pomagajo tvoriti simetrične in dobro opredeljene vrhove v kromatogramu. To je bistveno za natančno količinsko določitev. Nepravilna priprava vzorca lahko povzroči največjo repo in širitev, kar zaplete razlago podatkov.

Zaščitite svoj sistem HPLC:Kontaminanti v vašem vzorcu lahko poškodujejo stolpce in druge komponente v vašem sistemu HPLC, kar vodi do večjih stroškov vzdrževanja in izpadov. Pravilna priprava vzorca zmanjšuje tveganje za zamašitev in obrabo sistema.

Prvi korak pri pripravi vzorca je pravilno zbiranje vzorca. To vključuje:

Uporabite čiste posode:Vedno uporabljajte čiste, inertne posode, da se izognete kontaminaciji. Priporočajo se steklene ali kakovostne plastične posode.

Izogibajte se kontaminaciji:Uporabite rokavice in čista orodja, da preprečite, da bi se onesnaženja iz sebuma in drugih virov.

Pravilno označevanje:Jasno označite vzorce, da se izognete mešanju in zagotovite sledljivost.

Homogenizacija vzorca zagotavlja homogenost, kar je pomembno za ponovljive rezultate. Tehnike homogenizacije vključujejo:

Mehanska homogenizacija: mešanje trdnih ali poltrdnih vzorcev z uporabo mešalnika ali homogenizatorja.

Ultrazvočna homogenizacija:Uporaba ultrazvoka za razprševanje delcev znotraj tekočega vzorca.

Odvisno od pričakovane koncentracije analitov bo morda treba vzorce razredčiti ali koncentrirati. To lahko dosežemo z:

DELUCIJA:Vzorec razredčite na želeno koncentracijo z istim topilom kot mobilna faza.

Koncentracija:Analite je mogoče koncentrirati s pomočjo tehnik, kot so izhlapevanje ali ekstrakcija trdne faze (SPE).

Filtracija je bistvenega pomena za odstranjevanje delcev, ki lahko zamašijo HPLC stolpce. Skupne metode filtriranja vključujejo:

Membranska filtracija:Uporaba0,2 µm ali 0,45 µm filtriodstraniti delce. Običajno se uporabljajo poliethersulfone (PES) ali najlonski filtri.

Prefiltracija:Pri vzorcih z visoko vsebnostjo delcev lahko prefiltracija skozi večji filter velikosti por prepreči zamašitev.


50 Pogosto zastavljena vprašanja o filtrih za brizgo, preverite ta informativni članek: Tema "filtra brizge" 50 Pogosto zastavljena vprašanja

Razmislite o stabilizaciji svojega vzorca, da preprečite razgradnjo analita.

Prilagoditev pH:Prilagoditev pH lahko pomaga stabilizirati nekatere analize. Na primer, kisle spojine lahko zahtevajo zakikanje, da se prepreči razgradnja.

Dodatki:Dodajanje stabilizatorjev ali konzervansov lahko pomaga ohraniti celovitost vzorca med skladiščenjem in analizo.

Pomembno je, da izberete pravilno topilo, da raztopite vzorec in zagotovite združljivost s sistemom HPLC. Razmislite o naslednjem:

Polarnost topila:Da bi dosegli popolno raztapljanje, se mora topilo ujemati s polarnostjo analita.

Združljivost mobilne faze: Uporabite topilo, ki je združljivo z mobilno fazo, da zmanjšate potencialne motnje.

7. Priprava standardov

Priprava kalibracijskih standardov je bistvenega pomena za količinsko določitev analita v vzorcu. To vključuje:

Priprava kalibracijske krivulje:Pripravite serijo znanih koncentracij analita, da določite kalibracijsko krivuljo za količinsko določitev.

Uporabite isto topilo:Če želite ohraniti doslednost, vedno pripravite svoje standarde z istim topilom in pogoji kot vzorci.

Sledite standardnim operativnim postopkom (SOP):Vzpostavite in se držite SOP -jev za pripravo vzorca, da zagotovite doslednost in obnovljivost.

Uporabite visokokakovostne reagente in topila:Za zmanjšanje kontaminacije vedno uporabite HPLC-topila in reagente visoke čistosti.

Naj bo vaš delovni prostor čist:Naj bo vaše območje za pripravo vzorca čisto in organizirano, da zmanjšate tveganje za kontaminacijo.

Dokumentirajte vse:Ohranite podrobne zapise o postopkih priprave vzorca, vključno z odstopanji od standardnih protokolov.

Preverjanje metod:Redno preverjajte metode priprave vzorcev, da zagotovite zanesljive in ponovljive rezultate.

Slaba vrsta vrha:Če so vrhovi široki ali repi, lahko to kaže na nepopolno raztapljanje ali prisotnost delcev. Prepričajte se, da je vaš vzorec temeljito mešan in filtriran.

Ghost Peaks:Ghost vrhovi lahko povzročijo nečistoče v topilu ali vzorcu, uporabljajo topila z visoko čistostjo in zagotovijo, da sta vsa steklovina in oprema čista.

Nizka občutljivost:Če je občutljivost nizka, razmislite o optimizaciji metode ekstrakcije ali povečanju koncentracije vašega analita.

Zamašitev stolpca:Pogosto zamašitev lahko kaže, da vaš vzorec vsebuje preveč delcev ali se ne filtrira ustrezno. Ponovno ocenite postopek filtracije in razmislite o predhodništvu.

Neskladni rezultati:Razlike v rezultatih lahko izhajajo iz neskladne priprave vzorca. Standardizirajte vse postopke in zagotovite, da je osebje, ki sodeluje pri pripravi vzorcev, pravilno usposobljeno.

Ko se analitične zahteve povečujejo, laboratoriji sprejemajo naprednejše tehnike priprave vzorcev za izboljšanje učinkovitosti in natančnosti:

SPE je široko uporabljena tehnika, ki omogoča selektivno ekstrakcijo analitov iz zapletenih matric. Vključuje prehod tekočega vzorca s trdnim adsorbentnim materialom, ki ohrani ciljni analit, hkrati pa omogoča, da se nečistoče prehajajo.

LLE je tehnika, ki ločuje analize, ki temelji na njihovi topnosti v dveh nemisnih tekočinah. Ta metoda je učinkovita pri ločevanju spojin z različnimi polarnostmi in se pogosto uporablja pri okoljski in farmacevtski analizi.

Quechers je priljubljena metoda za pripravo vzorcev hrane in okolja, ki združuje korake ekstrakcije in čiščenja v en postopek, zaradi česar je učinkovit in stroškovno učinkovit.

Pretok in obnovljivost je mogoče znatno izboljšati z avtomatiziranimi sistemi za pripravo vzorcev, ki lahko z minimalnim posegom človeka opravljajo naloge, kot so redčenje, filtracija in SPE, s čimer zmanjša tveganje za napake.


Želite vedeti več o pripravi vzorca HPLC, preverite ta članek: HPLC Rešitve za pripravo vzorcev za najboljše rezultate

Priprava vzorca HPLC je ključni korak, ki lahko znatno vpliva na natančnost in zanesljivost analitičnih rezultatov. Z upoštevanjem najboljših praks, z uporabo ustreznih tehnik in reševanjem pogostih težav lahko laboratoriji optimizirajo postopek priprave vzorcev s sprejetjem naprednih tehnik in tehnologij, ko se razvijajo analitične potrebe. Avtomatizacija bo še izboljšala učinkovitost in učinkovitost analiz HPLC. Pravilna priprava vzorca ne samo izboljša kakovost rezultatov, ampak tudi ščiti sistem HPLC, kar zagotavlja dolgoročno zanesljivost in zmogljivost.